Способ получения полипептидов

 

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН Ия

Союз Советских

Социалистических

Республик (t t) 577с) 75 (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 26.03.75 (21) 2127597/04 (5! } М. Кл.

С 07 С 103/52 У/ А 61 К 31/3 95 (23) Прноритет— (31) 34161/74;

10878/75 (32) 26.03.74;

24.01.75 (33) Яп ония

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР ао делам изааретеннй и открытий (43) Опубликовано25.10.77.Бюллетень № 39 (53) УДК 5.17.96 4,4. .О7(сж8.8} (45} Дата опубликования описания 11.11.77

Иностранцы

Мосахикэ Фудзино, Мицухиро Вакимасу, Сигехися Тякетэми и Эйичиро Исикава (Япония) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Такеда Кемикал Индастриз Лтд (Япония) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ

Изобретение относится к способу получения полипептидов, которые могут найти применение для лечения недостаточности липидного и углеводного обмена в частности для лечения сахарного диабета.

В органической химии известны различные приемы и методы конденсации, применяемые для образования пептидной связи, например карбодимидный, метод активирэванных эфиров, твердофазный синтез.

Использовав известные методы синтеза, варьируя комбинации защищенной и активированной форм карбэксильной и аминогрупп в исходных соединениях, получают новые полипептиды, обладающие ценными фармакэ15 логическими свойствами.

Предлагается способ получения полипеп — тидов обшей формулы

R — А g — R — Phe --Phe --В

20 где Я вЂ” атом водорода или остатск основной или нейтральной аминэкислоты;

R — нейтральный яминокислотный оста2 ток;

}(Н, Т5 Р— NH, остаток тирэзиль 25

3 ного пептидя, содержащего в своем составе от 1 до 5 яминокислотных остатков, или остаток амида тирозпльного пептида прп условии, чтэ, когда К„ представляет собой атом водорода, R сэо уст РРО, заключающийся в том, что аминокислоту, соответствующую R, или аргинин в том случае, когда К представляет собой ятэк1 вэдорода, или пептидный фрагмент пэлипептида указанной формулы, содержащий амин»кислотный остаток R или аргинильную груц ( пу в Т0М случае, когда Р„представляет собой атом водорода, в качестве:Р -KoHцевой аминокислоты, конденсируют с недостающим фрагментом полипептида указанной формулы, причем каждое из исходных соединений может быть защищено по своим аминс- и карбокспльным группам, которые не должны принимать участия в конденсации, и может быть активнровано по тем амино- или карбэксильным группам, которые непосредственно участвуют в указанной реакции конденсацп;„ и после завершения конденсации эти группы удаляют из полученного лолипептидногэ продукта.

577075

Для обозначения аминокислот, пептидов, активирующих и защитных группировок и реагентов, используемых для активации и защиты аминокислот и пептидов, применяк>тся следукядие сокращения: с — А OU -аминомасляная кислота; — АЬи — p --аминомасляная кислота; — Ac.Op- " -аминокапроновая кислота;

Мц-аланин; p - ИО -аланин; Arp -аргинин; 8 - A%et -аминовалериановая кислота; 0(., )" - );) дЬ dL, - -диаминомасляная кислота; 6(y -глицин (гликокол) „А" —

-гистидин; L

-трет-амилоксикарбонильная группа;  —

-бензиловый эфир; DOc: N, N --дициклэгексилкарбодиимид; г(ОН В вЂ” и -окси-5-норбэрнен-2,3-дикарбоксимид; О Вт. F -сложный бензиловый эфир; OD М Р -2,4-динитрофенилэвый эфир 0 E l этиловый эфир„ О)(В -эфир HG основе окси-5-карборнен-2,3-дикарбоксимиАа; Dpcp -пентахлорфенилэвый эфир; Ocu—

- И -оксисукцинимидный эфир; ОЮо -трет-бутиловый эфир; Tas -тозильная группа; -бензилоксикарбонильная группа; ВОС

-трет -бутилоксикарбонильная группа.

Когда В представляет атом водорода, группировка Я„ - Arg обозначает следующую аргинильную группу

ЯЯФ 3

МН2

Термин аминокислотный остаток" подразумеваетт группировку, способную образовывать пептидную связь, например группу, представляющую собой аминокислоту, лищенную одного или обоих атомов вэдорэда от аминогруппы (или аминэгруппы в случае иминокарбоновых кислот) и от гидрэксила карбоксильнэй группы.

Основные или нейтральные аминокислоты, обозначенные R, содержат в предпочтительном варианте 2-10 атомов углерода.

В Качестве примера основных аминокислот, использованных для получения предлагаемых полицептидов, можно привести такие аминокислоты, как 0(., P -диаминэпропионовая кислота,; ciL f3 -диаминэмасляная кислота, аргинин, лизин и гистидип. В качестве примера нейтральных аминокислот, подразумеваемых пэд R<, можно указать такие аминокислоты, как глицин, аланин, серии, тре э нин, c(- -ймпн эм аслян чО к исл э-ту, пролин, лейцин, изэлейцин, эрпешшн, фенилаланпн и тирэзин, а такж» другие ами-нокислоты, такие, как P -алании, .-аминомаспяная кислота, 3 — аминовалериановая кислота и f — аминокапроновая кислота, Для тех аминокислот, которые могут существовать в виде оптических изс меров, К обозначает любой из оптических изомеров соответствующих аминокислот или рацемические соединения. Среди аминокислот, соответствующих R4, P -аланин явi0 ляется особенно предпочтительным для целевого использования.

Нейтральные аминокислоты, представленные R, содержат предпочтительно

2-10 атомов углерода. Примером таких

l5 аминокислот является глицин, аланин, р

-аланин, саркозин, серии, прэпин, валин, лейлин, нзолейцин, фенилаланин и тирозин. Среди аминокислот, соэтветствуннпих R», глицин и пролин являются наиболее предпочтитель 20 ными для использования по указанному назначению. Б случае, когда R2 представляет остаток пролина, целевое применение достигается даже в том случае, когда К представляет собой GTDM водорода.

25 Аминокислоты, которые мэгут входить в состав тирозильных пептидов или их амидов, содержат предпэчтительно 2-10 атомов углерода каждая. Примерами таких аминокислот являются глицин, аланин, серии, З0 треонин, валин, пролин, лейцин, изэлейцин, лизин, фенилаланин и тирозин. Эти аминокислоты связываются в любой последовательности с образованием тирозильных пептидов или их амидов, содержащих в своем составе от 1 до 5 аминокислотных остатков, Такими тирозильными пептидами и их соответствующими амидами, котэрые иногда называются "амидами тирозильных пептидов являются, например, следующие соединения:

Tyr — GEM- ОН;

Т,г-АЕ-С,Е -ОН;

Tyr - Le u - AEa- GKy- ОН;

Tyr Leu- Е,ЕЧ-Vae-AEo- ОН;

Т г- Thr- Рга - Leu- The-CIH;

Т r - Тh г - Pro — Lys - Aeoi-OH;

Tyr- Thr-Рго-Lys- The-OH;

Тчт - бег -Рго- Arg С Е - ОН;

Tyr - Pro — ЭЕе — oH;

Tyv- Leu -Leu- Leu-ОН;

50 xyr - c ey- с„е -с,е -cey-он;

Т г - АЕа - ДЕ -aeoi- ЛЕ0- аН;

Т1r - Тhr Pгэ Lyg - ОH.

Среди аминокислот, тирэзильных пептидов и их амидэв Тчг — NН> является наиболее предпочтительным для целевого назначения (для получения предлагаемых полипептидов), в Т0М числе и для промышленного производства пэлипептидов.

В том числе, когда аминокислот i, пред6О ставленные Р или входящие в со»чав I1 у i2

577975

Пример 1. Получение Arg — Wa— — Phe — Phe — Tyr — И и .

A. Получение Z — P,pg (ЯО ) — Ргб.— — РМ вЂ” Phe — Туг — N H>.

10Л г 8 —. РЬе — phе — Ту1 — NH растворяют в 50 мл диметилформамида (ДМФ) и восстанавливают над палладиевой чернью.

Через 10 ч катализатор отфильтровывают, фильтрат охлаждают в ледяной бане H K Ox лажденнэму раствору прибавляют 7,37 г

Z — keg (gQ ) — Pro — 0H и 3, 3 г

НО8 В (И -экси-5-нэрбэрнен-2,3-дикар боксамида), туда же прибавляют 4,06 г дицшлогексилкарбэдиимида (ДПГКДИ), и реакционную смесь перемешивают в течение

16 ч. Обр;,зэвавшуюся дициклогекснлмочевину (ДЦГМ) отфильтровывают, фильтрат. упаривают при пониженном давлении. К оста ку прибавляют 200 мл этилацетата н полученное при этом твердое порошкообразное вещество отделяют фильтрэванием. Осадок чистят перекристаллизацией из смеси ДМФ

/метанол/вэда. Выход продукта 14,5 г (95,6,о от теэретическэгэ); т.пл. 100 .103 С; (cd) — 29 7э (с = 0,55%, ДМФ).

Найдено, ": С 59 51; Н 6,06; М 14,90, 4Ь 54 1о 1о

Вы исленэ, %: С 5Э, (3; Н Ъ, 10;

Ц15,11 пы R>, могут существовать в виде оптических изомеров, эти аминокислоты могут иметь любую оптическую конфигурацию (могут быть любым оптическим изомерэм) или представлять собой рацемическэе соединение.

Реакцию конденсации можно проводить, используя приемы и методы конденсации, известные для образования пептиднэй связи.

Перед проведением реакции конденсации можно защитить карбоксильные и аминные группы, которые не должны принимать участия в рассматриваемой реакции, или, наоборот, активирэвать карбоксильную и/или аминную группы, которые должны участвовать в этой реакции. Все операции по защите или ц активации функциональных групп реагирующих веществ осуществляются известными методами. Карбэкисльные группы в исходных веществах, которые не должны вовлекаться в реакцию конденсации, могут быть защищены солеобразованием, т,е. переводом в соответствующие металлические сопи (например, натровые или калиевые соли) или этерификацией, что связано с получением соответствуюших сложных эфиров (например, метилового, этилового, бензилового

А-нитробензилового, трет,-бутилового или трет.-амилового) .

В качестве зашитных группировок для аминогрупп исходных соединений могут быть 30 использованы любые известные защитные группировки, которые применяются в пептидном синтезе, например бензилоксикарбонильная, трет.-4утилоксикарбонильная, трет-амилоксикарбоййльйая,. изэборнилоксикар- 35 бонильная и другие группы Эти защитные группировки могут использоваться для зашиты иминогруппы пронина. Имидазольная функция гистндина может быть защищена с помошью любой применяемой для этой цели 40 защитной группы, например бензильной, тозильной, 2,4-динитрофенольнэй, трет.-бутилоксикарбонильной или бензилоксикарбонильной. Гидрэксильные группы серина, треонина и тирэзина могут быть защищены лю- 45

5эй обычно применяемой для этой цели защитной группой, например бензильной, трет,-бутильной или другой группой, способной образовывать простой эфир. Гуанидиновая группа аргинина может быть защищена та- 50 кими группами, как нитрэгруппа, тозильная, бензилэхсикарбэнильная, изэбэрнилоксикарбэнильная или адамантилэксикарбэнильная, В качестве примеров ахтивирэванных карбоксильных групп в исходных соединениях мож-55 нэ назвать соответствующие ангидриды, азиды, активирэванные эфиры (например, пентахлэрфенилэвый, 2,4,5-трихлэрфениловый, 2,4-динитрэфениловый, Lilt;. и.летилэвый, П -нитрэфенилэвый, -эксисуl:иинимидный,60

Я

" -окси-5-нэрборнен-2,3=-двкарбоксимидный, И ьксифталимидный или М -DKcHбензэтриазэльный).

Реакцию конденсации мэжиэ проводить в присутствии растворителей, широко используемых в пептидном синтезе: безводный или водный диметилформамид, диметилсульфоксид, пирндин, хлороформ, диоксан, метиленхлэрид (дихлэрметан), тетрагидрофуран, а также различные смеси этих растворителей.

Температуру для проведения реакции конденсации выбирают в пределах диапазона, относительно KoTорогэ изие тно, что оН является приемлемьцл для проведения реак: ций, приводящих к образованию пептидных связей.

После проведения реакции конденсации в том случае, кэгда пэлученный продукт содержит защитные группировки, их удаляют обычными методами, применяемыми для этих целей, например, каталитнческим вос- становлением в присутстмж соответствуюmer o катализатора, такого, как палладиевая чернь, палладий на угле, платина и т.g.; сэльвэлизэм с использованием фтэристого водорода, трифторуксусной кислоты и так далее, 8 также восстановлением металли» ческим натрием в жидком аьъшаке.

577975

Б. Получение Arg — Pro — Ph e — Phe—

TVr — )) и °

100 мг Z — AгО (ИО) — Ргo — phе— — Phq — ууг ЯЯ растворяют в 30 мл уксусной кислоты, восстанавливают над палладиевой чернью, используемой в качестве катализатора гидрирования, в течение 20 ч, Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении.

Полученный остаток растворяют в 50 мл воды, фильтруют, фильтрат сушат лиофилизацией. Лиофилизованный продукт растворяют

g 5 мл воды и раствор вносят в колонну (1,8 х 9 см), заполненную карбоксиметилсефадексом, проводят градиентную элюцию

0,1 М водным раствором ацетата аммония (400 мл) и 1 М водным раствором ацетата аммония (400 мл). Фракции от 250 до

370 мл, объединяют и,пиофилизуют, Получают 250 мг (52,3% от теоретического) белого пушистого продукта; (Й3 -41,9о (с 0,47%, вода) .

Аминокислотный анализ продукта (гидролиз проводят соляной кислотой в стандартных условиях): Аг(э 1,00; 9ро 1,05;

Ъг 0,91; Phe 1,96 (содержание пептида в продукте 86,5%).

Найдено, %: С 56,76; Н 6,98; Й 14,28

Вычислено, %: С 57,06; Н 6,96;

N 14,26

Пример 2. Получение Gfy — Агав — Рго — Phe -Phe — Tyr — NH<.

А. Получение 3 — Qfg — gg q — Рго — Phe — Pbe — Tyr — ИН .

80 Z — Лr (X0 j=P«Phe — Phe — Туг — NH растворяют в 30 мл уксусной кислоты и Гидрируют над палладиевой чернью в течение 8 ч. Катализатор отфидьтровь вают, фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 20 мл воды и лиофидизуют.

Полученное в результате порошкообразное вещество растворяют в 10 мл ДМФ, к раствору прибавляют 147 мг моногидрата )1 - голуолсудьфокислоты. К полученной смеси прибавляют 349 мг Х- ч-0N5, реакционную систему перемешивают в течение 10 ч, ДМФ отгоняют при пониженном давлении, к остатку прибавляют 50 мл этилацетата. Полученное при этом порошкообразное вещество отделяют фильтрованием.

Выход продукта 858 мг (89,5% от теоретического); т.пл. 119-121ОС; (+)1 -26,7о (с = 0,96%, ДМФ).

Найдено, %: С 59,45; Н 6,08; И l 2,37

6 2,76 дв Ну.й Оч Н,<, С Нр0 5 Н О и

Вычислено, %: С 59,55; Н 6,18, И 1.2,63

О 2,89

Б. Получение Gty — Хгу — Pro — Phe— — РК@ — Tyr — ЯН я

500 мг Z — Gfy — Ащ — Pr о — Pbe— — Phe — Туг — NH> n -толуолсульфоната растворяют в 30 мл уксусной кислоты, восстанавливают над палладиевой чернью в течение 5 ч. Катализатор отфильтровывают

tO и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 20 мл воды, и полученный раствор подвергают ионообменной хроматографии на колонке с Амберлитом JR A -41С в ацетатной форме (Atnbet Riage А%А -410 !

5 представляет собой сильно основную анионообменную смолу) . Элюат лиофилизируют и полученное в результате порошкообразное вещество растворяют в 5 мл воды.

Зтот раствор наносят на колонку (2,6 х 23 см)

20 с карбоксим етилцеллюлозной. Злюцию осуществляют градиентным методом с использованием двух водных растворов ацетата аммония: 0,005 и 0,2 М (по 700 мл каждого полученного в примере А раствора) с нарастанием концентрации элюента. Фракции в диапазоне от 840 до 970 мл объединяют и лиофилизируют. В результате получают 270 мг (63,6% от теоретического) целевого продукта; (сА.),1 -62,0о (с =0,46%, ЗО Вода) .

Найдено, %: С 55,99;Н 6,92; г(14,77

Вычислено, %: С 56,15; Н 6,82; И 14,89

Аминокислотный анализ: Аг Г0,94; Рго

1,06; Ич 1,00; Тчг 0,94, phe 2,03 (содержание пептида 83,2%), Пример 3. Получение г- — Авив

4p — Arg — Рго — phe — phe — Tyr — и Н,.

Процедуру, описанную в примере 2 повторяют с той только разницей, что вместо

i- С -0 >,,, Z- g- ASu-0NB

В результате получают 324 мг указанного

4> соединения; (ck) -58,7о (с = 0,45,aoga).

Найдено, %: 56,14; Н 7,36, 8 13,92 с„,н, о н гс н о ьн о

Вычислено, %:С 55.97; Н 7 15

N 14,19

Аминокислотный анализ: А 1,00; Pt o

1,08; 1 ч 0,97; РМ 2,13 (содержание пептида 80,8%) .

Пример 4. Получение Š— Acap—

55 — А г — Prо — P h е — Ph e — Tyr — ЙИ

A. Получение Z — — Aсoр — Аrg— — Р1 о — P he — Ph е — Туг — г) Н .

В 10 мл ДМФ растворяют 250 мг

50 Z - 6 -Асар-OH и к полученному раствору

577075 при охлаждении на ледяной бане прибавляют

186 мг НОЙВ и 214 мг ДШКДИ.

Смесь перемешивают в течение 16 ч, образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают.

Фильтрат прибавляют к диметилформамидному раствору Н вЂ” A t g — Pro — Pht —

— Р f. е — 3 уг — N H < n -толуолсульфоната, который получен по методике, описанной в примере 2А. Смесь перемешивают в течение 12 ч, ДМФ отгоняют при пониженном давлении. К остатку прибавляют 30 мл этилацетата и образовавшееся при этом порошкообразное вещество отфильтровывают. Выход продукта 810 мт (79,1% от теоретического); т.пл. 90-92 С; (АЗ в

-30,3о (с = 1,07%; ДМФ).

Найдено, %: С 59,81; Н 6,75; Н11,80;

5 3,00

5г ь6 0 1о 1 9

Вычислено, %: С 59,88 Н 6,65;

jV11,84; 5 2,80

Б. Получение Я- Ас iр Arg pro — Рпе — Phe — Tyr -НЯг.

500 мг Z -производного, полученного в примере А, обрабатывают IIQ примеру 2Б, в результате чего получают 316 мг указанного соединения. (сй 8,9 С (с =

-ra o

= 0,55%, вода) .

Аминокислотный анализ: Агу 1,02; Pro

l,03; T t 0 92; Phe 2 13; E -Асар не определяли; (содержание пептидов 81,5%).

Пример 5. Получение Lys k — Рго — Ph e — Phe — Tyr — ИН .

А. Получение ди- Š— Lys — Arg — Рго— — Pht — Ph е — Гуг — NHg

Процедуру из примера 4А повторяют с тем исключением, чта вместо Z — Я—

-Асар-OH используют 390 мг ди- X — US

-ОН, в результате, чего получают 932 мг указанного соединения, имеющего т.пл.

103-105оС (chl -28,5о (с = 1,04%, ДМФ)Найдено, %: С 60,64; Н 6,21; г(11,79, а 2,82

Вычислено, %: С 60,39; Н 6,43;

К 11,56, 52,41

Б. Получение Lys — Arg — Рго — Ph е— — Рие — Туг — М г

500 мг ди- х -производного пептида, полученного в примере А обрабатывают по примеру 2Б, в результате чего получс.ют

336 мг указанного; fck3

21

-52,6оС (с = 0,57%, вода).

Аминокиспотный анализ: Les 1,02; Arg

0,98, Pro 1,00, T r 0,94;9he 2,04 (содержание пептида 91%).

Пример 6. Получение с4р Da6

1г - Рго — Phe — Phe -- (уг -- 1ЧНг.

Аналогично примерам 4 н 5, на исх. пя из 535 мг ди- 7. — < — у — 3olh -пиппкл — гексиламманийнаР соли, синтезирован указаиио соединение с выходом 325 мг," (о(11 -58,2 С (с =0,50%, вола). г г

Аминокислатный яналиэ: d., .г — Эс Ъ

1,0о; А g 0,98; Trî 1,00; т»

РЬ® 3,96 (содержание пептида 84,2%) .

Пример 7. Получение в 4ta .

l0 — Аг — Pt o — Phe — phe — Tyr — ч)(.

А. Получение, — б — A(a — - pr® (go ).. г — Pro — Olf e.

К 3,50 г Z "1д(Й0г) — Рго — 0Me прибавляют 35 мл 25%-ного раствора

15 НВ1 в ледяной уксусной кислоте. Реакционную смесь встряхивают при комнатной температуре в течение 35 мин. К этой смеси прибавляют 300 мл диэтиловаго эфира, образовавшийся при этом осадок от20 фильтровывают, промывают эфиром и сушат.

Полученный порошок растворяют в 20мл

ДМФ и при охлаждении ня ледяной бане нейтрализуют раствором триэтилямпня. Затем прибавляют 2,9 г 1- (3 Мо -ONE u

Ж перемешивают в течение 16 ч. ДМФ отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в 300 мл этилацетата. Полученный раствор трижды промывают 4%-ным водным раствором бикарбаната натрия (порЗО ции по 100 мл). После промывки водой раствор сушат над безводным счльфятом натрия. Растворитель отгоняют при пониженном давлении и к остатку добавляют этиловый эфир. Полученное при этом парашЗа кообразное вещество отделяют от маточного раствора фильтрованием. Выход продукта

3,05 r (74,3% от теоретического), т.пл.

62 65оС. (о ) g «34 1а (с = 1 04% ДМФ)

Найдено, %: С 50,98; И 6,36; К 17,72

Вычислено, %.. С 50,73; Н 6,2. ., и 18,01

Б. Получение K — я-АЬ вЂ” Аг (яОк) — Рга — ОН.

В 30 мл ацетона растворяют 2,82 г

Š— /Э вЂ” А(о — A Q(O<) —. Рго — ОМ е, полученному раствору, охлажденному на ледяной бане, грибявляют 10,7 мл 1 н. водного раствора гидроокиси натрия. Реакци онную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь нейтрализуют 11 мл 1 н. соляной кислоты, раствор упаривают при пониженном давлении.

К полученному млслянистал у остаткУ прибавляют 30 мл холодной воды и водный слой отделяют дека ггацией. Остаток промывают адин раз холодной водой и сушат, после чего этот продукт храматаграф руюя. на копанке с силикагелем (90 I ), t . . и-577975!

1. Х-P-Afa — Ащ(%Ой) — Рро -Phe — ОН+и -Phe-Т р 5Н<

НОМ3 ЗСС

X -P -Ala — Аг (ЫО й) — Рт 0 -Phe — Phe — Ту — НН я

Я Pd или HF

Р-И вЂ” Aeg-Ppo- Phe P1lt. — Ту -NHg

Q. X — P Ala-Лту(ХО ) — Рт о — Phe — Phe — ОН +Н-Ту -HHg

) нов/асс

X-p-Л1ц-Лт я (NOй) — Рро — РИе — РЬе -Tyc -M4g

Н Рс1 или HF

Р -Л)ц-Avg-P -Phe -Phe -T -748g

3. L=P —.Щи — фу-ОИ +Щедро -Р1 е -Pll< -Typ Щр

Н(-1 БОИВ ЭСС

z — p — Ala — Ат ф — Р1 о -Р11е -The — тут - NH g

Н Рд

p — Ala — Айу — Рго — Pile -Phe - Tyr-МН р зуя в качестве элюента систему этилацетат/пиридин/уксусная кислота/вода (60:

:20:6:11). Фракции, обэгаше ные ожидаемым соединением, объединяют и упаривают досуха при пониженном давлении. Остатэк промывают этиловым эфиром и отфильтровывают. Выход продукта, 2,62 г; т.пл.

65-67оС; ta) l -27,5 (с = 1,07%; ДМФ)

Найдено, %: С 50,41; Н 6,19; Й 18,58 мos "

Вычислено, %: С 50,66; Н 5,99, ((18,80.

С. Получение Š— Ю вЂ” Akt — Л1 (1 (MO )Pro Phe — Phe — Ty r — ЙНк

1,50 г Z — Phe — Phe — Ру — ИН растворяют в 15 мл ДМФ, гидрируют над палладиевой чернью в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывают, фнльтрат охлаждают на бане со льдом и к охлажденному раствору прибавляют при перемешивании

1,2 1 г Е - P — А1а — A rg (NO>) — Рго — OH, 0,53 r НОЯ В и 0,61 г ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение

18 ч. образовавшуюся ДОГМ отфильтровывают и фильтрат упаривают при пониженном давлении. К остатку прибавляют 50мл воды, фильтруют, оседок собирают, сушат, Переосаждают из ДМФ этилацетатом. Выход продукта 1,99 r (80,9% эт теоретического); т.пл. 135-138оС, (с(,) -33,1о (с = 0,9, ДМФ).

Найдено, %: С 58,93; Н 6,18; 5 15,02

Вычислено, %: С 59,08; Н 6,17;

N 15,47

12

Д. Получение,8 — А1а — Ьг (— Рго— — Phe — Phe — Туг — NH g

В 40 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 1,50 г Š—,8 (Иа Prg(jf()Z)— — Pr o — Phe — Phe — Ту — 1Щ, « » ,Z -зашитную группу гидрэгенолизом (нед палладиевой чернью в течение 8 ч). Катализатор отфильтровывают и фильтрет уперивают прп пониженном давлении.

ОстатоК растворяют в 50 мл воды, отфильтровывают небольшое кэличествэ нерастворившегося веществе и фильтрат лиэфилизуют. Лиофилизованный прэдукт растворяют в 20 мл воды, полученный раствор наносят на колонку (3,0х28 см) с карбоксиметилцеллюлозой. Элюцию осу|пествляют градиентным методом с использованием

0,005 и 0,2 М водных растворов ацетата аммония {по 1,5 л каждого растворе). Фракции от 1490 go 1840 мл элюата объединяют и лиофилизуют. Выход продукта 980 мг (65,7% от теоретического); j+) -59,1э (с = 0,52%, вода).

Найдено, %: С 54,34, Н 6,98;

1 (13,98

Вычислено, %: С 54,53; Н 7,12, 30 N 14,13

Аминокислотный анализ: Д р1,00; P c

1,11; Т 1,00; PhO 2,11; Р 4fu 0,94 (содержание пептида в образце 75,7%).

Аналогично примерам С и Д то же целевое соединение можно получить в соответствии со следуюшей реакционной схемой

577975

-Qr-5H и, используя в качестве катя;;кзатэ2

13

Пример 8. Получение,в — А(а— — Arg — Pro -- Phe - Phe — NH2.

Аналогично примеру 7, но с заменой

7 — Phe — Phe -- Т»П - — МН2 на

Х вЂ” Р4е-- phe — — ЯН2 получают 1,24 r указанного сэединенкя в виде белого пушистого продукта; Щ -48,6о (с = 0,42%; вода) .

Амянэккслотный анализ: A>g 1,08, Р ч

1,00; РИе 1,98; 15 АГс» 0,97 (содержание пелткда 82,6%).

Пример 9. Получение Д вЂ” Яа — А» »р — ф — A(a - — Рбе — Phe — Т » — HH2 .

А. Получение 2 —,6 — Л1сi — Phe.—

— Pbe — 1уг — ЯН

l5

2,00 r Z — phe — phe — Туг — NH2 растворяют в 40 мл ДМФ к гидрируют над палладкевэй чернью в течение 5 ч. Катализатор отфильтровывают я к фильтрату прибавляют 1,39 г Z- P-Afoul-ОМВ . Реак- О ционную смесь перемешивают в течение9ч и ДМФ отгоняют при пониженном давлении.

К остатку прибавляют 50 мл воды, получившийся при этом порошок отделяют фильтрованием и сушат Полученный продукт чистят перекристаллиэацией из смеси ДМФ/

/зтклапетат. Выход продукта 2,02 г (88,0% от теоретического):, т.пл. 232 C;(4.) 23 4> (с = 0,94%, ДМФ).

Найдено,%: С 65,18; Н 6,20; N 10,32

Вычислено,%; С 65,41; Н 6,21, И 10,04

Б. Получение Z — Агэ (М0) — 6 фс РЬе — Phe - Т - — NB

В 30 мл ДМФ растворяют 1,0 r g— - P— — А»а -Phe — РЬе -Ту» -ИН и, используя палладиевую чернь в качестве катализатора, гидрируют в течение 6 ч. Катализатор отфильтровывают и к фильтрату прибавляют р р Z-Av((WO )-On I р -4О гидрофуране (указанный динитрофениловь.й эфир получен из 0,52 г 7- Al g(NO )" N и 0,30 r2,,4-динитрофенола в 10 мл тетрагидрофурана дициклогексилкарбодиимидным

45 методом). Реакционную смесь перемешивают втечение 13 ч,,растворитель отгоняют в вакууме. К остатку прибавляют 50 мл воды, полученное порошкообразное вещество отфильтровывают и сушат. Выход продукта:

1,01 г (74,9% эт теоретического); тпл.

192 194эС ° l

ДМФ).

Найдено,%: С 57,63, Н 5,93; . N 15,61

Вычислено,%: С 57,63; Н 6,16;

)» 15,28

С. Получение Z — P — Ate — Apg (Я02)— —,6 — А (a — P he — Ph e — ТУ» — — МН2 .

ЕО

К 700 мг Z j6 — А(а Ья (НО) Ф вЂ” А»а — Pb e — P»» e — Pyr г»Я пркбявпяют 0,2 мл анкзэла р. вслед эя зткм 7мл

25% Н В» в ледяной уксусной кк»-.лоте.

Смесь встряхивают прк кэмкяткэй температуре в течение 40 мик, после чссэ к ней прибавляют 100 мл этилового зфкря, выпавший при зтэм осадок отфильтровывают и промывают ня фильтре зтил вым эфиром. Осадок тщательно высушивают. рястворяют в 10 мл ДМФ и нрн эхляждеккк льдом нейтрализуют раствор тркзткпя кнэм, Вслед за этим в реакционную с»сто.ну ввэдят 336 мг Х- P— - АГс»- 0N5 и раствор перемешивают в течение 18 ч. B пя п-,» Ашем отгоняют ДМФ прк пэки кекнэм д, влении и к остатку после упярквяккя реакционного раствора прибавляют 50 мл вэпьr.

Образовавшийся прк зтэм эсядэк отделяют фильтрованием, сушят к пересажпя т кэ

ДМФ и этилацетата. Вых. » продукта 560 мг (73% от теэретическэго); т.пл. 200-202эС (разложение); (ek) -7.3э {c = 0,<-»1%;

ДМФ) ..

Найдено,%: С 58,06; Н 6,4 (; М 15,57

Вычислено,%: С 58,19; Н 6,13

М 15,89

Д. Получение, — А(х — Л rо — 8 —— — At e» — Ph e — Ph e — ТУг — N H2

В 30 мл ледяной уксусной к 1слэты растворяют 400 мг эащ пценнэгэ пепткда —,4 — А»а — Arg (NQ2Д вЂ”,3 — А(а -- Р{тв — Ph e— ра палладиевую чернь, гкдркруют в течение 8 ч. Катализатор удаляют фильтрованием, раствэрктель отгоняют прк пэккжекном давлении. Остаток растворяют в 5 мл и полученный раствор наносят ня кэлэкку (2, 6 х 22cM) с карбокскметклцеллюлозой.

Градиентную эгпоцкю проводят с кспэльзэванкем 0,005 и 0,2 M водных растворов ацетата аммония (пэ 700 мл каждого раствора). Фракцкп элюата эт 720 дэ

870 мл объединяют и. лиофилиэую г. Получают 270 мг (69,1% от теоретического), белого пушистого продукта, (с{.1, -17,2

Z2 (с = 0,53%, вода).

Найдено,%. С 54,52-; H 6,96, N 15,00

С„Н„а,q -„-C,НР,. Н 0

Вычислено,%: С 54,53; Н 7,03; Ь»14,79

Аминоккслотный анализ: Arg 1,00; 1м"

l,00, 9)»е 2,03; Р-А»с» 2,14 (содержанке пепткда 79,0%).

Пример 10. Получение Arm — Arg-, J3 — А!о. — РЬŠ— Phe — Т г — МН2

Аналогично примеру 9С, нэ с заменой

Z.-P- АЕ»- О »В»a 34O Z-

15 получают 297 мг указанного соединения в виде белого пушистого порошка" j6.)- -18,9

{с = 0,62%, вода).

Лминокислотный анализ: А g. 1,02; Ма

1,04; ТЭр 0,97, Р)зе 2,0; р - АГа 0,97

{содержание пептида 81,0%) .

Пример 1,1. Получение .,6 — Иа— — h,rg — gas — Phe -РЬе — Т г — МН2.

А. Получение « — Ьаг — phe ph e — — (4 1а

В ЗО мл ДМФ растворяют 2 ;02 r Z-РЬ@" ) Ьа -7 Р- И и используи в качестве катализатора налладиевую чернь, гидрируют а твчвиив 5 ч. Катализатор отфильтровывают и фильтрат охлаждают. От- д дельно расТВ 810 мг - 5cAl" - ОИ в

10 мл теграгидрофурана и к рас гвору до баалиют 0,71 г АЛОИЗ. Смесь охлаждают до 0оС и прибавляют к ней 0,82 гДБГКДИ, Полученную реакционную смесь перемешива- 20 ют а течение 3 ч. Образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают, фильтрат прибавляют к охлажденному днметилформамидному раствору. Смесь перемешивают в течение 20 ч, после чего растворитель отгоняют при по- 25 ниженном давлении и к остатку прибавляют

50 мл воды. Полученное при этом порошкообразное вещество отделяют фильтрованием и переосаждают из смеси ДМФ/этишщетат.

Выход продукта 1,90 г (83,8% от теорети- Зо ческогo), т.пл. 246-248оС (разложение); (А) -9,7o (c = 1,О7%; ДМФ).

Найдено,%: С 66,32; Н 6,39; N 10,52 ьен110759 и 2 Н2О

Вычислено,%: С 66,26; Н 6,15; N10,17

Б. Получение л — Агу (ИОя) — Ваг— — Phe — Pb< — Tyr — ИК .

В 10 мл ДМФ растворяют 1,0 г F — Ьаг — РЛе — Phe — Гуг ЯН и, используя в качестве катализатора палладиевую чернь, 40 гидрируют B течение 7 ч, Катализатор от» фильтровывают и фильтрат охлаждают. Перед этим в отдельной реакпионной системе растворяют 0,52 г Z- Д т (у (М О ) - OH в

10 мл тетрагидрофурана и при охлаждении льдом прибавляют к раствору 0,3 r 2,4-динитрофенола и 0,33 г ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч, образовавшийся осадок ДЦГМ отфильтровывают и фильтрат прибавляют к диметилфор50 мамидному раствору. Смесь перемешивают в.течение 20 ч и упаривают при пониженном давлении. К остатку прибавляют 50 мл воды и образовавшийся при этом осадок от55 фильтровывают. После высушивания полученное порошкообразное вещество переосаждают из смеси ДМФ/этилацетатгэтиловый эфир. Выход продукта 1,04 r (77,2% от теоретического), т.пл. 96-98оС (А)

7,3о (с = 1,06%; ДМФ).

16

Найдено,%: С 57,60; Н 6,10; N15,01

Вычислена,%; С 57,63, H 6,16; N15,26

С. Получение 2 — ф — А(а — Arg (МОк)— — Заг — Phe — Phe — Туг — NH<.

В 7 мл 25%-ного НЬ в ледяной уксусной кислоте растворяют 700 мг

- гц®Д-Ъи — Fh&-Phe-Т г ЯН и 0,2 мл аннзола и раствор встряхивают при комнатной температуре в течение 40 мин. К реакционной смеси прибавляют 100 мл этилового эфира, и полученный осадок отфильтровывают, промывают на фильтре эфиром и сушат над гранулированной гидроокнсью натрия в течение 2 ч, Высушенный осадок растворяют в 10 мл

ДМФ, раствор охлаждают на ледяной бане и нейтрализуют триэтиламином. Затем npuGeanmer 336 m Z-Р— - аЕ х-ON> a раствор перемешивают в течение 20 ч. После этого растворитель (ДМФ) отгоняют при пониженном давлении и к остатку прибавляют 50 мл воды. Полученный при этом порошкообразный осадок отфильтровывают и после высушивания переосаждают из смеси ДМФ/этилацетат. Выход продукта 590 мг (76,5% от теоретическогo); т.пл. 135138оС, (А) -15,5о (с = 0,99%; ДМФ).

Найдено,: С 58,18, Н 6,40; Я 15,60

47 %7 11 11

Вычислено,%: С 58,19; Н 6,13; N15,89

Д. Получение — 8 — Ala — Агц — Gmp— — Р— Л вЂ” т г — МН .

В 30 мл уксусной кислоты растворяют

450 мг защищенного пептидного производного Z — 8 — Ata,— 4д — Sar — РЛе — РЬе — 7yr — NH н в присутствии палладиевой черни гидрируют в течение 8 ч. Катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме досуха. Остаток растворяют в 5 мл воды и хроматографируют на колонке (2,6 х х 22 см), заполненной карбоксиметилцеллюлозой. Градиентную элюцию проводят с использованием 0,005 и 0,2 N водных расгворов ацетата аммония (700 мл каждого раствора), причем целевое соединение выходило из колонки во фракциях от 770 до

880 мл. Эти фракции объединяют и лиофилизуют, Получено 309 мг (70,4% от теоретического) белого пушистого продукта, (Ь) -21,5о (с = 0,46%; вода).

Найдено,%: С 54,99; Н 6,76; > 14.58

Вычислено,%: С 54,53; Н 7,03; И 14,79

Аминокислотный анализ: АРр 1,00; Гчп

О.88, Phe 2,02=, р-,Ае 0,98, S r определялся (содержание пептида 78,7%) .

Пример 12. Получение l,eu — Arg— — Pro — Phe — Phe — Tyr -- !ЧНд.

l а

/0

И 14-,62 бО

17

А. Пэлучение 2 — 1.еи — — »,vq{gQ>)— — Р».о — Phc — Ph e — ТУà — НН .

В 20 мл ДЯФ растворяют 700 лг

Р»» -рИе-"»-» », и гидрир лат над пал— ладиевой чернью в течение 6 ч. Катализатор отфильтрэвывают и фильтрат эхла;кдают, К этому фильтрату прибавляют 648 мг карбэксильнэго компонента Z7- Lev - И ц (»» О 1=РРО-ОН, а затем 247 мг НОЯ В и "-"Ð5,.г

ДЦГЯДЯ Смесь перемешивают в .Гечент е

20 ч, образовавшийся эсадэк дипиклэгексилмочевины Отфильтровывают и Дур!Ф отгоняют ри пониженном давлении. Y стат -. ку прибавляют 50 мл воды и пэлученн-е порошкообразное веиество неренэсят на филь р. Продукт сушат и пере осаждают из смеси ДМФ/этилацетат/эфир, т.пл. 1 10111ОС; (а322 38ЛО (с = 1,0%; ДМФ), Выход продукта 1,05 г (86,5% эт теэре=тического) .

Найдено,%: С 59,24; Н 6,50;

Вычислено,%:C 59,13; H 6,59; N 14,59

Б. Получение 1.еа — A.rq — Рго — Phe—

Р е Ту . мЦ

B 20 мл уксусной кислоты растворяют

5 мг защищеннэгэ пептида Š— 1.еи — Й.ц{ко гР»« Р»,е Т, 1Ц иавливают в присутствии палладисвэй чер= ни в течение 10 ч. Катализатор этфильтрэвывают и филътрат концентрируют досуха при пониженном давле пл. Остаток раство= ряют в 5 мл воды и хрэматэграфнруер=. На колонке (2,6х2Осм), занэлненнэй карбокг силметилцеллюлэзэй. Градиентную элюцию проводят с использованием 0,005 и О," А водных растворов анетата аммония (пэ

70О мл каждого раствора). Целевой продукт выхэдит из колонки вэ фракциях от

700 дэ 790 мл. Фракции объединяют и

4 лиэфилизируют В итоге получают 300 мг (63,6% эт теэретическэгэ) белого пушистогэ прэдукта; Й. j -58,3о (c = 0,59%, Ъ вода).

Найдено,%: С 57,72, Н 7,24; N14,25

Вычислено,%: С 5 7,8 1; H 7,28; N 14,05

Аминэкнслэтный анализ: Агg 1,07;7>о

1,03; Т г 0,87; Phe 2,07," Мо 1,00 (содержание педтида 8З,9%).

Пример 13. Получение p — Ata —

Дуц — Phе — Phе — Рhe — Туг — NH .

Л. Пэлучение Z — ф — Ala — КГ (NQ<)— — &be — РЬ е — P h е — Т т(ЬП)-смолы.

В реактор твердэфазнэгэ пентиднэгэ синтезатора загружают 4,33 г ВОС-ТУ (Ы1)

-смолы (содержание тирэзина 2,18 ммэль), дают ей набухнуть и дихлэрметане, вводят в указанном пэоядке БОС- РЬ -ОН, ВОС- @» (ц1пм,», э,s „, э. э 1э .1,, 1

Л Занапт-:)С,— !à Н, Г:-:;,-,†.,:;, ; ;(-;. ПП

« . »,,- э,. (О «я QY теоретическ - гэ/ 4 (с =- 0,46%, вода).

Аминэкисл 1ный анаппз: ЬРЯ » .*»О; 1 "Г

0 8 1 c pf) r„. —; - -: ° ", — /! P L<- !; c» :;эдержа=t -! ние пепт ч 84, 8 ";. j .A. Получение — у — А(» -- -:=: { Гаь»вЂ”

- Le@ — Р»-e — Р 1e — ."УГ ВЫ {» — <:(=--". ": !»

B эеактэр тверд (pç:! oã. пе".т, . . Ного снн и мерцают 4,0 г ВО..- C-, ч =-.с::1,, *. :.! жашей 1,7 ";... .çль глиц и-;л), дают ей на-. бухк =1ь в мет:иенхлэрнде в тече!п!е 0 ч

ВОС- Phe Н, BC Рг„=- =ОH Г,С = .:а—

-Ог1, Аэс "А о (To<.) )Н и 7-I.- 4{ -0Н, используя B Kà!!ecTBc,.эллен нэ юн,егэ аген19 та ДЦГЕДИ, а в качестве агента для от= щепления ВОС-защитной группы — смесь трифторуксусной кислоты с метиленхлоридом в соотношении 1:1. После завершения всех стадий твердофазного синтеза смолу промывают метиленхлоридом, ДМФ, метанолом, ледяной уксусной кислотой, снова метанолом и c GT .до постоянного Весе.

Выход пептидсодержащей смолы 5,09 r.

B. Получение Š— „6 — АЗΠ— А»р = (1 о ) — 1.еп — Phe — Phe — Туг (ВУ() — Q (у — ЯЦ, В 50 мл 17%-ного раствора аммиака в метаноле суспендируют 4,4ã пептидсодержаией смолы, полученной в примере А, суспензщо цомещают в ампулу, герметично ее зацаивавэт. В таком виде суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч. Смолу отфильтровывают и промывают ДМФ. Фильтраты объединяют и концентрируют досуха1при пониженном давлении. K цолученному в остатке масгу прибавляют этиловый эфир, порошкообразный продуКТ Отделяют фильтроватием. Выход

950 мг.

C. Получение ф — Иа — Агц — Lee = — И е — РЬ е — Туг — Иу — ИНя, Смесь из 500 мг сырого защищенного пептид-амида, полученного в примере Б, 0,5 мл анизола: прибавляют к 10 мл фтористого водорода. Смесь перемешивают при 3О

0ОС в течение 60 мин, фтористый водород отгоняют в вакууме. Остаток растворяют а

50 мл воды, Раствор промывают дважды

20 мл этилового эфира, затем .пропускают через колонку (1 х 10 см) с Амберлит 35 .ЖА -410 в ацетатной форме и лиофилиG v. Лиофилизованный продукт растворяют в 20 мл и раствор вводят в колонку (2s6 х 25 см), заполненную карбоксимЫил. целлюлозой. Злюцию осуществляют градиен- 40 тным методом с использованием 0,005 и

0,2 М водных растворов ацетата аммония (по 800 мл каждого раствора). Фракции элюата от 1200 до 1530,мл объединяют и лиофилизуют, Получают 167 мг белого 45 гз

2 пушистого продукта; j+) -28,93о (с =

= 06%; вода), Найдено,%: С 54,64; Н 7,58; N 14,37

Вычислено, %:С 54,64, Н 7,26; N 14,60 50

Аминокислотный анализ:. A g 1,06; GL 9

1,00; "«1,11; Т г 0,87; РИе 2,09;

А<>1,14 (содержание пептида 82,0%) .

П р и ьл е р 15. Получение P — Ata— — Лго — Зе» вЂ” Phe — Phe — Tye — G tq — NH<

А. Получение Я вЂ”,й — АЬ вЂ” Aeg (ТОЗ)-Ser (SZr) — Phe--Phe -- T r (ВУ1) — G(y --смоль .

В реактор твердофазногo пептидного синтезатора загружают 4,02 r ВСС- (j -Ó -смолы (содержащей 2,17 ммоль глици а) и

2О вводят в указанной последовательности следующие карбоксильные компоненты; BOC"Ts l (B X 1 ) ОН, ВОС- P he -ОН, ВОС— Phe-GH, ВОС- бе»(37.1)-ОН, Аос- At g. (To &)-ОН и, -P -ДЫ- ОН, осуществляя наращивание пептидной цепи по методу Мерифильда. После завершения всех стадий твердофазного синтеза смолу промывают метиленхлоридом, метанолом, ДМФ, ледяной уксусной кислотой, снова метанолом и сушат. Выход пептидсодержащей смолы 6,4», Б. Получение F — P — Ию — Apg (Toe)—

-йег(ВЛ) =Phe -Ph „— - т » д Ц вЂ” а у — (Н, В 50 мл 17%-ного раствора аммиака в метаноле суспендируют 5,9 г пецтидсодержащей смолы, полученной .в примере А, и суспензию перемешивают при комнатной температуре в ечение 48 ч. Смолу отфильтровывают и промывают ДМФ. Промывные воды объедки пот с фильтратом и полученный объединенный раствор упаривают досуха при пониженном давлении. К остатку прибавляют этиловый эфир, а осадок отфильтровывают. Выход продукта 2,02 r.

С. Получение 6 — А(а — Aeg — Зег— — Ph e — Phe — Ty r — Жу — ИНй .

В 10 мл безводного фтористого водорода растворяют 1,0 г сырого (неочищенного), защищенного пептид-амида, полученного в примере Б, прибавляют к раствору 1 мл анизола, смесь перемешивают при ООС в течение 60 мин. Фтористый водород отгсняют при пониженном давлении, а остаток растворяют в 20 мл воды. Полученный раствор дважды промывают 10 мл порциями диэтилового эфира и пропускают через колонку с Амберлитом,ERA -410, элюат лиофилизируют. Лиофилизованный продукт растворяют в 10 мл воды и раствор вводят в хроматографическую колонку (2,5х 25см), заполненную карбоксиметилцеллюлозой.

Злюкою осуществляют градиентным методом с использованием 0,005 и 0,2 М водных растворов ацетата аммония (по

800 мл каждого раствора). Фракции элюата от 800 до 950 мл объединяют и лиофилизуют. После этого продукт пропускают через колонку (2 х 10 см) с Амбеулитом

-ХАД-2 в водном растворе и лиофилизуют.

Получают 55 мг целевого соединения в виде белого пу-шистого порошка, $L) -30,11

) 4 о (с = 0,47; вода)..

Аминокислотный анализ: Atg 1,04; 5ег

0,96 gfy 1,00; Tqv 0,88 Phe 2 10 Ь вЂ” А (с 0,98 (содержание пептида 83,0%), Пример 16. Получение g — Afo.—

— А rg — Р»o — Ph е — Ph е — Ty r -Th e — Pro — 1 ys — Ца — QH.

В 30 мл метанола растворяют 1,16 r

Z — Phe — Phe — Т » — The — Pr o — I.ps (ВОС)— А(а — OtBu и восстанавливают в присут577975

22 ствии палладиевэй черни в течение 4 ч.

Катализатор отфильтровывают, а фильтрат концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 15 мл ДМФ.

К раствору прибавляют 492 мг Z-P.-АР0-Ai gã-(NO ) Pt o ОН и 200 мг НОЙ В, эхлажцают и в реакционную массу вводят 250 мг

ДЦГКДИ. Полученную смесь перемешивают в

B течение 18 час. Нерастворившиеся примеси отфильтровывают и ДМФ отгоняют при пониженном давлении. К остатку прибавляют этилацетат, осадок отфильтровывают и сушат дэ постоянного веса. Сухой продукт растворяют в 10 мл трифторуксусной кислоты. Раствор оставляют стоять на 40 мин ц затем трифтэруксусную кислоту отгоняют при пониженнэм давлении, остаток растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты.

Восстанавливают в присутствии палладиевой черни в течение 16 ч. Катализатор отфильт- у ровывают, фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 10 мл воды и раствор пропускают через колонку с Амберлитом O R A,-410. Раствор фильтруют, фильтрат вводят в хроматогра жческую колонку (2,2 х 30 см), заполненную карбоксиметилцеллюлозой. Градиентцую элюцию проводят с использованием

0,005 и 0,2 М водных растворов ацетата аммония (no 800 мл каждого раствора), ЗО фракции эт 820 до 1180 мл обьединяют и. лиофилизуют. Получают 670 мг целевого продукта в виде белого цушистого порошка.

Аминокислотный анализ: Ls5 1,02; At g

О,98; ТЬ 0,96; PrO 2,04, АЕа 1,00; З5

Т о,87; Phe 2,î2; Р-АСа 1,о5 (содержание пецтида в образце 74%).

Пример 17. Г1элучение „ф — Иа— — Й вЂ” (Иу — Phe — Phe — Tyr — 1..еи — ОИ.

А. Синтез Z-Phe-Phe -Т г-0Et.

3,43 г Z - Р Ьа - Тз r - 0 1 растворяют в 50 мл этанола и гидрируют в присутствии палладиевой черни в течение 3 ч.

Ката чзатор отфильтровывают, раствор упа45 ривают досуха при пониженном давлении.

Остаток растворяют в 15 мл ДМФ и к раствору прибавляют 2,77 r /.- Phe - Osu

Реакционную смесь перемешивают в течение

10 ч, добавляют 80 мл воды, образовавший50 ся при этом кристаллический продукт отфильтровывают и перекристаллиэовывают из смеси этанол/этилацетат/этиловый эфир. Получают 3,72 г (83,4% эт теоретического) указанного пептидного производного в виде игольчатых кристаллов с т.пл. 185-186 С, о (с -) 18-1о (с = 1 09%; ДМФ)

Найдено,%: С 69,64; Н 6,14; N 6,54.

С Н О М

37 35 7 3

Вычислено,%: С 69,68; Н 6,16; N 6,59

h. Синтез 7 — 8 - — A(o -- Дгg (И.о, ) -—

- И1у — Phe — Phe — Туг -- 07 1.

В 50 мл этанола суспендпруют 2,0 г

-Phe-Phe- Ъг-ОИ и в течение 1,5 ч проводят его каталитическэе восстановление B присутствии палладиевэй черни. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме с целью этгэнки растворителя. Остаток растворяют в 20 мл ДМФ.

К полученнэму раствору, охлажденн.му не ледяной бане, прибавляют 1,56 г Z

- А с 4t g (éo )-61 - ОН, 0,7 г НОN В и 0,8 r ДЦГКДИ и смесь перемешивают в течение 12 ч. Образэвавшутося ДПГМ отфильтровывают, раствор упаривают при пониженном давлении и к остатку прибавляют

60 мл воды. Полученное при этом порошкообразное веществэ отфильтровывают, сушат и пересаждают из смеси ДМФ/этилацетат.

Выход продукта 2,58 г (82% эт теэретичесхэгo), т.пл. 83-85эС; (э(.) -10,0э (с = 1,1%; ДМФ).

O)

Найдено,%: С 57,41; Н 6,05; Ч 14,49

Вычислено,%: С 57,43; Н 6,23, М 13,"7

С. Синтез Z — / — А1а — Arg (ЙОу)— — G ty — Ph е — Ph e — Туг — OR.

К охлажденной льдом суспензки 2,00 г защищенного пептида X — — Яа . Агэ (М0 )—

-ФУ вЂ” РЬе — Phe -Туг- ОЕ(t 30 мл епетэп,s прибавляют 6,3 мл 1 М водный раствор гидрэокиси натрия, смесь перемешивают при комнатной температуре в теченн". 1 ч.

После добавления 3 мл 1 н. сэлянэ . кпс— лоты ацетон отгоняют при пониженном давлении. Незначительное количество нерестворившегося вещества отфильтровывают и к фильтрату прибавляют 3,8 мл 1 н. сэляной кислоты. Выпавший при этэм осадок отфильтровывают, тщательно промывают холодной водой и сушат. Выход продукте

1,96 г (98% от теоретического), т.пл. продукта 70-73 С, (Ch) -8,7э (с =0,97%; ши).

Найдено,%: С 58,13; Н 5,89; N 14,51 «Н, 012И„Н2

Вычислено,%:С 57,77, Н 6,90, К 14,64

Д. Синтез Z -„Я вЂ” Pln — Ард(ИО ) — GQ.— Phe — Phe — Ту — Leo — ASzt .

В 5 мл ДМФ растворяют 275 мг

H-Leu — ОВ - n -толуолсульфоната, раствор нейтрализуют 0,9 мл 10%-ного раствора N -этилмэрфэлина в ДМФ. В реакционную смесь, охпажденную jIi) -10эС, последовательнэ вводят 670 мг Z — )a — Агав Arg (NCt,) — 3 ч -7he-Р1 е-T r 251 мг

HON В и 289 мг Д11ГКДИ, перемешивают в течение 12 ч, образовавшуюся ДПГМ отфильтровывают и ДМФ из фильтрета эт ) 7 } 75 растворитель отгоняют при пониженном давлейии. Остаток растворяют в 20 мл ДМФ, раствор охлаждают до -10оС и при перемешивании и охлаждении последовательно прибавляют 2,70 г Z- Phe-7he-Ts}. О}.}, 1,59 r HON В и 1,37 r ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение 18ч образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают и к фильтрату добавляют 100 мл воды. Оса}О док отделяют фильтрованием, промывают, сушм и растворяют в 100 мл этилацетата.

Полученный раствор дважды промывают

50 мл воды и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель отгоняют в вакууме, а к остатку прибавляют этилацетат.

Образовавшийся,при этом порошкообразный продукт переносят на фильтр и сушат, Выход продукта 2,51 r (89,8% от теоретического); т.пл. 137-139 С; (А1 -44,1

g(} (с =- 1,08%, ДМФ) .

Найдено,%: С 65,49; Н 6,82, И 7,91

Вычислено,%:С 65,36, Н 6,74; М 7,94

Б, Синтез Z- 8 —.Цсх — At q (NQ>) — Qky—

-- Phe — Р пе — Tyt — Tht — Pt.o — 0tBu .

В 20 мл метанола растворяют 1,50 г

Z- Р }1е - Phe,-T>}. - T}-o — 01В}.}, гидрируют в течение 4 ч над палладиевой чернью. После этого катализатор отфильтзо ровывают, фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 10 мл ДМФ, раствор охлаждают в ледяной бане и прибавляют при перемешивании

0,87 г - Ъ вЂ” АСс(— Al g (N0 1-QE y - OH

0,47 г НО (ч В и 0,54 г ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение

16 ч, образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают, к фильтрату добавляют 50 мл воды.

Образовавшийся гелеобразный осадок отфильтровывают, высушивают и переосаждают вначале из смеси ДМФ/этилацетат, затем из этанола. Выход продукта 1,40 r (67,4% от теоретического), т.пл. 153156ОС (g) -32 Зо (с = 0 97%; ДМФ)

Найдено, o . С 58,24; Н 6,54, Й 13,87

Вычислено,%: С 55,97; Н 7,15; М 14,1 9

Аминокислотный анализ: A} g1,00; 51у

1,04; Leu 1,08; рНе 2, 16; Ty } 0,88;

P - A(al 1,04 (содержание пептида 85,9%)

П р н м е р 18. Получение ф Я(-Apg - Gty — рЬ е — p he — Туг — Мс — М Н .

Методику, описанную в примере 17 воспроизводят с тем отличием, что вместо

И"LeU - С}ВМ -}} — толуолсульфэната пспользучот H - А Гс} - N H 2 -гидрохлорид. В итоге получают целевой гепрапептид р-АРс} - д} (- д cy I I}e- Pt}e-Tv}"-Ма-NH

-диацетата с выходом 216 мг.

Лминокислотный анализ: А} g 1,01;

1,00",Ис} 1,02 The 2,00; Ty} 0,89>

) — А с} 1,12 (содержание пептида в образце 82,4%).

Пример 19. Получение „} — Иа— . г . QQ Phe — РЬе — Туг — Т}}г — Рго — ОН.

А. Синтез Z р)1е- he- Г г - } пг -р} с048U 1,80 г Z- Th)" - Рго — М Э}.} растворяют в 30 мл метанола, гидрируют в течение 5 час в присутствии палладиевой черни. Катализатор отфильтровывают, а

23 гоняют при пониженном давлении. К остатку }}рибавляют 30 мл воды, полученный осадок отфильтровывают, промывают горячим метанолом и сушат. Выход продукта

703 мг (87,9% от теоретическогo); т.пл.

1 78-181 Ñ; (А) . -15,0 (c = 1,02%;

ДМФ).

Найдено,%. С 61,88; Н 6,78; И 13,15

С Ц O„„„„N„„„

Вычислено,%: С 61,98, Н 6,35, Й 13,49

E. Получение „6 — A/a At g G(t} — Phe — РЬе — Гр — Ееа — GH.

В ЗО мл уксусной кислоты растворяют

500 мг Z-P — А(— At g(MQ — а — Phe- Rle - Руг-Lett -ОВу1 и в присутствии палладиевой черни гидрируют в течение 8 ч.

Катализатор отфильтровывают и растворитель Отгоняют при пони}кенном давлении

Остаток растворяют в 5 мл воды и полученный раствор вводят в колонку (2,6х х 18 см),1 заполненную карбоксиметилцеллюлозой. Злюцию осуществляют линейноградиентным методом с использованием

0,005 М водного раствора апетата аммония (700 мл) и 0,2 М -водного раствора ацетата аммония (700 мл). Целевое соединение собирают во фракциях от 370 до 720 мл. Эти фракции объединяют и лиофилизуют. Выход продукта 277 мг (64,2% > от теоретическогo), I .j" -32,5о (c =

= 0,51%; вода).

Найдено,%: С 55,80; Н 7,20; М 14,17

59 76 15 <2

Вычислено,%: С 58,50; Н 6,5 7; и 13,88

С. Получение 8 — 3) — Pt g Gfy — Phe — Phe — Туг — Thy — Pt-a — ОН .

К 900 мг Z — ф — Я(о — Atg (M0g) — G fy — Phe — Phe — Iyt — Т1а — Pt o — 0t Ви прибавляют 0,9 мл анизола, 10 мл безводного фтористого водорода, реакционную смесь перемешивают при температуре -4 С в — å÷åíèå 30 мин, фтористый водород отгоняют при пониженном давлении и к остатку прибавляют 30 мл воды. Раствор экстрагируют 30 мл диэтиловэго эфира и вод.

5 77975!

25 ный слой вводят в колонну (1,0х10,0 см), заполненную Амберлитом JRА-410 в вцетатной форме, которую промывают водой.

Промывные воды объединяют с элюатом и объединенный р8сТВор лнофнлизнруюте ЛиО филнзированный продукт растворяют в 10мл воды. раствор пропускают через колонку (2,2 х 21 см) с карбоксиметнлцеллюлозой.

Злюцию осуществляют градиентным методом с использованием 0,005 М водного раствора ацетата аммония (700 мл) и

0,3 М водного раствора ацетатв аммония.

Желаемое соединение выходит из колонки во фракциях от 235 до 385 мл. Эти фракции объединяют + лиофялизируют. Выход продукта 476 мг (57,0% от теоретического);,()> -38,8о (с 0,25%, вода).

Найдейо,%: С S3,2 Т; Н 7,04; 2 13,82

Вычислено,%:С 53,10; Н 7,00, N 13,91

Аминокисдатный анализ: А f 1,05; Т!21

1,00, РГО 1,02; Я8м 0,95; T r 0,95р . ЪЕ 2,02; Р М Р 0,93 (содержание пептида 85,5%).

Пример 20. Получение t — Я,свув—

-Агд — Qtg -Ne — Phe -Tyr — Thr — Рго — ОК.

А. Синтез Е-Е -Асер — keg(NO>)-Qty-QE1, К 2,41г 7" АГ г(МО )-94-OEt прибавляют 12 мл 25%-ного раствора НВ вледя- Зо нойуксусной кислоте, смесь встряхивают при комнатной температуре в течение 40 мин.

К полученному раствору прибавляют днэтиловый эфир, выпавший осадок отфильтровыsaucer и сушат в вакууме нвд гидроокиацо натрия.

Перед этим в другой реакционной системе растворяют 1,33 г g.-6- АСсИР-OH u

0,99 г HO NB в 5 мл тетрвгидрофурана и при .охлаждении на ледяной бане прибавляют 40

1,14 г ДЦГКДИ. Реакционную смесь перемешивают в течение 4 ч и образовавшуюся

ДЦГМ отфильтровывают. Подготовленный аминокомпонент растворяют в 10 мл ДМФ н по ле нейтрализации раствора триэтилами-4 ном прибавляют к нему полученный раствор активироввнного эфира. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, растворитель отгоняют в вакууме, остаток растворяют в

50 мл этилацетатв. Раствор промывают во- 60 дой, затем насыщенным водным раствором бикарбонвта натрия (2 раза по 50 мл). После заключительной промывки водой органический слой сушат нвд безводным сул; фатом натрия. Далее рвстворитель отгоняют Ьб при пониженном давлении и к остатку прибавляют петролейный эфир. Полученное при этом кристаллическое вещество перекрисгвл .изовыввют из смеси вода/этвнол/этилвиетат. Выход продукта 2,1 r (76% от теэ-еО

26 ретического), т.пл. 85-87оС () 11,9о (с = 1,0%; ДМФ).

Найдено,%: С 52,43; Н 6,64; hl 17,76 4 И з у О и 2 (Вычислено,%: С 52,26, H 6,76, N 17,78

Б. Синтез g-E — kcop — Apg(30 )-Oty ОМ1,8 r Š— 8 — Ажр — Агу(КОд — Gty — 0Pt растворяют -в 10мл ацетона, раствор охлаждают на ледяной бане, к нему прибавляют 2,9 мл 2 и. водного раствора г дроокиси натрия, Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем к смеси прибавляют 2,5 мл 1 и. соляной кислоты, ацетон отгоняют при пониженном давлении. Остаток разбавляют 10 мл воды, полученный раствор подкисляют н. соляной кислотой. Выпавшее в осадок кристаллическое вещество отфяльтровивакат я сунfяч.

Выход продукта 1,59 r (93% от popem ческого); т.пл. 97,5-99 С;.(А j — 20,7 (с = 1,0%; ДМФ).

Найдено,%: С 48,50; H 6,28; Й 28,23

С Нзз 08 М И20

Вычислено,%: С 48,79, Н 6,52; Й 18,2(С. Получение 8 — Лиар — Arg — Q(y— — Phe — phe —. Т Г вЂ” Thr — Pro — OH

Аналогично примеру 19 Б, но вместо

Z- P - Ate- A2 g (ИО ЪС -ОН c« b y

Z - "Е- АСар- АГу (NO )-6Ü-0Н и в дальнейшем по методике примера 19 Б и С пол чают 428 мг указанного соединения. (Й3 -37,9о (с = 0,25%, вода).

Аминокнслотный анализ: Al g 1,02;

ТЬ 1,02; РГО 1,00; И 1,01;7)2Е

2,04; Тя ° 0,92, C -Асар не определяли (содержвнне пептида 84,9%) .

Пример 21. Получение, Lye — Аг — — Щу — РЬс — РЬе — Туг -Т2н — Pr o — ОН.

А. Синтез ди- 2 — ?.уэ — Агу (МОИ)— — Иу — OR t.

Указанное соединение получают в виде гели по методике примера 20 А, исходя нз 2,07 r ди- Е (лЬ- OH Гелеобраэный продукт переосаждают из смеси вода.

/этанол/этилацетвт. Выход продукта 2.5 7 ã (73% от теоретического) у т.пл. 161-162 С2 (а() > -11,9 (с = 1,0%; ДМФ).

Найдено,%: С 54,45; H 6,05; N15,99

32 44 О Ь

Вычислено,%: С 54,85; Н 6,33; N 15,99

Б. Синтез ди У-Ьуа — Агц(МОя )— — О1 — ОН .

В 10 мл ацетон растворяют 2,0 г див 7-Lgg-A g (НО 2- G0y- 0Et и прн охлаждении на ледяной бане к раствору прибавляют 2,1 мл 2 н. раствора гидроохиси натрия. Реакционную смесь перемеши577975

27 вают при комнатной температуре в течение

2 ч, прибавляют 1,4 мл 1.н. соляной кислоты, ацетон отгоняют при пониженном давлении, к остатку добавляют 10 мл воды.

I1ерастворившиеся примеси отфильтровывают и фильтрат подкисляют 1 н. соляной кислотой. Выпавший гелеобразный осадок отделяют фильтрованием. Выход продукта 1,78г (93% от теоретического); т.пл. 131132.5"Ñ; td.3 > -10,5о (c = 1,0% ДМ )

Найдено,% . С 51,43, Н 5,92; Й 16,23

С Нi с1, ) ) /k Hko

Вычислено,%: С 51,49, Н 6,20; М 16,02

С. Получение Lys — Ar g — Oty — Phe— — Phe — Руг — The — РГо- ОН1

Методику примера 19 Б повторяют с тем отличием, что вместо 2 Р АE - At g (МО 1--И ;ОН используют ди- Z-Lss- At g (ИО )-6Ь-OH В результате получают 452 мг указанного соединения, (Ж) > -34,8

В 2 о 20 (с 0,4%, вода).

Аминокислотный анализ: 1.ч Ь 1,08, А1 (1,01; ТЬ 0,92; РФФ 1,00 И 1,00/

РЬВ 2,08; Тч1 0,89 (содержание пептида 85,2%).

Q5

Пример 22. Получение P — Ata-Àù

-Д(у-РЬе-РЬе- Рр - Thr -Ðtî — 1,уз Ма — 0А.

А. Синтез Z-. Ьь(ЬОС)-Ate-OtBu

1,4 г Z - Д à- Gt3u растворенные в 300 мл метанола, гндрируют над палладиевой чернью в течение 2 ч. Катализатор отфильтровывают, а метанол упаривают в вакууме. Остаток растворяют в

50 мл тетрагидрофурана. Отдельно от этого суспенцируют 28,1 г 7.-1ys(ВОС)- Он

35 дициклогексиламмонийной соли в 300 мл этилацетата к промывают суспензию в делительной воронке 200 мл 0,5 н. серной кислоты (тремя порциями), затем отмывают водой, и органический раствор сушат над безводным сульфатом натрия. Зтилацетат частично упаривают (приблизительнэ до объема 150 мл). Оставшийся раствор прибавляют к раствору аминэкэмпэнента в тетра- 45 гидрофуране и смесь охлаждают на ледяной бане. К охлажденной смеси прибавляют при перемешивании и охлаждении льдом 11,3 r

ДБГКДИ и продолжают перемешивание в течение 16 ч. Образовавшийся осадок ДЦГМ @ отфильтровывают, а фильтрат упаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в 50мл этилацетата, раствор промывают 0,5 н. серной кислотой и 4%-ным водным раствором бикарбэната натрия. Отмытый этилацетат- 55 ный слой сушат над безводным сульфатом натрия, затем упаривают досуха при пониженном давлении и к остатку добавляют петрэлейный эфир. Образэвавшиеся кристаллы отделяют фильтрованием, перекристаллизэ- щ1

28 вывают из смеси этилапетат/петролейный

=эфирВыход продукта 21,9 r (87% от теоретического), т.пл, 55-57оС; (о() 1 -30,17э, Найдено,%: С 61,61; Н 8,10; Я 8,18

С26нд О К

Вычислено,%: С 61,52; Н 8,14; М 8,28

Б. синтез Х- Р1о-Ье(ВОс)- A(!a-0tlu

В 40 мл метанола растворяют 2,5 г

Z-Ls6-(ВОС)-АЬ -OtBLt и, используя палладиевую чернь в качестве катализатора, проводят в течение 2 ч каталитическое восстановление. Катализатор отфильтровывают а фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 20 мл этилацетата. К этому раствору прибавляют

2,45 г Z-Pt e- 0NS и смесь переме-; шивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Полученный раствор разбавляют 200 мл этилацетата и промывают вначале О,S н. герной кислотой, затем

4%-ным водным раствором бикарбоната натрия. После трехкратной промывки водой органический раствор сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток обрабатывают петролейным эфиром, осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси атилацетат/петролейный эфир. Выход продукта 2,53 r (85% от теоретического); т.пл. 127-129оС; (а ) 1 -64,52 (с =

= 1,04; метанол) .

Найдено,%: С 61,81; Н 8,31; 11 9,37

С И 011

З 48 В 4

Вычислено,%: С 61,57;IH 8,00; М 9,27

С. Синтез Х- ТЬ.- М (В ОС)- А8а-OtBu.

2,12 г 2- P t o- Les(BQC)- ACa-0tBu в 40 мл метанола гидрируют в течение

3 ч над палладиевой чернью. Катализатор отфильтровывают, а растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток растворяют в 20 мл диоксана. Параллельно

977 мг Z-Tlat — OH и 806 мг

НОЙ В растворяют в 10 мл смеси этилацетат/диэксан (1:1) и при охлаждении на ледяной бане прибавляют 800 г ДЦГКДИ °

Реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч, образовавшуюся ДПГМ отфильтровывают и фильтрат прибавляют к приготовленному по описанной методике диэксановому раствору.аминэкэмпонента. Реакционную смесь перемешивают в течение

16 ч раствэритель отгоняют при пониженном давлении и остаток растворяют в 150 мл этилацетата. Раствор прэмывают 0,5 н. серной кислотой, 4%-ным водным раствором бикарбоната натрия и, наконец, водой, органический слой сушат над безводным сульфатом натрия, раствэритель отгоняют при

577975

29 пониженном давлении. Остаток обрабатывают петролейныьГ эфиром, выпавший осадок отфильтровывают. Bblxoll продукта 2,3 r (93% от теоретического), т.пл. 64-67 С; (о(.1 -75,58о (с = 0,995%; метанол).

Найдено,%: С 59,25;Н 7,59; N9,65 М У5 10 ь

Вычислено,%: С 59,55; Н 7,85, М 9,92

Д. Синтез Z- Phe — Pbe — Туг — Thr— — Pro — Lys (3OC) — hta — 0t 3а.

1,41 r Х- Thy-тro-Les(BOC)-дЕal()1,ВО, растворенные в 70 мл метанола, гидрируют над палладиевой чернью в течение 2 ч. Катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 10 мл ДМФ н х раствору прибавляют 1,1 г Z--РЙ6- РИ6"Tvr - ОН и 720 мг HONB. Затем при охлаждении на ледяной бане к раствору прибавляют 618 мг ДИГКДИ и реакционную смесь перемешивают в течение 20 ч. После этого растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток обрабатывают смесью этил/ацетат/эфир { 1:1) . Образовавшееся при этом порошкообразное вещество отфильтровывают и перехрнсталлизовывают из этанола. Выход продукта 2,1 r (100% от теоретического); т.пл. 160163,5 С А1 ) -63,73о (с = 1,05%, ме-. танол).

Найдено,%: С 62,02; Н 7,14, М 9,64

Нц,016 Nå

Вычислено,%: С 62,09, Н 7,23, > 9,34

Z — и д (ЯО ) — (Му — РЬе— — Phe — Tyr -Thr- Рго — Lys (SOC) — Ца — ОВц.

2,32 г. 2 -РИе-РЬе-Yvr -ТЬ -Pro-Les (ВОС)- АЬм-0tBu> Растворенные в

30 мл метанола, гидрируют над палладиевой чернью в течение 3 ч. Катализатор огфильгровывают и уц&ривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 5 мл ДМФ и к полученному раствору прибавляют 1,26 r Z- Arg (802)- С И-ОМЪ

Реакционную смесь перемешивают при ком- 4> натной температуре в течение 20 ч, после чего ДМФ отгоняют прн пониженном давлении и остаток обрабатывают 50 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывают, дважды переэсаждают из смеси ДМФ/вода. @

Выход продукта 2,5 r (88% от теоретического); т.пл. 138-141оС (разложение), jd. J ð -32,4". (с = 0,99%, ДМФ).

Найдено,%: С 58,8 ; H 6,80, N 13,66

70 96 18 14

Вычислено,%: С 59,14, Н 6,81; Й 13 80

Ж. Получение „6- А(а — Arg — GLy — Phe — Р,1 e — Рр — Т h r — Pr о — Lys — Ма — OH.

В 30 мл смеси i«этанола и ледяной ук- щ>

30 сусной кислоты (2:1) раствэртот 710 мг

2- Arg(NO ) - Ы -РИе- Phe-Tvr - ти 2

->ro- Lvs (,ВОС )-A(!ei»»OtBu и в присутствии палладиевой черни восстанавливают в течение 8 ч. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 10 мл воды и раствор пропускают через хроматографическую колонку (объем 130 мл), заполненную карбэксиметилцеллюлозой. Элюцию осуществляют градиентным методом с использованием

0,005 М водного раствора ацетата аммония (800 мл) и 0,2 М водного раствора ацетата аммония (800 мл). Фракции от

913 и до 1190 мл объединяют и лиофилиэуют. Получают 350 мг белого пушисгэго продукта, который растворяют в 8 мл

ДМФ, к раствору прибавляют 41 мг мэногидрата П голуолсульфокислоты, затем туда же 82 мг ВОС- P — A(a -0MB, и реакционную смесь перемешивают в течение 16 ч. ДМФ отгоняют при пониженном давлении и к остатку прибавляют3мл трифгоруксусной кислоты. Смесь перемешивают в течение 30 мин, трифторуксусную кислоту отгоняют в вакууме. Остаток растворяют в 10 мл воды, полученный раствор пропусхают через колонку (1,0х х10см) с Амберлнтом 7%A -410 (в ацетатной форме). При прохождении через колонку с этим анионитом вешество превращается в ацетат. Элюат лиофилиэуют и вводят в колонку (2,2 х 17 см), заполнен- ную карбоксиметилцеллюлээой. Злюцию осуществляют градиентным методом с использованием 0,005 М водного раствора ацетата аммония (500 мл) и 0,2 М водногэ раствора ацетата аммония (50 мл). Фракции от 430 до 500 мл объединяют и лнэфилизуют. В результате получают 250 мг белого пушистого вещества с joL) -58,8о

24

3 (с = 0,5%, вода).

Аминокислотный анализ: Lvs 1,00; Аг(г

3.,04; Thr 1,00; Рго 1,04; G

jhEa 1,04; Ter 0,89; Phe 2,00;

P A<> 0,93 (сэдержанне пептида 72%).

Пример 23. Получение ЮРУ- АГд° 6И-Phe-РИе-Тч1-Thr-Pro-Lvs- АИ-ОН.

Воспроизведена методика примера 22, но вместо ВОС- Р -А с - ОИВ используют

ВОС- Мч — ONB и получают 21 4 r упо-. мянутого сэединения в виде белого пушистого продукта; (А1 -59,2э (с = 0,4%, вода) .

Аминэкислэтный анализ: Lvs 1,02; АЩ

1,00; Thl 1,00, Pro 1,01; М 2,00;

1,03; Т4 0,87; Vhe 2,04 (содержание пептида 78%).

577975

В реактор твердофаэиого пептядиогэ син (S< aea t a 800) щают 4,04 и ВОС- ОСу -смолы (сопержащей 1,7S ммоль Qfy ) я оставляют иабукат» ев h хлористом метилеие в тече аяе 20 ч. Затем по методу Меррифялда вводят ИОС- Тэг(316- ОК, ВОС- ЩФ-ОН, 80С-1ЬЕ -ОК, ВОС- аЕу -ОЯ, АаС

-Ягой(1"0й) OH и Х - {-эн -4ЭН в ygi, заином порядке. В качестве кондеиспрую1 щего агента применяют ДЦГКДИ. Каждую аминокислоту берут в четмрехкратном избытке, ВОС-группы удаляю г с помощью яжфторуксусной кислоты в дихлорметане (Xtl). Смолу извлекают as реактора, промыВают дихлорметаном у ДМФ ° метанолом и уксусной кислотой, сушат. Получают 5,07г смолы е

Б. Приготовление . Я вЂ” Lea — Агя (То$)— — Яйу- &he-Phe - fyt (hzt)-Oty — MH .

В 50 мл 17%-ного раствора щимиака в метаноае помещают 4,41 г смолы, получепной по примеру А, суспензию перемешиаают в закрытом сосуде цри .Комнатной температуре в течение. 48: ч. Смолу отфильтровывают и хорошо промывают ДМФ. Филь рат я промывные воды объединяют и óïàривают при пониженном давлении. К маслянистому остатку, добавляют этиловый эфир выпавший осадок отфильтровывают и промывают эфиром. Выход 950 мг.

В. Приготовление Leu- А г-ЯИ-Phe-.Phe-Тй -И - йн .

В 10 мл безводного фтористого водорода растворяют 500 мг сырого защищенного пептнд-амида, цолученного по примеру

Б, и 0.5 мл анизола, раствор охлаждают до ОоС н церемешива:ют в течение 60 мин.

Фторнстый водород отгоняют, остаток растворяют в 50 мл воды. Раствор дважды экстрагируют 20 мл этилового эфира, водный слой пропускают через колонку(2х10 см с Амберлитом HARA 10 {в ацетатйой форме) и лиофилизуют. Продукт помещают в колонку (2,3 х 17 см), заполненную карЬ оксиметилцеллюлозой, н вымывают путем градиентного элюировання 0,005 М водным ацетатом аммония {400 мл), затем

0,2 М водным ацетатом аммония (400 мл).

Фракции 490 до 550 мл объединяют и лкофилизируют. Получают 167 мг указанного соединения в виде белого пушистого продукта.

Аминокислотный анализ: Атд 1,02; бааз

31

Пример 24. Получение Зяб — A g-- By — ФЬе — Phe — Рр — aty — ВЦ и

A. Приготовление Е -- Lee — Агц (То$)— — OQ — Pha — Phe — Tyt (ЗяЦ вЂ” 0$ — смолы.

32

2,00; Leu 1,03; Т 0,89; РИе 2,08 (содержание пептида 84%).

Пример 25. Получение p — Ata—

-Л д — sty — РЛе — РЬе — Vyt — Ma — Gty — М Нй

5 А. Приготовление Š— P — Яа — Arg (Ъ:6)

Еу /he — phd -7уг Еу!) — Ма — aty -смолы.

В реактор синтеза (Sirnadz.u4P -8001 помещают 3,03 r ВОС- 66э -смолы (содержание ФЕ.1; 1,32 мм), и оставляют набухать в хлористом метилене. Затем с помощью симметричного ангидридного пропесса вводят ВОС- АЬм -ОН, ВОС- T r (Ъ|Е)-ОН, ВОС- М -Он, ВОС- Ptte -ОН.

BOC Иу ОН, Аос Ат(т(Той) --ОН и

2 " At a ОН в укаэанном порядке На каждой стадии ВОС-защиту удаляют с помощью 50%-ной смеси тряфторуксусная кислотаlдихлорметан.

Кроме того, на каждой стадии неирореагировавшие аминогруппы апетилируют ангидридом уксусной кислоты. После введения и реакцию всех аминокислот смолу промывают этанолом, ДМФ, дихлорметаном, уксусной кислотой и метанолом, сушат при пониженном давлении. Получают 3,70 г пептидной смолы.

Б. Приготовление Z- 6 -Ata — kr о (3>3). — Gty — Phe Phe.- Ч i (Вк.9-A(a — Шу — NHg, В 3,28 r пептидной смолы, полученной

0 по методу А, суспенднруют в 50 мл 17%ного аммиака в метаноле, в плотно закрытой склянке суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 40 ч.

Смолу отфильтровывают н промывают 50 мл

Зь ЙМФ. Фильтрат и промывные воды объединяют и упаривают досуха при пониженном давлении. К остатку добавляют эфир, выпавший осадок отфильтровывают, сушат, получают 433 мг сырого защищенного пеп40 тид-амида.

В. Приготовление 5-АИ-. Агg ИУ->he->he-1я- 4{ .а- 4.е - NH . з

В смеси из 8 мл безводного фтористого водорода и 0,3 мл аииэола .pansopsarr, 310 мг сырого защищенного пептид-амида, полученного по методу Б, раствор перемешивают при ОоС в течение 60 мин.

) Фтористый водород отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в

50 50 мл воды. Раствор дважды экстрагируют

10мп эфира. Водный слой отделяют и наносят на колонку (1 х 10 см) с Амберлитом

JRA 10 {в ацетатной форме), которую затем промывают водой. бб Вытекающий поток н промывные воды объединяют и лиофилизируют, сухой продукт растворяют в 10 мл воды н наносят на колонку (2,3 х 17 см) . с карбокспм етилцеллюлозой. Градиентное элюирование выпол60 няют 0,005 и 0,2 М водными растворами

5779

33 апетата аммония (400 мл каждый } ., Фракции от 495 дэ 540 мл объединяют и лиэфплизируют. Получают 134 мг указанного продукта; (<) -19,62о (с = 0,53%, вода) .

Ал4инэкислэтный анализ: Агg 1,05; 5К3

1,95, A(ol 1.00; T t 0,86, РЬ 1,98)

p — Awol 1,02 (пептиднэе содержание 84%).

Найдено,%: С 52,40; Н 6,55; И 15,65

Н О И„2СН () 2Н О 1О

Вычислено, %: С 52,31; Н 6,91; N 15,57

Пример 26. Получение с, - — ))дав — g tg — Щу — Phe — Ph e — Тур. — Ща — Оу — ЯИ .

Воспроизведена метэдкка примера 25 за исключением того, чтэ вместо Z -P МР-Ok введена ди- Х вЂ” d,g-. АЬО- ОН -аминокислота. Получено указанное соединение в виде белого пушистого продукта; (aL) -20,3%

2 l (C = 0,2%, BOQG), Аминэкислэтный анализ: At g 1,00; 6 81

1,89; АИ 1,02; Tsl 0,88 РИ8 2,00; д-, f Abv 1,04 (содержание пептида 81,5%) .

Пример 27. Получение 5(3-At g— — Gt!s -Phe- Phe- NH>, A. Приготовление Х - М3 - Apg (NO )- Я - 5

-Phe-Phe- NH,, К 0,80 г Z,-At gã (ИО - Ql?q-pQe-рредобавляют 8 мл 25% нэй ).(3р-уксусной кислоты, смесь хорошо взбалтывают при комнатной температуре в течение

45 мин. В реакционную смесь добавляют

100 мл эфира, полученный порошок отфильт ровывают и высушивают в течение 2-х дней над гранулами гидрэокиси натрия в эксжаторе при пониженном давлении. Высушенный

35 продукт растворяют в 10 мл ДМФ, раствор нейтрализуют тризтиламином. В раствор добавляют 0,43 г Z- G<3- 0 л(В, смесь пере лешивают в течение 10 ч, затем добавляют

7 мл воды и отделяют масло. После удаления супернатанта декантацией добавляют

50 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывают, высушивают и чистят переосаждением из смеси ДМФ/зтилацетат. Выход продукта

0,66 r (774 от теоретического), т.пл. о

122эг .(()> -24- 6о (c = 1 01% ДМФ)

Найдено, 4: С 55,95, Н 5,90; И 17,73

Вычислено,4: С 55.,51; Н 5,95; И 17,99

Б. Приготовление 6Р— At g — С ч РИе-РЬе-Ин .

2, 500 2- Ыч- А g (1 10 )- QEq- Tpe=

- 9he - М и растворяют в 30 мл ук 55 суснэй кислоты и восстанавливают над палладиевой чернью в течение 7 ч. Катализатор отфильтровывают, уксусную кислоту отгоняют при пэниженнэл давлении. Остаток раствэряют в .10 мл воды и раствор пропус- 60

34 кают через колонку (1,8х10 см) с карбоксиметилцеллюл эзэ й.

Элюирэвание выполняют методом линейного градиента, испэльзуя 0,1 М водный раствор ацетата аммония (700 мл) и

1 М водный раствор ацетата аммэния (700 мл). Фракции эт 410 до 515 мл объединяют и лпэфилизируют. (1элучают 307мг 2 (65%) белого пушистого продукта. (d.)

17,7о (c = 0,48%, вэда).

Аминокислэтный анализ (гидрэлиз с HLE):

4 g 1, 15; М з 2,00; РИ Ю 2,00 (содержание пептида 8 1,6%).

Найдено,7: С 52,05; 11 6,85; 8 17,22 г "зч0 Н 2С Н О . 2Н О

Вычислено,%. С 52,09; Н 6,97. М 1,09

Пример 28. Получение Э А< - At g—

И - Phe -1 е - н, А. Приготовление 2-D Ate- At g (NO>4. Ю - Р11е — Phe- NH,.

В 8 мл 25%-ной НВп -уксусной кислэты растворяют 0,80 г 2- At p (NO 3-6РчРЬ6 РМ- 11 Н >, раствор перемсчипвают при комнатной температуре в тече п«10 мин.

Прэдукт осаждают, дэбавпг к с «<.-и 100л л этилэвэгэ эфира, осадок отфильтровывают. промывают эфиром и сушат. Сухой продукт растворяют в 10 мл ДМФ, раствор нейтрализуют тризтпламинэм, пж.ле чего добавляют 0,51 r Z 3 - АГ> — o>B Смесь перемешивают в течение 8 ч. ДМФ отгоняют при пониженном давм нип, к остатку добавляют 50 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывают, После высушивания, порошок прэл ывают горячим этилацетатом и переэса кдают пз смеси ДМФ/зтилацетат. Выход продукта

0,799 r (92% эт теоретического); тял.

223-225эС tcL3 -22,3о (с = 0 98%

ДМФ).

Найдено,%: С 56,38; Н 6,07; 1л(17,98

Вычислено%: С 56,69; Н 6,04; 14 17,87

В. Приготовление Э- Ala - At g -GEE-P tte-WOe-Ин„.

600 мг Z-Э-АСа- Агд(N0 )- М -7he-PM- И pQGTB0pglot B 30 мл уксусной кислоты и восстанавливают в присутствии палладиевэй черни в течение 7 ч.

Катализатор отфильтровывают растворитель отгоняют при пэниженном давлении. Остаток растворяют в 10 мл воды и раствор пропускают через колонку (1,8 х 11 сл1) с харбоксиметилсефадексом.

Линейно-градиентное злюирэвание выполняют 0,1 М водным раствором ацетата аммония (700 мл) и 1 М водным раствором ацетата аммония (700 мл). Указанное

=эединение выходит вэ фракциях эт 350

36

35 ло 450 мл. Зти фракции объедяняот и лио. филизируют. Выход 400 мг (73%) белого пушистого продукта, (А ) -22,2 (с —.— 0,51%; вода).

Аминокислотный анализ: Arg 1,01, Q8v

1,03, Alai 1,00; РИЮ 1,99 (содержание пептида 82,3%) .

Найдено,%: С 52,66; Н 6,92", Й 16,82

С„Н О„Н, гС,Н О,-гн,а

29 4 Ф 2 4 2 2 l0

Вычислено,%: С 52,72; Н 7,11; М 16,77

Пример 29. Получение М- Al g

-@с -%he-Pate - ИН,, A. Приготовление Х-РИ6- Al g (N02)

- ЬЬ- Phe,-Pba- ИН,. 1Ü

В 10 мл 25%-ной .НВФ" -уксусной кислоты растворяют 800 мг Z.- Al g(NO l—

Иу" РЬ6-РИ6" ЙН2раствор перемешивают в течение 50 мин. К раствору добавляют

80 мл эфира, выпавший осадок отфиаьтро- 20 вывают, сушат и растворяют в 10 мл ДМФ, Раствор нейтрализуют тризтиламином, зачем добавляют 700 мг 2 — РМ -ОРСР (пентахлорфениловый эфир). Смесь перемешивают в течение 10 ч, добавляют 50 мл 2

1 М водного аммиака. Маслянистый слой отделяют декантацией и туда добавляют воду. Полученный порошок отфилььтровывают я сушат. Смешивают продукт с 50 мл зтилацетата, смесь подогревают, порошок отде- ЗО лиот фильтрованием в,горячем состоянии и чистит переосаждением из смеси ДМФ/этилацетат. Выход продукта (805 мг (92% от теоретического); (dЦ -29,0о (c = 1,0%, ДМФ). 5

Найдено,%: С 60,32; Н 6,02; N 16,10

С, ьН - 09N о

Вычислено,%: С 60,06; Н 5,98; N 16,29 о

В. Приготовление Phe- At y-Ggs- РИ8—

=Phe,- NH

В 6 мл безводного фтористого водорода растворяют 500 мг Z-Phe" Агg(NO )2 45

-Gt -Рhe-Phe- МН и раствор перемешивают при -10оС в течение 40 мин. Фтористый водород отгоняют, а остаток растворяют в

10 мл воды. Раствор пропускают через колонку (0,9 х 15 см) с Амбериитом JRA,-4lC 5О (в ацетатной форме), который предварительно промыт водой. Вытекающий поток (зфлюент) объединяют с промывными водами и смешанный раствор лиофилизируют. Получают 402 мг указанного соединения.

Аминокислотный анализ: Alp 1,01; Иу

0,98; Р) 6 2,94, (содержание пептида

86 2%)

Пример 30. Получение Leu- Avg—

- М v - Phe - Phe - f sr - NH . г

А. Приготовление Z-A g (N0 )- С Оу-Phe2

=Phe-T r - NHz.

В 100 мл ДМФ растворяют 12,2 r

N H g гидрируют в присутствии палладиевой черни в течение

5 ч. Катализатор отфильтровывают и добавляют 8,6 г g " A i g (N02 QCq-ОН н l, 3 r

НОЙ В.

Реакционную массу охлаждают льдом и добавляют 4,95 r ДЦГКДИ. Смесь перемешивают в течение 12 ч.

Образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают, в фильтрат добавляют 1 л воды. Полученный гелеобразный осадок отфильтровывают и переосаждают из метанола и воды. Выход продукта 16,25 г (91,8% от теоретическо24 го); т.пл. 181-184 С; Щ -16,0о (c=

1,01%; ДМФ).

: Найдено,%: С 58,02 iH 5,98; 8 15,66

С4Ъ о О М1 ° М20

Вычислено,%: С 58,35, Н 5,92, N 15,83

Б. Приготовление А д -Ыу-Р е-РИе"Т . — NH

600 мг Z-A>g(NO )"-3Ь-Phe-Phe2

T l"- МИ 2 растворяЮт в 30 мл Ñ Hc«À кислоты, гидрируют в присутствии палладиевой черни в течение 9 ч. Катализатор отфильтровывают, растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток растворяют в 15 мл воды и чистят, пропуская че «ез колонку (1,3 х 11 см) с карбоксиметилсефадоксом. Линейно-градиентное алюирование выполняют 0,1 М водным раствором ацетата аммония (500 мл) и 1 М водным раствором ацетата аммония (500 мл). Фракции от 250 до 420 мл объединяют и лиофилизируют. Выход продукта 416 мг (72,5 от теоретического); а ) -7,6о (с =0,4%; вода).

Найдено,%: С 55,81; Н 8,83; М 14,78

СЗ5 и И(36 (9 2 С2Н О 2Н20

Вычислено,%: С 55,37; Н 7,03; N 14,90

Аминокислотный анализ: А "Р1,02; Яу

1,00; Ту ) 0,91; РЬ6 2,02 (содержание пептида 82,5%).

В. Приготовление 2" Le О - А Гg (М 02 l—

-Ы - Рпе-Рйе -Тчг- ИН

K 700 m 2 дгд<МО )-Czбч-Phe-Phe2

"Т ) -NH2добавляют 0,2 мл анизола, 7 мл 25%-ной НВг -уксусной кислоты.

Смесь встряхивают при комнатной температуре в течение 40 мин, затем добавляют

100 мл этилового эфира. Выпавший осадок отфильтровывают, сушат и растворяют в

10 мл ДМФ. Раствор нейтрализуют тризтиламином и добавляют к нему 344. мг .Z — Leu — Обы (й -оксисукцнннмидный эфир).

Смесь перемешивают в течение 12 ч. ДМФ

37 отгоняют при пониженном давлении, к остатку добавляют 50 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывают, чистят переосаждением иэ метанола и воды. Выход продукта 560 мг (70,9% от теоретического), т пл 193 195эС 3k/ -18 9о (с = 1,13%, ЛМФ).

Найдено,%: С 58,72, Н 6,22, Я 15,36 49 ь1 11 11 2

Вычислено,%: С 58,96; Н 6,36; М 15,44

Г. Приготовление 1.60- А! р -ЯСy- phе- РЬЕ-Ò -1!И .

В 30 мл уксусной кислоты растворяют

400 мг Х- Leu- А!(у(ИО )-GE -9he-Phe=T3t - NH, восстанавливают и присутствии палладиевой черни в течение 10 ч. Катализатор отфильтровывают, растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток растворяют в 5 мл воды и чистят, пропуская раствор через колонку (2,6 х 22 см) с карб20 жсиметилцеллюлозэй.

Градие!ттное элюирование вылолняют

0,005 М водным раствором ацетата аммония (700 мл) и 0,2 М водным раствором ацетата аммония (700 мл). Фракции от

830 до 910 мл объединяют и лиэфнлизируют. Выход продукта 217 мг (55,5% эт теоретического); (А) -14,9о (с = 0,47%; вода) .

Найдено,%: С 55, 71, Н 7,12, N 14,81

Вычислено,%: С 55,43; Н 7,24; 14,37

Аминокислотный анализ: А! Ц 1,03; Q И

1,00; L9v 1,00; Р1 е 2,00; Т г 0,85 з5 (содержание пептида 78,0%).

Пример 31. Получение с - Abu"Aig- И " РВЕ-Phe-Т Г"-НН2.

Воспроизведена методика примера 30, за исключением того, что вместо; - LeU 40 используют Х-А" АЬЦ и получают ука занное сэединение. (!!(.) 1 -13,6э (с =

= 0,32%, вода), AMHHoKHcl! îòíûé анализ: Ат т1.02, ЯРА

0,9R; д.-Abu1,04; Phe 2,00; Т г 0,92 45 (содержание пептида 81%) .

Пример 32. Получение !"11.8-A1 g-4И-Phe-Phe =Г - NH, 4

Повторена методика примера 30 за исключением того, что вместо g- Leu ис 5О пользуют Z — г1В6 и получают указанное соединение, (с 1> -14,3о (с = 0,4%;вода).

Аминэкислотный анализ: Аг(т 1,00; Q6g

0,97; Nfe 1,04; Phe 2,03; Т гn,91 (содержание пептида 84%) .

Пример 33. Получение 4D8- А! ge. phd pQe - fl ЦН

В 10 мл ДМФ растворяют 400 мг

Агg -5Bv — рЬЕ- рЬЕ- Т г- и Н диацетата, полученного пэ примеру 30 Б, добавляют

38

300 мг Х- VA6 ONÂ . Раствор нейтрализуют триэтнламином и перемешнва!от в течение 10 ч, затем к нему добавляют

50 мл эфира и выпавший осадок отделяют фильтрованием, промывают этилацетатом

i! Сушат. Зтэт продукт растворяют в 30 мл смеси уксусная кислота/вода (1:1) и восстанавливают в присутствии палладиевой черни в течение 4- ч. Катализатор отфильтровьюают и фильтрат концентрируют досуха, OcTGToK растворяют в 10 ф(л воды и чис тят с пэмошью хроматэгпа1!ии так ие, как, э примере 30 В. Выход продукта 360 мг, Q„) -13,7э (c = 0,5%; вода).

Аминокислэтный анализ: А> g" 1 02 М

1,00; М В 0,97; Pate 2,04; Т г 0,97 (пептидное содержание 86,2%) ..

Пример 34. Получе!и!е P -Alai"Aig.

2"

A. Получение Х - А! g (NQ !-Q fq - QQ$.

70,7 r Х- А1 К(ИО )-GH раствэряют в 200 мл тетрагидрофурана и, охлаждая на бане со льдом, добавляют 40,5г

2,4-динитрофенола н 45,4 г ДСС. Смесь перемешивают 4 ч. Параллельно с этим

30,7 г Q8s-Oft >gal суспендируют в

200 мл тетрагидрофурана и, охлаждая на бане со льдом, сусиензию нейтрализуют

30,8 мл триэтиламина. Образэвавы!уюся

ЙШМ отфильтровывают, к фильтрату д»бавляют раствор активирэваннэго эфира, полученного по описанной методике, смесь перемешивают в течение нэчн. Раствор концентрируют и остаток растворяют в 500 мл этилацетата. Раствор промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (200 мл х 3), 1 н. соляной кислотой (200 мл х 3) и насьпценным водным раствором хлористого натрия (200 мл х 3), после чего сушат над сульфатом натрия.

Раствор концентрируют и продукт кристаллизуют из системы этилапетат/петролейный эфир. Кристаллы отфильтрэвыва!эт, перекристаллнээвывают из системы этилацетат/петролейный эфир. Выход продукта

70,0 г (79,8% от теоретического); т.пл.

109-110эС (А) -3 4э (с = 1%; ДМФ).

Найдено,%: С 49,26, Н 5,79; N 18,55

С„H,С S,.

Вычислено,%: С 49,31; H 5,98, N 19,17

Б. Получение Z- A! g (NO>3 Ь OH.

200 г Z" Атц(ИО )-QCs-OE.K суспендируют в 100 мл ацетона н, охлаждая на бане со льдом, добавляют 64 мл 1 н. вэднэгэ раствора Гидрээкиси HdTpHH. Смесь перемешивают 2 ч. при кэмнатной тэмперату-ре.

После нейтрализации избытка щелочи соляной кислотой раствор упаривают при цэни-5 77975

40.«, т„п р>,>,>:.««,п>«р и g эс > атку добавляют

100 .>,:д воды, Иераствориющпйся осадок эч"::,нльтрог>ыаают. Фитптрат пэдкислпют соланой кислотой н выпадающие кристаллы этдедя«от >)«ищ,трованпем. Выход продукта 18,3 г (93, РЬ от те ретическо3 э), т,пл 1 03

105ос; (() Э -25,9о (с - 0,9%; ДМФ).

НаРденэ,%: С 44,48; Н 5,35; И 19,53 биоде "Р

Вычислено,%: С 44,86; Н 5,65; И 19,62

С. Получение X "peg (NG )-98>-рhe- р)-.>8- NH

3,91 г К-Ph« РЬВ- «"«Hг растворчют в смеси 60 мл ДМФ и 40 мл метанола ц восстанавливают в присутствии цалладневэй черкп в течение 14 ч. Катализатор отфильтровывают а растворнтель упаривают при пониженном. давлении. Остаток растворяют в 30 мл ДМФ. Параллельно с э«нм 6,80 г Z A3 g(NOг)-6 " ()Ц вводят B 50 мл тетрагцдрофурана и > эхла2кдая смесь на бане со льдом, добавляют 3,23г

НО И В и 3,71 г ДЦГКДИ. Полученную смесь перемешивают B течение 5 ч Образовав шуюсн ДОГМ отфильтровывают и к фильтрату добавляют полученный аминокэмпонент (>«">he Phe Нг ). Смесь оставлЯют на ночь прц постоянном перемешивании. Пэсле ут«ар«п3а««ия растворит>эля КрВ пониженном давлении R остатку добавляют 100 мл воды, н эбразучошееся при этом твердое порошкообразное вешество отделяют фильтр ОВаннем о

Порошок, собра> ь>й на фильтре, высу цп«вают„«п«ром»>=>вают этп«>чацетатэм и перекристаллпзовь«вают из смеси sYaHDJll/ýòèõ«/ ,Йцегат. Вь«ход продукта 8,34 г (72,7%

-«Геэретйческэго); lf ff«Jlf 1 1 2-1 1 3 C >

3d-) =21,6" (c = 1Ъ; ДМФ).

Найдено,%: C 56,75,H 5,72; И 17>40

6 М О И, Я 0

Вычцслено, о.. С 56,58; Н 6,01; Й 17,47

Д. Получение Š— Ъ -A8Q -О«««Ь

3 >35 Г А P APQ «QH и 3>23 г

Н ОИ В рас-х.ворлют Q 40 мл:Ретрах идрэфурана и после охлаждения смеси иа бане сэ льдом добавлтют 3,71 f ЙК"КДИ. Смесь эставлч От BB яэчь прп пэ> тэяниом переме ииваийи B образовавшуюся ДОГМ этфиль трэвывают. Раствэритель упаривавт при пониженном давлении и к остатку добавляют пир эбензэл. Образовавшиеся кристаллы. этфип трэвывают и перекристаллизэвывают нз ацетэнитрила. Выход продукта

3,83 г (66,4% от теоретического); тлл.

125126эс

Найдено,%: С 62,52; Н 5,18; г«7,29

C H О И го zo б 2

Вычислено,%: С 62,49; Н 5,24 7,29

E. Получение Z-p Ala- А (1чО «вЂ”

"(ч-Р пе- Phe-NH .

К 1,06 r Z-A g -CP -TPe М->««> добавляют 10 мл 25%-ного раствора HB s уксусной кислоте, смесь встряхивают при комнатной температуре в течение 40 мин, после чего добавляют диэтиловый эфир. Выпадавший осадок отделают

1О фильтрованием, высушивают прн пониженном давлении в эксикатэре над гидроокисью на трии и растворяют в 10 мл ДМФ. После охлаждения раствор нейтрализуют 0,84 мл триэтиламина и добавляют 0,69 г 7- Ь—

1ч А О 0N S . Смесь оставляют на ночь при постоянном перемешивании, затем растворитель упаривают при пониженном давлении и к остатку добавляют 50 мл воды.

Осадок этфильтрэвывают, сушат, промывают этнлацетатэм н переосаждают из смеси вода/диэксан/этилацетат. Выход продукта

0,98 г (83,3Ъ эт теэретическэгэ), т.пл.

161-163 С; (« ) -20,9э (с = 0,9%;

ДМФ).

Найдено,%: С 56,84; Н 5,88; И 17,50

Вычислено,,: С 56,69; Н 6,04; И 17,89

Ж. Получение р Мс A g — Qts Рhe-Phe-ИН,.

800 мг g-p-AEa-Аг (ИО )-GEw— Phe-Phe- ИН раствэряют в 40 мл уксуснэй кислэты и восстанавливают над палладием в течение 14 ч, после чего ка«;> тализатэр этфильтрэвывают, а раствэритель упаривают при пэниженнэм давлении. Остаток вносит и кээнку (2,5 х 9 см), заполненную карбэксимегилсефадэксимэм, и хроматэграфируют, используя линейно-градиент,«О ную элюцию вэдньэ«и растворами ацетата аммония: 0,01 и 1,0 н. (по 700 мл каждогэ раствора).

Фракции эт 780 до 990 мл объединяют и лиэфилизируют. Выхэд продукта 500 мг (66% эт теэретическэго); jg ) -13.9 (с = 0,5%; вода).

Найдено,%: С 53,75; Н 7,07; N 17,15

С29Н4ФОФйг гсхн402 Н20

Зо Вычисленэ,Ъ: С 54,00, Н 7,01; И 17,18, Аминэкислэтный анализ: Аг « 1,00 (1), Юм 1,00 (1); The2,0 (2) (величины в скэбках соответствуют теоретическим значениям). Содержание пептида 76%.

55 Пример 35. Пэлучение ) - АЬо-Агд -йЬ-9he — РЬе — NH . г

А. Получение 2.- -ht)u- ORB.

4,75 г Z-$ -4Ъц-QH и 3,94 г НОИ В раствэряют в 4О мл тетрагидрэфурана и пос® ле охлаждения иа бане сэ льдом добавляют

577975 б

И

30

41

4,54 r ДСС. Смесь перемешивают в течение 6 ч, образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают. После этого растворитель упаривают при пониженном давлении, а к остапу добавляют 30 мл дпэтилового эфира и затем небольшое количество воды. Выпадавшие кристаллы отделяют фильгрованием. Выход продукта 6,0 г (75,3% от теоретического); т.пл. 66-69 С.

Найдено,: С 63,39, Н 5,42; И 7,06

С Н О И

Вычислено,%: С 63,31, Н 5,57; 1ч 7,03

Б. Получение 2- - А13Ц-А т (N0 1-6j8v- Phe-Phe- NH .

2, 0 53 г Х A1"g (иО ) И " е >4е

- г1 Н обрабатывают раствором А(51 в уксусной кислоте аналогично примеру 34Е и растворяют в 15 мл ДМФ. После нейтрализации раствора триэтиламином добавляют

0,44 г Z- " АЬи-014Ü. Смесь оставляют на ночь при постоянном перемешивании. Растворитель упаривают при пониженном давлении и добавляют воду. Образующееся твердое порошкообразное вещество отфильтровывают и высушивают. Затем промывают этилацетатом и переосаждают из смеси этанол/вода. Выход продукта 0,38г (65% от теоретического); т.пл. 167-170 С, (g)2 4 21 2о (с = 1 О% ДМФ)

Неедеее, Ъ:С 57,14, Н 5,10; Н17,55

С Н Оч )(1о 412 Н О

Вычислено,%: С 57,20, Н 6,19; К 17,56

С. Получение "- АЪц Агg ЙРч =The"

-Phe-1ЧН .

300 мг 2- у -АЪо A(g(N0 )- Cits-pÜâ2

-Phe-Ки растворяют в 30 мл уксусной кислоты и в теченйе 6 ч гидриру1от над над палл адеим.

Катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают при пониженном давлении и остаток хроматографируют на карбоксиме-. гилсефадексе на колонке (1,8 х 10 см). Хроматографию проводят, используя линейноградиентную элюпию водными растворами ацетата аммония: 0,005 и 1,0 н. (по

350 мл каждого растворе). Фракции от

250 до 340 мл объединяют и лиофилизнруют. Выход продукта 180 мг {63% от теоретического)е fД.) -15,0 (с=0,5%; вода) .

Найдено,%: С 53,93; Н 7,29," М 16,34

С„Н4,О И, 2С,и О, З 2Н,О

Вычислено,%: С 53,95 Н 7,19, И 16,66

Аминокислотный анализ: АЩ1,00(1), 1,00 (1); Р)1Е1,94 (2); сод какие пептида 76%.

Пример 36. Получение д - Ачс»0- Ar g 4 ч - р пе- Phe.-14Н .

А. Получение 2 d Ava Г-- А го (gQ 1Z

-И -phd- рhe- нн, 0,80 г 2- A

14Н 7 обрабатывают раствором НВг з уксусной кислоте аналогично примеру 34I-", и растворяют в 10 мл ДМФ. Раствор ней трализуют триэтиламином. Параллельно с э гим 0,30 r g- Ю- Avpf-QMu

0,24 r НОИ В растворяют в 5 мл тетрагидр офурана.

0,27 r ДЦГКДИ добавляют в реакциэнную смесь, охлаждаемую на бане со льдом, смесь перемешивают в течение 3 ч

ДЦГМ отфильтровывают и фяльтрат добавляют к аминокомпояенту (Н-8-AVQIE-A g(ИО, ) И -РЬе-Phe - NHq3, подученному по описанной методике. Сметь оставляют на ночь при постоянном перемешивании. Растворитель упаривают пря пониженном давлении и к остатку добавляют воду.

Выпавшее твердое порошкообразное вжцество отделяют фильтрованием и высушивают. Затем его промывают этилацетатом и переосаждают иэ смеси ДМФ/этилацетат. В лод продукта 0,62 г (70% от теоретического); т.пл 154-157оС (д ) -13 Оо (<- = 1 0

ДМФ).

Найдено,%: С 57,84," Н 6,42 N16,86

С Н, О„И, Н О

Вычислено,%: С 57,69; Н 6,33; )4 17,25

Б. Получение 8- Ача - Аг -6 »-РИЕ-РИе-11Н

500 2- Ачхой- pr g(NO>)- Gts-Р e14Н растворяют . в 30 мл уксусной кислоты и гидрируют над палладием в течение 5 ч. Катализатор отфильтровывают е растворятель упаривают при пониженном давлении. Остаток хроматографируют :, на карбоксиметилсефадексе (колонка 1,8 х 9 см) элюцией в линейном градиенте воднымй растворами ацетата аммония 0,1 и 1,0 н. (по

500 мл каждого раствора). Фракции от

290 до 370 мл объединяют и лиофилизуют.

Выход продукта 290 мг (61% от теоретического); (4.) -12,6о (с = 0,5%; вода).

Найдено,%: С 54,34; Н 7,35; М 16,20

С Н О К 2(- Н О. 3/2Н

Вычислено,%: С 54,53; Н 7,32, . 14 16,36

Аминокислотный анализ: Atg 1,11 (1), 4И 1,00 (1); 7)18 2,04 (2); содеркание пептида 81,4%.

Пример 37. Получение E- Асо1р-Аг g -ЙЬ-Phe-р)1е- НН .

Z.

А. Получение Z- ".- Aced-A1 g (МО )

- 4И-Phe-the- NH .

0,80 i- 2,- A1g<иО >-Мм Phe-РheИЫ обоабатывают раствором НВ1 в уксусной кислоте по методике примера 3417

577975 и растворяют в 10 мл ДМФ. Раствор нейтрализуют триэтиламином . Параллельно с этим 0,32 г .7. — f -Лсвр-ОН и 0,24 г

HON B растворяют в 5 мл тетрвгидрофурвна и добавляют 0,27 г QCC при одновременном охлаждении смеси на бане со льдом.

Смесь перемешивают в течение 3 ч. Образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают, фильт рат добавляют к аминокомпоненту (Н- А я (N0,) - Ич - рhe - Phe - ("a),i полученному по описанной методике, и смесь оставляют нв ночь при постоянном перемешиввнии. Рвстворитель отгоняют при пониженном дав енин, к остатку добавляют воду. Образующееся твердое порошкообразное вещество отделяют фильтрованием и тщательно высушивают.

Затем его промывают этилацетатом и перекристаллизовывают из смеси ДМФ/зтилвцетвт. Выход продукта 0,49 г (55% от „ теоретического); т.пл. 102-104оС; jd.)

20,0 (с 1,0%; ДЯФ) .

Найдено,%: С 57,86, Н 6,40; М 16,76

С Н ОИ НЕЖНО

Вычислено,%: С 57,69, Н 6,33; И 17,25

Б. Получение t- Ассар- Arg Сз - phe-yhe- ИН

400 Z-8-Асар-д g(NO ) gg„

"Phe-Phe-NH@ растворяют в 30 мл уксусной кислоты и в течение 7 ч гидрируют под палладием. Катализатор отфильтровывают, а растворитель упвривают при пониженном давлении. Остаток наносят на колонку (1,8 х 10 см), заполненную карбоксиметилсефадексом, и хромвтографируют линейно, щ градиентной элюцией водными растворами ацетатв аммония: 0,1 и 1,0 н, (по 500мл каждого раствора). Фракции от 250 до

330 мл объединяют и лиофилизируют. Выход продукта 200 мг (51% от теоретического); td.j> -9,9о (с = 0,6%; вода).

Найдено,%: С 54,24; Н 7,26," N15,76 з н47Ц и Я с Н О

Вычислено,%: С 54,46; Н 7,49; N15,88

Аминокислотный анализ: Atg 1,00 (1),"

Иу 0,98 (1), РЬе 2,00 (2); с -Асар(не определяли ; содержание пептидв 79%.

Пример 38. Получение Ьч5 — At -йЬ- Phe- Рйе- NH2.

А. Получение ди- 2.-Ьч.ь- t g (0 )

- С Ь -7he - Phe - NH а

2.

0,80 г 2- At g (NQ )- QEa - Phe -Phe 4 х обрабатывают раствором НВ в уксусной кислоте по методике примера 34С, б а затем растворяют в 10 мл ДМФ. Раствор нейтрализуют тризтиламином.

Параллельно с этим 0,54 г ди- Е чЬ-GH ,< 0,26 r HG5 B растворяют в 5 мл тетрагидрофурана и добавляют 0,30 г,ДЦГКДИ, %

44 охлаждая смесь в бане со льдом. Смесь перемешивают в течение 4 ч, образовавшийся осадок ДИГМ отфильтровывают, а фильтрат добавляют к вминокомпоненту (H Atg -(NG ) Q3v Vhe 7he NH ), полученному по описанной методике. Смесь оставляют на ночь при постоянном перемешивании. Рвстворитель упаривают при пониженном давлении, а к остатку добавляют воду. Образовавшееся твердое порошкообразное вещество отделяют фильтрованием и тщательно высушивают. Затем вещество цромыввют зтилацетатом и переосаждают из смеси ДМФ/зтилацетвт. Выход продукта

0,82 r (77% от теоретического), т.пл, 200-204оС (разложение); $ А) -20,5 (с = 1,1%, ДМФ).

Найдено,%: С 59,04; Н 6,13; Н 15,78 с4,ну9011М„„- И2 Нао

Вычислено,%: С 59,06; Н 6,20; М 15,79

Б. Получение Ьчз- At g - 4Ич - P he- Рйе2

600 мг ди- Z- L - At д (й 0 ) — - G Сч- р е-РНе- ИН растворяют в 30 мл уксусной кислоты и в течение 6 ч проводят катвпитическое восстановление нвд пвлладием.

Катализатор отфильтровывают, а растворитель упаривают при пониженном давлении.

Остаток вносят в колонку (1,5 х 11 см), заполненную кврбоксиметилсефадексом, и хроматографируют, используя линейно-градиентную злюцию водными растворами ацетата аммония, 0,1 и 1,0 н. (по 700 мл каждого раствора). Фракции от 650 до

760 мл объединяют и лиофилизируют. Выход продукта 280 мг (52% от теоретического); (о(.) -4,3 о (c = 0,5%, вода) .

Найдено,%: С 52,64; Н 7,38; (16,42

С H О И BQ H 0 ° 2Н 0

Вычислено,%: С 52,52; Н 7,42; М 16,12

Аминокислотный анализ: А ц 1,06, (1);

Ь 1,09 (1); Q6y 1,00 (1); Р3е

1,97 (2)", содержание пептида 73%.

Пример 39. Получение,у-gо b — Агg- цЕч Н1е - Phe- NH, А. Получение ди- Z-I>ab- А g (ÉÎ вЂ”

- 48ч- Рhe — Phe- NH х

0,80 r Z-Atq (НО )-4йч Phe-Phe- МН обрабатывают раствором НВг в уксусной кислоте по методике, описанной в примере 34 Е, и растворяют в 10 мл ДМФ, после чего раствор нейтрализуют триэтиламином. Параллельно с этим 0,50 г ди— Z - Ф,у -Эс Ъ-ОН и 0,26 r HON В растворяют в 5 мл тетрагидрофурвна и добавляют 0,30 r ДЦГКДИ при одновременном охлаждении смеси в бане со льдом. Смесь перемешивают в течение 4 ч, и образовавшуюся ДЦГМ удаляют фильтрованием.

577r) 7b

Фильтрат добавляют к полученному ами»»о. кол»понентУ (Н- Аг т (N 0z)- 4 И Р ))6- РЬР." — 1 »Н 1 и смесь эсгавлятот на ночь при постоянном перемешивании. Растворитель уиаривают при пониженном давлении, а к остатку добавляют воду. Выпавший осадэк этфиль-.ровывают и тщательно высушивают. Затем его промывают этилацетатом и переэсаждают иэ смеси ДМФ/этилацетат. Выход продукта 0,82 г (78% эт теоретическэгэ); 1») т.пл. 184-188оС; (а(1 -19,5 (с =1,1%;

ДМФ).

Найдено,%: С 57,95; Н 5,91, 1(16,19

46 55 < » » 2

Вь»числено,%:С 57,79, Н 6,01; И 16,21

Б. 11элучение д-, ) - ЭыЬ Агg 6Рч—

- The — The- ИН

600 мг»»»»»- L д-, f Dab А» Я (М0 )

-G9s %he -The-ЙН растворяют в 30 мл уксусной кислоты и в течение 6 ч проводят каталитическое восстановление над палладием. Катализатор отфильтровывают, а растворитель упаривают при пониженном давлении. Остаток наносят на колонку { 1,5 х 1 3 см )

r заполненную карбоксиметилсефадексом, и хроматографируют, используя линейно-градиентнутр элюцию водными растворами апетата аммония, 0,1 и 1,0 н. (пэ 700 мл каждого раствора). Фракции от 610 до

680 мл объединяют и лиофилизируют. Вы30 ход продукта 255 мг (46% эт теэретичес23 кого), (А) -12,5э (с = 0,8%; вода).

Найдено, й: С 50,59; Н 7,61; 816,93 з вв 5»1»о С2У402 ЬН20

Вычисленэ,%: С 50,34;Н 7,28; 8 1Ф,31

Аминокислэтный анализ: A1 g 1,00 (1);

Мч 1,00 (1); The 1,98 (2); d., f-Эо(Ь 1,02 (1); содержание пентида 72%, Пример 40. Получение Агg Агф - 40

-Qfs- The- 7be- HH .

А. Получение X- At g (.802) — А3 (ИО )-С,Г -The -Pha -NH .

0,80 г Х - At g(NO }-G6v-РЬа- phe— — 8H обрабатывают раствором НВ1 45 в уксусной кислоте по методике примера

34 Е, и осадок растворя»эт в 10 мл ДМФ.

Раствор нейтрализуют триэтиламином. Параллельно с этим 0,39 г 2.— Аг г(МО ) 0H и 0,2 г 2,4-динитрофенола растворяют в 50

z

5 мл тетрагидрофурана и добавляют 0,25 г

ДСС при одновременном охлаждении смеси на бане со льдом. Смесь перемешивают в течение 2 ч и отфильтровывают образовавшуюся ДЦГМ. Фильтрат добавляют к полученному аминокомпэненту (.Н- АГР" (N> )-46 -The-Phe-NHp эставляют смесь на ночь при яостоянном перемешивании. Растворитель упаривают при пониженном давлении, а к остатку добавляют воду. Маслэобраэ46

Hf,N продукт тщательнс прэл»ь»вак т водой и переосаждают из смеси ДМФ/зтилацетат.

Вь»ход продукта 0,90 r (89% т теэретического); т.пл. 89-92эС; (А3 — 1 7,6э (с = 1,0%; ДМФ).

Найдено, : Г 52.20; Н 6, 16. N 2О,9 1

С„Н„О„1 „в- нР

Вь»численэ,%. С 5 2,05 Н 5, Ж ; Й 2 1,2 5

Б. Получение Alg A / - Cz1!M- Р11Р—

-Phe- NH

700 мг Z- A» g(NQ ) --А» ((И0 )- ЯГчР » НН р 1 е 0 лусуснэй кислоты и в течение 9 ч провов»ят каталитическэе восстановление над палладием. Катализатор отфильтровывают, рагтворитель упаривают при пониженном павлов нии, Остаток вносят в колонку (3 х 18 < t»), заполненнук1 карбэксиметилцелл»олээой, и хроматографируют элюентами: 0,005 и, водным раствором анетата аммония (1,0 л) и 0,3 и. водным раствэрол» япетата аммония (1,0 л) . Фракции от 890 дэ 14 10 мл объединяют и лиофилизируют. 1)ыхэд прэдукта 380 мг (45% эг теэретическэ э1, ».д.) -2,4 . (c = 0,5%; 5%-ная уксусная о кислота) .

Найдено,%: С 51,25; Н 7,29; 1 1 1 1?,»18

С О 1(3С Н,О 3IZH О

Вычислено,%.С 5.1,40, H 7,15; г1 18,93

Аминокислотньй а алиэ: Агр2,02 ("), 1,00 (1); ТОе 2,02 (2}; оде жанне пептида 73%.

П р и л» е р 41. Получение p — АГс»-Aгp- С С ч — P b e - Р в - Тч г - л» Н, A. Получение Š— р — А и ы - А гд (N О )—

-QEs — 0 1

К 26,3 г Z.- Агу (МО )- 4Рч- OEt добавляют 130 мл 25%-ного раствора

НВг в уксусной кислоте и после встряхивания в течение 1 ч при комнатной температуре к смеси добавляют диэтиловый эфир.

Выпавший осадок отфильтровывают и сушат над гидроокисью натрия. Высушенный осадок растворяют в 150 мл ДМФ и после охлаждения раствора на бане со льдом его нейтрализуют триэтиламином. Затем добавляют 23,1 г .- P -, Afa-ÎNÜ и смесь оставляют на ночь при постоянном перемешивании. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в

ЭОО мл зтилацетата, содержащего небольшое количествэ н-бутанола. Раствор промывают водой, насыщенным водным раствсьрэм бикарбэната натрия (100 мл х 3) и насыще вэднь.м раствором хлористого натрия (100 мл х 3), после чего егэ сушат над беэв одным сульфатом натрия. Раств ори- тель о;гоняют при пониженном давлении и

1 добавляют дизтилэвый эфир. Вьшавший оса47

577975 док отфильтровывают и перекрнсталлизовыBAIoT из смеси этанол/этилацетат,, Выход продук га 22,9 r (75% от теоретического); т.пл, 97 99оС.(А) -11,2о (с = 0,9%, ДМФ) .

Найдено,%: С 49,51; Н 6,06; .И 18,93

С 4 К 40

Вычислено,%: С 49,50, Н 6,13, И 19,25

В. Получение Ъ- (" 4 4 - 4>f (N0>)"аЬ- он.

12,1 г z- p-4(a- A g (М )- Рч"ОЕФ растворяют в смеси 50 мл ацетона и 25 мл воды и при охлаждении раствора на бане со смесью льда с хлористым натрием к нему по каплям в течение 30 мин добавляют 27,8 мп 1,0 и. водного раствора гидроокиси натрия. Полученную смесь в тех же условиях перемешивают в течение

1 ч, затем erne 2 ч перемешивают нри комнатной температуре и после добавления

3,8 мп 1,0 и. соляной кислоты ацетон упа« рнвают при пониженном давлении. К остатку добавляют 50 мл воды и смесь подкисляют

6,0 н, соляной кислотой до образования маслообразного вещества, которое вскоре эатвердевает. Полученный твердый продукт отделяют фильтрованием. Выход продукта

10,3 г (86,0% от теоретического); т.пл.

101-103оС; (А -10,2о (с= 1,0%;ДМФ)

Найдено,%: С 46,28; Н 5,41; М 20,01

С ОHäÎ Ц,, 1I2 Н Р

Вычислено,%: С 46,53; Н 5,75; И 19,99

Г. Получение 2- Р ?te -ТчР- ОМe °

5,10 г 1чг-оМе Hcl суспендируют в

100 мп тетрагндрофурана и после охлаждения суспензии на бане со льдом ее нейтрализуют 3,08 мл триэтнламнна. К смеси добавляют 5,99 г 2- Р he-ОН, 3,9-4 г

HO NB и 4,54 г ДЦГКДИ. Реакционную массу оставляют на ночь прн постоянном перемешивании. Образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают, а растворитель упарнвают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 200 мп этилацетата. Раствор промывают насыщенным водным pBGTBDpDM бикарбоната натрия (100 мл х 3); 1 н. соляной кислотой (100 мл х 3) и водой, затем сушат над безводным сульфатом натрия.

Этилацетат упарнвают при пониженном давлении, добавлщот петролейный эфир и образовавшийся студенистйй остаток отделяют фильтрованием н переосаждают из смеси этнлацетат/петролейный эфир. Выход продукта 6,00 г (63% от теоретического); т.пл. 132-133оС; (А1 -9,9 (c= 1,0%;

ДМФ) .

Найдено,%: С 68,07; Н 5,92; М 5,95

С Ч2Э 0 ч

Вычислено,%: С 68,05", Н 5,92; H.5,88

Д. Получение 2- Р? с — Тч — йН

3,0 r Z- РЪс- Тч — оме раст воряют в 40 мл метанола, насыщенного аммиаком, и раствор в запаянной ампуле хранят неделю до образования игольчатых кристаллов. Растворятель упаривают при пониженном давлении, диэтиловым эфиром осаждают продукт, выпавшие кристаллы отфильт10 ровывают и перекристаллизовывают из смеси этанол/вода. Выход продукта 2,61 r (90% от теоретического); т.пл. 217-218 С (dt s> -2Â,6î (с = 1,0%; ДМФ).

Найдено,%: С 67,45, Н 5,88, N 9,05

2Ь 27

Вычислено,%: С 67,66; Н 5,90; N 9,11.

Е. Получение Z- Р?1с -Тч - йН .

К 1,15.r 7,- Р? е-Тч - NH z добавляют небольшое количество анизола и

20 затем 11 мл 25%ного раствора НВ1 в уксусной кислоте. После встряхивания смеси в течение 40 мин при комнатной температуре к ней добавляют диэтиловый эфир.

Образовавшийся осадок отфильтровывают и высушивают над гидроокисью натрия. Параллельно с этим 0,67 г Z, — Р Ие - 0 Н и 0,45 г НОЙВ растворяют в 5 мл тетрагндрофурана и добавляют 0,52 г ДЦГКДИ р при охлаждении смеси на бане со льдом.

Смесь перемешивают в течение 4 ч и образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают. Фильтрат добавляют к раствору полученного по описанной методике аминокомпонента (H-РЬС35 -TYv ЙН ) в 10 мл ДМФ, нейтралиэованномуугриэтиламином, и смесь оставляют на ночь при постоянном перемешивании. Расчворнтель упаривают при пониженном давлении и к остатку добавляют воду. Образо40 вавшиеся кристаллы отделяют фильтрова нием, промывают этилацетатом и перекрйсталлизовывают из смеси ДМФ/этилацетат.

Выход продукта 1,01 г (74% от теоретического); т.пл. 218-221оС (разпожение), 45 (аt-3> -27,7о (с = 1,0%; ДМФ).

Найдено,%: С 69,01; Н 6,02; N 9,23

С н 0 й4.

Вычислено,%: С 69,06; Н 5,96; N 9,21, Ж. Получение 2— - p-АЕа -Ar (N0 )бр

- 4Еч- Pbe - Р he- T - NH г

0,91 г Z- РЪе — Р? е — Тч — NH суспендируют в смеси 30 мл метанола и

20 мл ДМФ и в течение 7 ч проводят ка55 талитическое восстановление. Затем метанол упаривают при поыскенном давлении. Параллельно с этим 0,72 г Z — P- AC>-Atg(NO>)

-Q6v- 0Н н 0,32 г НОЙ В растворяют в

5 мл ДМФ и, охлаждая. раствор на бане со льдом, добавляют 0,37 r ДПГКДИ. Сме ь

577975 перемешивают в течение 6 ч и образовавшуюся ДЦГМ отфильтровывают. Фильтрат добавляют к полученному по эписаннэй методике аминэкомпэненту (К-P иа — P?te -Тч — — AH а ), после чего смесь оставляют на ночь при постоянном еремешивании. Растворитель упаривают при пониженном давлении и твердый остаток растирают в порошок с водой. Получившиееся порошкообразное вешество отделяют фильтрованием и пере- LO сажцают из смеси ДМФ/этилацетат. Выхog продукта 0,88 r (62% от теоретического); т.пл. 174-177 ; А) -15,0о (с = 1,0%; ДМФ).

Найдено,%: С 57,54; Н 6,18; Й16,21 i5

С44.Н О К НаО

Вычислено,%: С 57,79; Н 6,01; l4 16,12

3. П олучение P — А Р а — А ц - Я И - Р*е-РЪе -Тзг- Нн

93

740 мг Z- P -Мсю- Ащ(МО )-0Вч-РЪе-Pbe.-Тчт-HH растворяют в 30 мл уксусной кислоты и в течение 7 ч проводят каталитическое восстановление над палладием.

Затем катализатор отфильтровывают и расъ-, воритель упарнвают прн пэниженнэм давле% нии. Остаток наносят на колонку (1,6 х 15 см), занолненную карбоксиметнж ефадексом, и проводят хроматэгра изо, аспользуи линеВ нэ- радиекгную эпюцню водными расчээра > ми ацетата аммония: 0,005 н 1,0 н. (цэ

700 мл каждого расчэора). Фракии от

580 до 790 мл эбьединяют и лиофкгцижруют. Выход продукта 540 мг (75% от теоретического); (4.) O,Оэ (с 0,5%; вода) .

Найдено,%: C 54,20; Н 6,50; Й14,99 з Н оО Н -2Сан -Оа- ао

Вычислено,%: С 54,06; Н 6,91; И 15 01.

Аминэкислэтный анализ: Агf 0,95 (1);

4 1 1,05 (1); Г 1,00 (1); РИь 2,ОО(2); содержание нептида 74%.

И. Получение днцнтрата P— - А ц- Арр-40 -РЬе-РЬе-Т -ИН .

Ацетат, тригидрат диацетата Р- Аба-Argy- ©

-GIRLS-Ръе -Рt е-Т 3- КН2 (9,33 г) растворяют в 20 мл воды н к нему добавляют 2,2 r моногидрата лимонной кислоты при перемешивании. Образовавшийся кристаллический осадок отделяют фильтрованием н прэмывают небэлыаим количеством холодной воды. Получают 10,4 г соответствуюшегэ дицнтрата, (а 3> -19,6 (с = 1,0; вода) .

Найдено,%: С 52,28; Н 5,87, Й12,46

С бн ро7 1ю СьН О

Вычислено,4: С 52,54; Н 5,82; N 12,25

Пример 42. Получение у -АЬо-At g 4йч -- Рпе-Р1те-туг- ин, 60

А. Получение Z- f ЯЬо — At g (00 )- Яу- ОИ, К 4,38 r Z- Дгg (НО )-С -ОЕФ, добавляют 40 мл 25%-ного раствора НВ1 в уксусной кислоте и после встряхивания смеси при комнатной температуре в течение 30 мин добавляют диэтиловый эфир

Выпадавший осадок отфильтровывают н сушат над гидрээкисью натрия.

Затем егэ растворяют в 30 мл ДМФ и после охлаждения на бане со льдом раст вор нейтрализуют тризтиламином. К раство ру добавляют 4,16 г Z — p — Аbu — ОМВ и смесь оставляют на ночь при постоянном перемешиванин. Растворитель упаривают при пониженном давлении н к остатку добавляют воду, которую затем отделяют декантапией.

К остатку добавшцот диэтнлэвый эфир, выпавший в осадок продукт отфильтровывают и переосаждают нз ацечонитрила. Выход продукта 2,5 r (48% от теоретического), т.. 60-62 С, (d.)" -11,1о (с = 1,0%;

ИИФ).

Найденэ,%: С 50,12; Н 6,51, Й 18,73 аа 33 8 Т

Вычислено,%: С 50,47; Н 6,35; N 18,73

Б. Получение 2 — g — А Оц — Д g (ИО 1—

- еч- он.

2,0 r Z- y — Д ц- Др@ (яО )- цВ «ОЕ1 растворяют в 20 мл ацетона, и охлаждая на бане со льдом, добавляют 5,7 мл 1 н. водного рВсТВорВ гндроокисн натрия. CMecb

ыремешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем добавляют 6 мл

1 и. соляной кислоты и упарнвают ацетон при пониженном давлении. Выпадавшие кристаллы отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси этанэл/вода. Выход продукта 1,86 г (98% от теоретического); т.пл.

113-115 С; (Й) -20,0о (c 1,1%;ДМФ).

B. Получение Z - "- ДЪо- Агф (й0а1-йЬ-%he-Phe-Т г- NH .

К 1,34 г Z- Р пе-РЪе-Ter -NH добавляют небольшое количество анизола и после этого 13 мл 25%-ного раствора

НВИ в уксусной кислоте.

После встряхивания смеси в течение

45 мин при комнатной температуре к ней добавляют диэтиловый эфир и выпадаюший осадок отделяют фильтрованием и высушивают над гидроокисью натрия. Параллельно с этим 0,99 г Z-у--. Дbu — Аг (МО )-Ц8ч= ОН и 0,43 r HONB растворяют в 5 мл

ДМФ и, охлаждая смесь, на бане со льдом, добавляют 0,50 r ДЕ(ГКДИ. Смесь переме шивают в течение 6 ч и отфильтровывают выпавшую в осадок ДОГМ. Полученный по описанной м годике аминэкомпонент (Н-РЪй-Phe-Тчи-ИН )растворяют в 10 мл ДМФ и й

577975

51 йейтрализуют раствор тризтиламином. К этому раствору добавляют раствор полученного активированного эфта и смесь оставляют иа ночь IlpR постоянном перемешивании.

Растворитель упаривают при пониженном дав- 5 ленин и к остатку добавляют воду. Выпавmee порошкообразное вещество,.отделяют фильтрованием, промывают этилапетатом и переосаждают из смеси ДМФ/этилацетат.

Выход продукта 1,12 r (58% от теорети- 10 ческогo)g т.пл. 139,5-141оС; (с4.). 13,2о (c - 1,4%; ДМФ).1

Найдено,%: С 57,76; Н 6,43; М 15,91

Вычислено,%: С 58,19 Н 6,13; И 15,89.

Г. Получение у - Abv- Àrä.-4Ь- Рйе- ЬЕ-Т г-ИН .

800 мг Z- y - Abu-Д1 (ИО )-6 v-pbe-рйе-Tsv-1П1 растворяют s 30 MIl уксусной кислоты и в течение 14 ч проводит каталитическое восстановление, используя палладий s качестве катализатора.

Катализатор отфильтровывают и растворитель удаляют упариванием фи пониженном

25 давлении. Остаток вносят в колонку (1,5 х 10 см), заполненну карбоксиметилсефадексом, и хроматографнруют, используя линейно-градиентную элюнию водными растворами апетата аммония: 0,1 и 1,0 н. (по

31У

700 мл каждого раствора). Фракции от

410 до 600 мл объединяют и лиофнлизируют. Выход продукта 412 мг (52% оТ ого); Щ -18 1о (с =- 0,5%; вода).

Найдено,%l C 54,08; Н 7,07; Н 14,60

CìHèа? Н,ь.а ахиа Сх. АНХО

Вычислено,%: C 54 02; Н 7,10; Я 14,52.

Аминокислотный анализ". Al p 0,96 (1); 40 (;Е 1,00 (1); рЬе 2до(2); со< жанне пептида 84%. и р и м е р 43. Получение р- Дсцр-А (- Qe -1 he-РИЕ- 1 (р- НН .

А. Получение Х-С- А с р - Аг г(ИО )- 45

-(И-оЫ.

2,42 г 2.- Al g(NO }- 4Вз-ОЕX встряхивают с 12 мл 25%-ного раствора

HBt в уксусной кислоте при комнатной температуре в течение 40 мин, добавляют 5О диэтиловый эфир. Вьптадавший осадок отделяют фильтрованием и высушивают над гндроокисью натрия.

Параллельно с этим 1,33 r Z- Я-Асар-OH и 0,99 r H0 NB растворяют в 5 мл тетрагцдрофурана и, охлаждая смесь на бане со льдом, добавляют 1,14 г ДСС.

Смесь перемешивают в течение 4 ч н отфильтровывают образовавшуюся ДЦГМ.

Полученный аминокомпонент растворяют в

52

10 мл ДМФ и после нейтрализапни раствора триэтиламином к нему добавляют полученный раствор актнвированного эфира.

Смесь оставляют на ночь при постоянном перемешивании и отгоняют растворитель при пониженном давлении. Остаток растворяют в 50 мл э-.илапетата, промывают раствор водой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл х 2), и вновь водой, после чего сушат над безводным карбонатом натрия. Растворитель отгоняют при пониженном давлении и добавляют к остатку петролейный эфир. Выпавшие кристаллы отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси вода/этанол/этилацетат.

Выход продукта 2,1 г (76% от теоретического}; т.пл. 85-87 С; (4.1 -11,9 (с = — 1,0%, ДМФ).

Найдено,%: С 52,43", Н 6,64; N 17,76

Вычислено,%:С 52,2 6; Н 6,76; 1 17,78

Б. Получение Z -Š— Acap- Alp (110 }-СИ -ОН.

1,8 г Z-E- А «р-A q (NO,)-ge -0EK растворяют в 10 мл ацетона и, охлаждая раствор на бане со льдом, к нему добавляют 2,9 мл 2 н. водного раствора гидроокиси натрия. Смесь перемешивают нри комнатной температуре в течение 2 ч. Затем добавляют 2,5 мл 1 н. соляной кислоты, унаривают апетон при пониженном давлении и к остатку добавляот 10 мл воды, нерастворившийся осадок отфильтровывают, Фильтрат подкисляют 1 н. соляной кислотой и выпавшие кристаллы от ильтровывают. Шход продукта 1,59 r (93% от теоретического); т.пл. 97,5-99 С; Ы3 -10,7о (c = 1 0%; ДМФ).

Найдено%: С 48,50; Н 6,28; Ч 18,23

С Н О Н Н 0

Вычислено,%: С 48,79; Н 6,52,, N18,10.

В. Получение Z-Е-Асар- цг (NQ )-54m - Ptte-Рйв- Ter NH, К 1,22 r g-Ð Éå-Р Ие-Тчг- НН добавляют небольшое количество анизола, затем 10 мл 25%-ного раствора НВ » в уксусной кислоте. Смесь встряхивают при комнатной температуре в течение 40 мин н продукт осаждают диэтиловым эфиром.

Осадок отфильтровывают и сушат над гидроокнсью натрия. Параллельно с этим

L,05 г 2" Е- Асцр — А1 г(МО )- Еч- OH и 0,36 r НОЯ B растворяют в 10 мл ДМФ и, охлаждая смесь на бане с водой, добавляют 0,42 г ДЦГКДИ. Смесь перемешиваю в течение 6 ч и отфильтровывают образовавшуюся ДЦГМ. Описанный аминоко.лпзнент растворяют в 10 мл ДМФ и нейтрализуют .раствор триэтиламином.

577975

53

К этому ряствору добавляют полученный раствор активирован«эго эфира и смесь оставляют «а ночь при постоянном перемешивании. Растворитель упаривают при пэниженном давлении и к остатку добавляют воду, выпавший осадок отфильтровывают, промывают этилацетатом и переэсаждают из смеси

ДМФ, этилацетат. Выход продукта 1,01 r (57% от теоретического); т.пл. 149-151эС;

Id,3 26 12,9о (с = 1,1%; ДМФ).

Найдено,%: С 59,63, Н 6,43; И 15,03 ,-ó,ьт 1з 1 2

Вычислено,/о . С 59,50; H 6,32; H 15,58

Г. Получение б- Аeор — Атв" — 41. s — Рtе—

-7 пе — 7 т — NH

700 мг У вЂ” E - Асор — Аг (1 О ) - г ) — РИе — ) "г) е — Т r — N Н 2 растворяют в 40 мл уксусной кислоты и в течение

14 ч проводят каталитическэе восстановление, используя палладий в качестве катапизатэра. Катализатор отфильтровывают, раствор«тель отгэнчют при пониженном давлении. Остаток вносят в колонку (1,8 х 12 см), заполненную карбоксиметилсефадексэм и хроматографируют, используя линейно-rpa25 диентную элюцию водяными растворами ацетата аммэния: 0,1 и 1,0 н. (пэ 700мл

l. каждого раствора). Фракции от 430 до

550 мл объединяют и лиэфилизируют. Выход продукта 430 мг (62% от теоретического); (d.1 -13,2 (с = 0,5%; вода).

Найдено,/: С 55,48; Н 7,39; М14,47

Вычислено,%: С 55,43 Н 7,24; Н 14,37 З5

AMHHDKHcJIoTHbIH анализ: Агf 1,00 (1)", Gas 1,00 (1); Ьчь 0,94 (1); Ту

1,00 (1); 1ЗЪЕ 2,07 (2).; содержание пептида 84%.

Пример 44. Получение LI5- Arg- 40

- М - Р пе " Р ?? е - Т г - 11 Н

А. Получение ди-, г- 4s s — Я) д (?40 ) =

- City 0 Et °

Целевой продукт получают по методике прил эра 43 А, используя 2,07 г ди- Z — 45 — Lv« -ОН в виде геля, который переосаждают из смеси вода/эта«оп/этилацетат,.

Выход продукта 2,57 г (73% от теоретического) т.пл. 161-162оС; (д .? -11,9э (с = 1,0 /, ДМФ). 50

Найдено,%: С 54,45; Н 6,05; .8 15,99 2.Н 4. о 8

Вычислено,%: С 54,85; Н 6,33; N15,99

Б. Получение ди- Z— - 1,чэ — At g (NO )

2 — CЕ -ом.

Раствор 2,0 r ди- Z- 1 v s — Агg (N 0 )—

- 1з — 0 Е ? в 10 мл ацетата охле ждают на бане со льдом и добавляют 2,1 мл

2 н. водного раствора гидроокиси натрия, 54

Смесь перемешивают при кэм«атнэй те.fпературе в течение 2 ч. Зятем добявля)эт

1,4 мл 1 н. соляной кислоты и отгоняют ацетон при пониженном дявлен«и. <)стяток разбавляют 10 мл воды и этфнльтровывяктт нераствэрившийся осадок. Раствор полк«в ляют 1 н. соляной кислотой и выпавший студенистый осадок отделяют фпльтрэвя««ем. Выход продукта 1,78 r (93% эт т.»э 24 . етическогэ); т.пл. 131-132,5 С; 1д-1

-10,5Э (с = 1,0Î/, ДМФ).

Найдено,% Г 51,43; Н 5,92; Н 16,23

Н О 11 )г l0

Вычислено,%: С 51,49; Н 6,20;

В. Получение ди- Z - L s — Д г (М 0 )— г

- - P?te - Fee - Ter NH

Используя 1,21 r ди- 1 - Ьч ь - Ar э (Nt! 1ОН вэспрэизводят методику прил эра 43 В. Получают 1,21 г (58% эт теоретического) соединения в виде гели, т.пл, 199 203эС; t ("-.1 -13 3э (с = 1 1)

ДМФ).

Найдено, 4: С 58,70; Н 6,26; N14,7

«т Ья 1 12

Выч«еле«э,%: С 58,75; 11 6,2;); ?4 14, 1

Г. Получение Lv < — А1 g 36ч — Р?)е — Р?1е.

-Тмt — NН

В 30 мл уксусной кислэт1 . растворяют

1,00 г ди- Z - -Lvts- Arg (NO,)- ЦГ - T)heРЪе- Twc 14Н и в присутствии палла2 циевэй черни как катализатора проводят в течение 20 ч каталитичы:кэе восстановление. Катализатор отфильтровывают и расгвэритель отгоняют при пониженном давлении. Остаток хроматографируют на колонке (1,8 х 10 см) с карбэксиметилэсфадексэм, =)люцию эсушествляют методом линейного градиента, используя водные растворы ацетата аммония от 0,1 (500 мл) до 1 н. (500 мм). Фракции от 650 до 890 мл объединяют и лиофилизируют. Выход и on ê26 та 468 мг (50% от теэретпческого); А1)

-10,6 (с = 0,5%; вода).

Найдено,%: С 52,70; Н 7,31; 1114,72 4„Н И ЗСН 0 ФНО

Вьгчислено,%: С 52,84; Н 7,27; )114,43

Аминэкислэтный анализ: APg 1,00 (1)

13 5 0,94 (1); С К 1,00 (1); Т ) 1,00 (1); РЪЕ 2,06 (2); содержание пептида

82%

Пример 45. Получение

А. Синтез ди- Z — с(, — 2mÜ - Агg (N0 j— с,е — о .

В 40 мл диэтилового эфира суспендируют 2,84 r дп- Z — *, tw QcAQ -.О11Д111 А (ДЦГА — дициклэгексиламин) и «шуч<.««ую суспензию встряхивают с (),5 H. c, р577975

Способ получения пэпипептидов эбшсй формулы

Я вЂ” Arg — Й -Phe — РЬе — к

1 2 где R — атом водорода или остаток эсHD8H0A IIJIII нейтРапьной BMIIHoKHclIDTbt, R — нейтральный аминокислэтный остаток, 2

Р— NH, Туг - NH, остаток тирозипьз 3 ного пептида, содержащего в своем составе от 1 до 5 аминокислотных остатков, или остаток амида тирозильного пептида, IIpH условии, что, когда R атом водорода, R соответствует Pro э т л и ч а ю ш и и с я тем, что аминокислоту, соответствующую R < или аргинин, в том числе, когда R представляет сэбой атом водорода или пептидный фрагмент пэлипептида указанной фэрмулы, содержащий аминокислотный остаток R или аргинильную группу в том случае, когда

Р представляет собой атом водорода, в

4 качестве И -концевой аминокислоты, конденсируют с недостающим фрагментом полипептида, причем каждое нз исходных соединений может быть защищено по своим амин о- и карбоксильным группам, которые не должны принимать участие в конденсации, и может быть активирэвано по тем амино» иди карбоксильным группам, которые непосредственно участвуют в указанной реакции конденсации, с последующим удалением защитных групп из полученного полипептиднэгэ продукта.

Приоритет пэ признакам:

26.03.74 при.R - остаток эснэвнэй

1 аминокислоты или остаток нейтральной аминокислоты отличной от Й. -аминокислоты, R — Глицин, Я М Й 2, Ту 1 N H, 25 соединения в виде геля, т.пл. 191-195эС, Сд )Ъ 14,0 (с = 0,9%; ДМФ).

Найдено,%: С 59,13» Н 6,14; N15,46

Вычислено,%: С 59,02; Н 5,95; N 15,02

Г. Получение с, -- 3a Ü вЂ” Arq У - Ptte" 50

-рЪе-ТУ -- NH г

B 30 мд уксусной кислоты растворяют

600 мг ди- g - д., у - 3с Ъ - Агg (И О )- C I6v - 1 Ие - 7 hе — Тчг — NH н, .используя папладиевую чернь в качестве катали- 55 затора, проводят в течение 12 ч катапитическое восстановление. Катализатор отфильтровывают и растворптель упаривают при пониженном давлении. Остаток хрэматрографируют иа колонке (1,8 х 10 см) <-. кар-щ

45 ной кислотой.;-эфирный слой этделятот, промывают водой и сушат над безводным сульфатом натрия. Раствэритепь отгоняют в вакууме и дальнейшие манипуляции с остатком производят в точном соответствии с методикой примера 43 А. В результате получают соединение в виде геля. Продукт переосаждают из смеси вода/этанол/этилацетат. Выход продукта 2,36 г (70% от

24 теоретического); т.пд» 153-156оГ; (сА.)

-9,40 (с = 1,0%; ДМФ).

Найдено,%: С 53,26; Н 5,84; N16,24

Вычислено,%: С 53,56; Н 5,99; М16,66.

Б. Синтез ди- Х вЂ” А,)"- ЭаЪ- Агд (МО )-(;å -ОН.

В 10 мл ацетона растворяют 2,0 г ди- Е" а(, — ЭМЪ - А g (N0>) и к подученному раствору при охлаждении на ледяной бане прикапывают 2,97 мл 2 н. водного раствора гидроокиси натрия. Смесь перемешивают в указанных условиях в течение

1 ч, после чего прибавляют 3 мл 1 í. соляной кислоты. Ацетон отгоняют при пониженном давлении и к. оставшемуся раствору прибавляют 10 мл воды, Нерастворившиеся примеси отфильтровывают и фипьтрат подкисляют соляной кислотой. Образовавшийся при этом желатиноподобный осадок отделяют от маточной жидкости фильт30 рэванием. Выход продукта 1,67 г (90% от теоретического), т.пл. продукта 112113оС; (II(.3 -8,3о (с = 1,1%; ДМФ) °

Найдено,%: С 50,53; H 5,59; N17,19

Н О N H Q

28 36 1о 8

Вычислено,%: С 50,55; Н 5,76; N 16,89

В. Получение ди- Z - с, у — ЭОЪ вЂ” Arg (ИО )- QEv - Phe- РЪе — Тчг — ИН .

Используя 1,12 r ди- Š— Ф-, у — I) uЪ вЂ” 40

-pI gr(NQ )- (zfy Qg, воспроизводят методику примера 43 В. В результате получают 1,02 r (51% от теоретического) боксиметипсефадексом. Элюцию осуществляют методом линейного градиента эт 0 1 н. водного раствора ацетата аммония (500 мл)

K 1 н. водному раствору ацетата аммэния (500 мл). Фракции от 490 дэ 620 мл объединяют и лиофиииэипуют. Выход продукта ль

241 мг (43% эт теэретическэго); t. j

-17,9 (с = 0,6%; вода).

Найдено,%: С 52,12; Н 6,99; N 15,31

Сз и з0 М„З С,Н О, 4Нго

Вычислено,%: С 51,96; H 7,08; Н 14,82

Аминокислотный анализ: А1 д 1,00 (1)

3mb 1,04 (1); 9 > 1,09 (1); Tvr

1,02 (1)," РИ6 2,13 (2), содержание пептида 79%.

Формула изобретения

24.01.75 при R — основной или ней( тральный аминэкислэтный остаток, К вЂ” нейтральный ам инок ис л эти ) и . са атэк, 577975

К ЧН, Т вЂ” NH>, остаток тирозиль. ного и итиле, солеуикаяего в с:воем составе

ot !. ло 5 аминокислотных остатков или его амид, при условии, что, когда R.>,прeac aB58 ляет собой G6Y и Я предгтлвляет собой NH или Tst.— NH, Я< о .почиет

d--аминокислотный остаток; когпа К пр"-лставляет собой прэлин, R< атом гч ропл.

Составитель В. Волкова

Редактор Н. Йжарагетти Техред д Андрейчук Корректор А, Ж алтани

Закаэ 3247/53 Тираж 553 Подписное

UHHHHH Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Про"ктная, 4