Способ диагностики активногодеструктивного процесса b тканяхмочевыводящих путей

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТВЛЬСТВУ

Союз Советскмх

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к оВТ. свид-ву -— (22) Заявлено 06.04.79 (21) 2749151/28-13 (5f)M. КЛ. с присоединением ввяЬкм М (23) Приоритет

G 01 М 33/48

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 3001)31 бюллетень, Нв 4 (53) УДК 616-06 (088.8) Дата опубликованияопмсания 30 ° 01

Ю. Е. Вельтищев, Э. А. Юрьева, М.-Я. A. Мусаев, О. Г. Архипова, И. С. Игнатова, lO. И. Хургин, И. А. Бульман, Г. ф. ШЕманова, И. В. Казанская и С. С. Чекветадзе

Московский научно-исследова ельский институт ( педиатрии и детской хирургии (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОГО ДЕСТРУКТИВНОГО

ПРОЦЕССА В ТКАНЯХ МОЧЕВЫВОДЯЩИХ ПУТЕЙ

Изобретение относится к медицине, а именно клинической биохимии заболеваний, протекающих с нарушением белково-липидного обмена веществ в органиэме человека.

Известен способ диагностики активного деструктивного процесса в тканях мочевыводящих путей путем исследования крови и мочи (1 .

19

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности .

Цель изобретения — повышение точности способа.

Указанная цель достигается тем, что определяют активность эндогенных фосфолипаэ A и С и при наличии их диагностируют деструктивный процесс .

Способ осуществляют следующим об-. разом . . Для исследования берут 0,5 мл сы- ® воротки крови или 5 мл мочи из суточ- . ной порции, заливают 96е-ным этанолом (1:3) на холоду и после встряхйвания центрифугируют 5 мин при

2000 об/мин, затем сливают надосадочную жидкость, растворяют осадок в (),5 мл дистиллированной воды или

0,13%-ного раствора альбумина на физрастворе. Полученную смесь вносят в лунки (5 мм в диаметре) на яично-агароэ Ной плести нке, которую подготавливают заранее . Для этого

0,24 г агарозы растворяют в ацетатном буфере с рН 5,0 (для определения активности фосфолипаэы Л) или боратном буфере с рН 7,3 (для определения фосфолипаэы C) в горячей водяной бане, охлаждают до 50 С и о добавляют 0,25 мл ЗОВ-ного раствора яичного желтка на Физрастворе (желток одного яйца смешивают с двумя частями физраствора, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин, и для анализа используют надосадочную жидкость) . Приготовленную яично-агароэную смесь выливают в чашки

Петри по 12,5 мл и оставляют на

15-20 мии для застывания на горизонтальной плоскости, после чего на полученной пластинке делают лунки при помонвт пастеровской пипетки на расстоянии 2 см друг от друга. В лунки вносят полученную смесь из белка-фереита, н реакцию проводят в термостате при 50 С в течение 20 ч .

Результаты оценивают в миллиметрах по величине диаметра кольца, образующегося вокруг лунки . Для фосфолипазы A характерно просветление вокруг лунки, а для фосфолипаэы С—

800878 помутнение кольца из-эа свойств продуктов, образующихся при распаде фосфолипидов, разных для каждой из фосфолипаэ . Для активации фосфолипазы С используется 0,1 мМ раствор хлористого кальция и гепарин (конечная концентрация - 1%), причем последний подавляет активность фосфолипазы А, что удобно при исследовании раздельной активности фосфолипаэ из их смеси. Кроме того, для определения активности фосфолипаз можно использовать модифицированный метод

Гроссмана, а также реакцию о лицетовитилином.

Модифицированный метод Гроссмана используют для количественного опре- 3Я деления фосфолипаэы С . Метод заключается в следующем . При помощи колоночной хроматографии иэ яичного желтка получают субстрат (фосфатидилэтаноламин или фосфатидилколин), ;щ растворяют его в боратном буфере с

РН 7,3 с добавлением детергентатритона X-100, ионов Са и гепарина. По+г лученную субстратную смесь разливают по пробиркам, пробирки ставят в аппарат Варбурга для постоянного встряО хивания при температуре 50 С, затем в каждую пробирку добавляют по 0,2 мл полученной заранее смеси белка-фермента . Реакцию проводят в течение

10 мин,затем останавливают добавлением смеси хлороформа с метанолом (2:1) по 15-20 мл в каждую пробирку.

Отстаивают в течение 3 ч в холодильнике . Водную фазу исследуют на присутствие этаноламина и фосфоэтанол- 3S амина с помощью высоковольтного электрофореза. Хлороформенную фракцию исследуют с помощью фотоколориметрии на убывание субстрата и с помощью тонкослойной хроматографии с после- 4g дующей денситометрией на прирост диглицеридов . Количество фосфолипаэы С выражается по убыли субстрата в мкМ на суточное количество мочи и на стандартную поверхность тела. В норме при использовании обоих методов активность фосфолипазы С в крови отсутствует и имеется незначительная активность фосфолипаэы А, в моче здоровых детей фосфолипаза С также не определяется, но в незначительных случаях (особенно в неблагоприятный сезонный период) имеет место незначительная активность фосфолипазы А.

Пример 1. Больная Б.,6 лет.

Получила ожог мочевого пузыря соля- 55 ной кислотой 2 г. назад, в результате у ребенка развился интерстициальный нефрит . На фоне непрерывного лечения состояние ребенка в настоящее

ВНИИПИ Йакаэ 10410/59 филиал ППП "Патент", r. время удовлетворительно, несмотря на имеющиеся нефростомы в почках с обеих сторон . Bce биохимические показатели крови (протеиыограмма, остаточный азот, липидограмма, ДФА) постоянно нормальны, СГБ не обнаруживается. В моче остается умеренная лейкоцитурия. Неясен вопрос о тера евтической тактике, так как неизвестно, ицет ли в почках активный патологический процесс (интерстициальный нефрит) или имеет место ремиссия. При анализе крови активность фосфолипазы A оказалась минимальной

0,03 мкМ/0,1 мм сыворотки,а в моче активность фосфолипазы С составляла 223,33 мкМ за 24 ч. Таким образом, полученные данные о фосфолипазной активности явились основанием для продолжения активной антивоспалительной терапии, Пример 2. Больной M.,11 лет.

Обследовался в больнице по поводу рецидивирующего камнеобразования на фоне аномалии развития мочевыводящих путей. Биохимический анализ крови без отклонения от нормы. Решался вопрос об оперативном удалении камня из левой почки . При обследовании крови на активность фосфолипаз опреде— лена незначительная активность фосфолипазы С (0,02 мкМ/0,1 мл сыворотки), в моче обнаружена значительная активность фасфолипазы С 148 мкМ/сут). Операция была отложена.

При вторичном обследовании активность фосфолипаз в крови и моче не выявлялась . Проведенная нефролитотомия прошла успешно без рецидива камнеобразования .

Предлагаемый способ позволяет точно диагностировать активность деструктивного воспалительного процесса в тканях мочевыводящих путей, выявить эффективность проводимой терапии .

Формула изобретения

Способ диагностики активного деструктивного процесса в тканях мочевыводящих путей путем исследования крови и мочи, отличающийся тем, что, с целью повыше ния точ ности способа, определяют активность эндогенных фосфолипаз A и С и при наличий их диагностируют деструктивный процесс.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1 . Тодоров и . Клинические лабораторные методы исследования в педиатрии. София, 1963.

Тираж 918 Подписное

Ужгород, ул, Проектная, 4