Способ получения коньюгата эритроцитов с белком

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (») 787996 (б1) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 120279 (21) 2723507/28-13 (51}М. Кл. с присоединением заявки ¹â€”

G N 33/48

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытой (23) Приоритет

Опубликовано 15.1280, Бюллетень Ио 46

Дата опубликования описания 15,12,80 (5Ç) УДК 611-018. . 51 (088. 8) (72} Авторы изобретения

А.С.Саенко, Т.П.Ильина и В.К.Подгородниченко (7 ) } Заявитель наУчно-исследовательский инститУт медицинской Р;диологии

АМН СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЬЮГАТА ЭРИТРОЦИТОВ С БЕЛКОМ

Изобретение относится к медицине, более конкретно к иммунологии и мог жет быть использовано при диагностике заболеваний в реакциях гемагглютинации.

Известен способ получения конъюгата эритроцитов с белком,1).

Однако полученный по этому способу конъюгат стабилен лишь в течение нескольких недель.

Целью изобретения является повышение устойчивости конъюгата.

Поставленная цель достигается тем, что эритроциты диализуют в течение 4 сут против нейтрального 15 формалина, после чего к диализату добавляют раствор периодата натрия до конечной концентрации 0,04-0,05 М, инкубируют смесь в течение 20-30 мин, периодат натрия нейтрализуют, добав- 20 ляют сывороточный альбумин до конечной концентрации 1,3-1,7 мг/мл, устанавливают рН среды 9,0-9,5, инкубируют 30-60 мин и вносят затем боргидрид натрия до концентрации 0,18-0,22M, 5 после чего реакционную смесь вновь инкубируют в течение 18-24 ч при 0-4оС, доводят рН среды до 5,55,7 и отмывают полученный целевой продукт.

Пример. 3 мл 50 Ъ-ной суспензии бычьих формалинизированных эритроцитов дважды отмывают водой от формальдегида и суспендируют в 5 мл воды, добавляют 5 мл 0,1 М раствора периодата натрия и оставляют на 2030 мин. Для разрушения избытка периодата к суспензии добавляют О, 3 ил

1 М этиленгликоля и оставляют ее при комнатной температуре на 5-7 мин.

Реакционную смесь при перемешивании вносят в 5 мл водного раствора бычьего сывороточного альбумина, содержащего 20-25 мг белка в указанном объеме. Добавлением 5 Ъ-ного карбоната калия устанавливают рН раствора белка равным 9-9,5 и поддерживают его на этом уровне после добавления реакционной смеси s течение 40-45 мин при комнатной температуре. Затем к смеси добавляют 150мг боргидрида натрия в 5 мл воды. Смесь оставляют на 18-20 ч при ОоС. После этого с помощвю 1 М раствора мурав — иной кислоты доводят рН смеси до

5,5 и через 1 ч — до 8,5 1М водным раствором аммиака. После этих процедур эритроциты отмывают стандартносолевым раствором (содержащим 0,15 М хлористого натрия и 0,015 М цитрата

787996

Составитель Л.Морозова. Редактор Т. Веселова Техред Н. Ковалева Корректор О. Билак

Заказ 8343/51 Тираж 1019 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП"Патент",г.Ужгород,ул.Проектная,4 натрия ) и суспендируют в 50 мп стандартно«солевого раствора, содержащего 0,2 йп нормальной кроличьей сыворотки и 0,5 мл формалина. Отработанные таким образом эритроциты используют в реакции пассивной гемагглютинации.

Для ингибирования титруют исследуемую сыворотку как обычно,.затем к каждому разведению добавляют по

10 мг ингибитора на 30-40 мин перед смещением с сенсибилизированными эрит-. роцитами.

Точность измерения концентрации определяется возможностями лабораторного оборудования. $

Эритроциты, сенсибилизированные белковым антигеном, в реакции пассив-, ной гемагглютинации специфично воздействуют с антисывороткой к этому антигену.

Конъюгаты, полученные по предлагаемому способу, остаются стабильными в течение 3-4 мес.,что снижает стоимость диагностических методов исследо-у5 ваний с их использованием.

Формула изобретения

Способ получения конъюгата эритроцитов с белком, о т л и ч а ю щ и йс. я тем, что, с целью повышения устойчивости конъюгата,эритроциты диалн-. зуют в течение 4 сут против нейтрального формалина, после чего к диализату добавляют раствор периодата натрия до конечной концентрации 0,04-0,05 М, инкубируют смесь в течение 20-30 мин., периодат натрия нейтрализуют, добавляют сывороточный альбумин до конечной концентрации 1,3-1,7 мг/мя, устанавливают рН среды 9,0-9,5, инкубируют

30-60 мин и вносят затем боргидрид натрия до концентрации 0,18-0,22 М, после чего реакционную смесь вновь инкубируют в течение 18-24 ч при

0-4 С., доводят рН среды до 5,5-5,7 и отмывают полученный целевой продукт.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Onkelinkx E Meuldermans W., Gonian М- and Lontie R. Jiutardehide

as à coupling reagent in passive

hemagglutination - " 1пппипо1ogy", 16, 35, 1969.