Способ исследования параметров роста колонии микроорганизмов

 

«5 с %ем «ь, патеч.но

ОПИСЛй-ИСоюз Советскик

Социалистических

Ресттублик

<>787993

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к ввт, свид-ву— (22) Заявлено 280678 (21) 2640281/28-13 (51) М. Кл.

G 01 Н 33/48

С 12 К 1/00 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

I îñóäàðñòâåííûé комитет

СССР во делам изобретениИ и открытий

Опубликовано 151280, Бюллетень И9 46

Дата опубликования описания 151280 (53) УДК 5 76 . 8 . 09 3 (088. 8 ) (72) Авторы изобретения

Г.Г.Жарикова, Г.В.Сумаруков и P.Р Асланян.

Московский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революции и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М.B. Ломоносова (71) Заявитель

-4(,54)СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИИ ПАРАМЕТРОВ РОСТА КОЛОНИЙ

МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к микробиологии.

Известен способ исследования параметров роста колоний микроорганизмов в установке, содержащей фоторе- $ гистратор, сопряженную с ним оптичес- кую систему, включающую объектив и фотоумнОжитель, предметный столик для размещения на нем колоний микроорганизмов, предусматривающий осве- 10 щение колоний световым потоком в видимом диапазоне длин волн.

При осуществлении известного способа исследуется изображение микроорганизмов на фотопленке с помощью денситомерта с короткофокусным объективом без щелевой- диафрагмы, регистрирующего оптическую плотность фотографического иэображения колоний. З), Колонии микроорганизмов являются гетерогенными системами.:Гетерогенность проявляется в неровностях края колец, неодинаковой ширины колец и разной высоте их в одной и той же 25 колонии (в разных ее участках) (1).

Однако в связи с этим неизбежны значительные ошибки в процессе измерения величин оптической плотности, кроме того, введение денситометрии, 3g.,как промежуточного процесса, снижает кочность измерения.

Цель изобретения — повышение точности.

Поставленная цель достигается тем, что в способе исследования параметры роста определяют по коэффициенту отражения светового потока от коло.нии, при этом в оптическую схему вводят диафрагму с отверстием в виде изогнутой щели, помещенную между г объективом и фотоумножителем оптической системы, а колонию равномерно перемещают в плоскости, перпендикулярной оси оптической системы.

На чертеже изображена оптическая схема установки для осуществления способа исследования параметров роста колоний микроорганизмов.

Способ осуществляется следующим образом.

Перед началом фотометрирования подбирается оптимальная скорость движения предметного столика 1 с исследуемым объектом, интенсивность ссвещения объекта, ширина и длина щелк диафрагмы, что позволяет получить максимальную разрвшающую способность устройства. После этого на предметный столик 1 гомещают чашку 2 Петри сисследуемой колонией актиномицета, включают осветитель 3 и приводят в движение с помощью привода 4 . столик

1 микроскопа. Отраженный от колонии свет, проходя через объектив 5, диафрагму 6, призму 7, попадает на фотоумножитель 8 и фоторегистратор 9.

На диаграмме фоторегистратора 9 отображается характер роста колоний микроорганизмов, например зоноооразующего актиномицета, где каждый пик соответствует отдельному кольцу коло- о нии.

Обрабатывая полученную диаграмму, можно определитьф"акие параметры колонии зонообразующих микроорганизмов, как диаметр колонии, диаметр и пло- >5 щадь ее центра, ширину и площадь спо« роносных колец, а также расстояние между их вершинами.

Перечисленные параметры колонии выявляются на диаграмме регистрато- щ ра и измеряются циркулем-измерителем и линейкой (при линейных измерениях) или планиметром (при измерении площадей). Для перевода в реальные раз.меры колонии измеренные на ленте линейные параметры (при объективе 8") умножаются на коэффициент пересчета, -равный 0,0247, где К в Н„/И,где М расстояние между двумя точками на объекте, а И - между двумя соответствующими точками на ленте самописца. З )

Диаметр колонии определяют измере нием расстояния между двумя противоположными точками иа внешних краях наружного кольца.

Диаметр центра колонии определяют «У измерением расстояния между двумя ,противоположными точками на первых от центра глубоких минимумах диаграммы.

Ширину спороносных кскец определяют измерением расстояния между р точкой начала подъема кривой и соответствующей точкой после прохождения кривой через максимум.

Расстояние между вершинами колец определяют измерением расстоянии между точками максимумов двух соседних колец.

Площадь центра колонии определяют измерением плащади, ограниченной сверху крйвой диаграюаы, а снизу нулевой линией, соответствующей величине сиг- в нала от участка культуральной среды без колонии и ограниченной с боков перпендикулярами, восстановленными с нулевой линии к точкам„используемым при определении диаметра центра колонии.

Площадь спороносных колец определяют измерением площади под кривой диаграмм, ограниченной снизу нулевой линней, соответотвующей величине сигнала от участка культуральной среды беэ колонии, а с боков ограниченной перпендикулярами, восстановленными с нулевой линии к точкам, используемым . при определении ширины колец.

Таким образом, способ обеспечивает прямые измерения колоний микроорганизмов по интенсивности отраженного, света с повышенной точностью, благодаря введению в оптическую систему диафрагмы, обеспечивающей получение интегрированной информации с большей площади кольца колоний и длиннофокусного объектива, обеспечивающего достаточную глубину резкости при равномерном перемещении колоний в радиальном направлении в плоскости, перпендикулярной оси оптической системы.

Формула изобретения

Гпособ исследования параметров роста колоний микроорганизмов в установке, содержащей фоторегистратор, сопряженную r. ним оптическую систему, включающую объектив и фотоумножитель, предметный столик для размещения на нем колоний микроорганизмов, предусматривающий освещение колоний световым потоком в видимом диапазоне длин волн, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности, параметры роста определяют по коэффициенту отражения светового потока от колонии, при этом ь- оптическую схему вводят диафрагму с отверстием в виде изогнутой щелй, помещенную между объективом и фотоумножителем оптической системы, а колонию равномерно перемещают в плоскости, перпендикулярной оси оптической системы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Панаян Г.В. Разработка аппаратуры и методов микроспектрофотометрии в гроходящем н отраженном свете. йвтореф. на сснск. учен. степени канд. техн. наук. Л., 1974.

787993

6 г г

Г

Составитель Л.Соловьев

Редактор N.Дылын Техред H.ковалева Корректор О. Билак.

Заказ 8343/51 Тираж 1019 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП"Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4