Способ диагностики адаптационныхреакций организма

 

Союз Советскик

Соцналистическнк

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВ ЕТИЛЬСТВУ (61) Дополиительиое к авт. свид-ву (22) Заявлено 21.03.79 (2f) 2764408/28-13 (53)М. Кл. с присоединением заявки М

0 01 К 33/48

Государственный комитет

СССР яо делам изобретеиий н открытий (23) Приоритет

Опубликовано 30,0181. бюллетень Мо 4 (53) УДК 616-06 (088.8) Дата опубликования описания 30. 01. 81 (72) Автор изобретения

„/

А. С. Яновская (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ А,ЦАПТАЦИОННЫХ РЕАКЦИЙ

ОРГАНИЗМА йо. й

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки степени воздействия на организм факторов внешней среды, подбора доз лекарственных препаратов, определения степени тяжести заболеваний.

Известен способ диагностики адаптационных реакций организма по соотношению форменных элементов периферической крови и общему количеству лейкоцитов (1).

Однако при известном способе отсутствуют критерии оценки реакций при переходных состояниях между физиологическими и патологическими реакциями.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Эта цель достигаетая тем, что определяют активность дегидрогеназ, сукцината, лактата, малата аС-глицерофосфата и кислой фосфатазы и по ее величине диагностируют адаптационную реакцию opraíèçìà .

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Берут мазки крови из пальца, высушивают, фиксируют 30 с в насыщенном водном растворе трилона Б в 60%-ном ацетоне, промывают и вновь высуши вают при комнатной температуре . Затем осуществляют окраску в соответствующей инкубационной среде: для дегидрогеназ — по Р.П. Нарцнссову кислую фосфатазу — по Гольдбергер и Барка, РНК вЂ” по Курнику. Ядра клеток для удобства их идентификации докрашивают 1-4%-ным метиловьм зеленым на ацетатном буфере (рН 5,0).

Микроскопирование производят под водной иммерсией, окуляр 15, объекХ тив 40. Активность для дегидрогеназ определяют по количеству гранул формазана (продукта реакции в 50 лимфоцитах с последукщим вычислением средней величины на 1 лимфоцит), активность КФ и содержание РНК вЂ” по величине гистохимического показателя(ГХП) определяемого обычным путем по интен2О сивности окраски где в числителе - число клеток на три креста (вся цитоплазма занята продук.том реакции) умноженное на три, плюс

) число клеток на два креста (более половины протоплазмы занята продуктом реакции), умноженное на два, и плюс

800879 число клеток на один крест (менее половины цитоплазмы занято продуктом реакции), а в знаменателе — число подсчитанных клеток.

Полученные величины активности ферментов до и после воздействия или при хроническом воздействии сопоставляют с фигурдй изменений ферментативной ак- тивности лимфоцитов на стадиях тренировки, активации, тревоги, резистентности и истощения, которые разделены на 2-3 фазы. Попадание в ту или иную © стадию и их фазы определяется величиной сдвигов активности ферментов, их соотношением между собой и наличием или отсутствием морфологических изменений форменных элементов крови. 1$

На чертеже по оси абсцисс показаны величины прироста или снижения активности Ферментов по сравнению с исходными или нормативными величинами для соответствующего возраста для каждой щ стадии адаптационных реакций и их фаз . По оси ординат — длительность или напряженность воздействия .

Так, в 1-й фазе стадии "тренировки" наблюдают низкие или умеренные сдвиги ферментативной активности лимфоцитов и снижение содержания РНК за счет поступления в русло крови из депо 1-го порядка (селезенка, легкие, кожа, капилляры и др.) дозревших клеток, обедненных РНК. Во 2-й фазе этой ЗО стадии наблюдают преобладание дегидрогеназ сукцината (СДГ) над всеми ферментами . Морфологических изменений клеток крови в этой стадии не обнаружено. 35

В стадии "активации" величины СДГ преобладают над остальными ферментами, активность дегидрогеназ лактата (ЛДГ) ниже исходного уровня или без изменений . 40

В 1-й фазе донозологической стадии преобладает активность дегидрогеназ

M.-глицерофосфата (ГФДГ), во 2-й появляется повторное повышение активности СДГ, связанное с обращением цикла Кребса против химического градиента, при продолжающемся повышении активности о«,-ГФДГ, в 3-й — преобладает активность ЛДГ на фоне высокой активности КФ и умеренной дегидрогеназ малата МЛГ . В этой фезе наблюдается повышение числа разрушающихся клеток свыше 10%, допускаемое при выполнении больших нагрузок.

В 1-й фа з е стадии "тревоги" наблю53 дается снижение активности дегидрогеназ и повышение КФ. Число морфологически поврежденных клеток 10-20% ° Во

2-й фазе активность окислительно-восстановительных ферментов в большинст- 66 ве клеток снижена, активность КФ повышена. Число морфологически измененных клеток — 20-30% и более.

В стадии резистентности, B состоянии покоя — умеренное повышение ак- Я тивности дегидрогеназ и КФ при сниженных величинах активности ЛДГ.

Ранним признаком перехода от стадии резистентносхи к истощению является снижение активности О(, - ГФДГ г и реже «х.-ГФДГ, что предшествует морфологическим изменениям клеток.

Стадия "истощения" по сдвигам напоминает стадию "тревоги", но она протекает при больших морфологических нарушениях не только в клетках крови, но и в других органах .

У больных и неадаптированных людей сдвиги ферментов клеток крови меньше, чем у здоровых и особенно адаптированныХ, в связи с чем на чертеже имеется две шкалы оси абсцисс. Исследования показали, что даже небольшие, но длительные воздействия различной природы приводят к постепенному продвиганию адаптационных реакций вправо.

В то же время интенсивные, но непродолжительные воздействия могут привести к попаданию в 3, 4 или б стадию.

Пример 1. Больная P„23 лет.

Диагноз — односторонняя мелкоочаговая пневмония . Больна 3-й день. Температура 38 С . Берут анализ крови: эритроциты — 400000, Нв — 14,б мгФ, лейкоциты — 9000, РОЭ вЂ” 20 мм/час, Э вЂ” 1Ъ, П вЂ” 2Ъ, С вЂ” 47%, М вЂ” 6%, Л

44%, что соответствует зоне повышенной активности . Активность лимфоцитов крови: СДГ -22,0, < — ГФДГ 20,0, СС -ГФДГг — 20,б, МДà — 13, 2, кислая фосфотаза, КФ вЂ” 1,98, ЛДГ

10,2. Величины и соотношения фермен,тов соответствуют 2-й фазе стадии ,"активации".

Через 5 дней пневмония стала двух.сторонней, очаги - более крупными .

У больной губы синюшны, крылья носа при дыхании раздуваются, дыхание учащенное. Анализ кровиt количество эритроцитов - 450000, лейкоцитов — 12000, РОЭ вЂ” 30 мм/час, Э - 1%, П вЂ” ЗВ, С

55Â, М " 8Ъ, Л - 33%, что соответствует зоне повышенной активности.

В лимфоцитах крови активность СДГ— б,0, «4 -ГФДГ„„ - 12,92, M -ГФДГ,-- 22, 5, МДà — б,0, КФ - 2,3, ЛДГ - 20,8, что соответствует 3-9 фазе донозологической стадии. !

Таким обраацм, ухудшение состояния больной привело. к появлению 3-й фазы дазонологйчеекой стадии по фермеъ тативной активясирти пимфоцитов, тогда как по изменению форменных элементов крови количественные показатели лейкоформулы все же укладываются и пределы реакции повышенной активности, хотя увеличение числа моноцитов для каждой стадии свидетельствует о достижении ее верхней граниЦЫ °

П р и. м е р 2."Больная М.,22 лет.

Диагноз " болезнь Боткина. Больна

5-й день. Кожные покровы желтушны, 8О0879 состояние средней тяжести . Берут маз- 6,48, 1,61 и 1,02 а через час отдыки крови и красят на выявление фер- ха — 5,83, 4,99, 5,92, 6,05, 6,06, ментов. Активность ферментов лимфоци- 1,55 и 0,81. Таким образом, после тов крови следующая: СДà — 5,0р МДГ - нагрузки спектр изменений ферментов

4,2; (X -ГФДГм — 4,26; c(.-ГФДГà — 3,8; соответствует 2-й фазе доноэологиЛДà — 8,4; КФ вЂ” 2, 3 . Количество кле- ческой стадии, что является харак-! ток Боткина-Гумпрехта достигает 25% . терным для нагрузок алактатного типа.

При сопоставлении с нормативными ве- .Через час обнаруживают выраженную личинами для возраста больной (см . . тенденцию к восстановлению чертеж), можно прийти к выводу, что Итак, кратковременная, но интенадаптационные реакции организма боль- сивная н=с руэка приводит, как и у ной соответствуют 2-й фазе стадии 1О всех других спортсменов выполнявших и и

Тревоги . Через месяц активность фер- бег на 100 и, к сдвигам, характерным ментов соответственно равна 8, б, 6,2; для донозологической стадии. Однако

7,8, 10,12, 10,2 и 1,8 что соответ- быстрое восстановление параметров ствует 2-й фазе донозологнческой ста- служит указанием адекватности реакции дии. Таким образом, улучшение само- t3 организма, чувствия больной привело к перемеще- Пример 5. Спортсмен Ж-ский нию ферментных реакций лимфоцитов по мастер спорта международного класса

В предлагаемому чертежу влево. Однако неоднократный чемпион и призер междуможно сделать вывод, что восстанов- народных соревнований . Берут мазки ление организма на клеточном уровне () крови до и после тренировки длинными еще не закончено. отрезками (нагрузка смешанного харакII р и м е р 3 . Спортсмен К.,I разря- тера) . В состоянии покоя особых отда . Выступал на соревнованиях по клонений от нормы не обнаружено. Посспортивной ходьбе на 10 км . Эта наг- ле тренировки наблюдается снижение руэка является типичной аэробной . В активности СДГ (35%), ЛДГ (33%), состоянии покоя и после соревнований М- -ГФДГ -(23%) и возрастание о -regr

М берут мазки крови, окрашивают на вы- (18 %) . Снижение активности большинстявление активности СДГ, оС-ГФДГ и

Ы ва энзимов и сохранение активности ос -ГФДГр, ЛДГ. Активность ферментов М.-ГФДГ„указывает на переходное соссоответственно составляет 4,40, 4,95„ тояние между 3-й фазой третьей стадии

7,55, 2, 70 до нагрузки, а после наг- З и 1-й фазой четвертой стадии . руэки — 7,49, 6,91, 9, 08 и 1,78. На следующее утро реакция суперкомВозрастание активности СДГ,O(-ГФДГ пенсации,%:СДà — 45, ЛДà — 33, оС-ГФДГмоС -ГФДГ и снижение ЛДГ отражает со- 133, а М.-ГФДà — б, что ниже исходответствие нагрузки функциональному ного уровня. На этом фоне кросс 14 км состоянию спортсмена . Время прохож- И эа 55 мин приводит к повышению как дения дистанции спортсменом ограни-; СДГ, о(-ГФДГМ и с(-ГФДГ, так и ЛДГ, чивалось П и I спортивным разрядом.. что характерйо для 2-й фазы третьей

В последующем спортсмен болел, стадии и что свойственно для обычного тренировался мало и через 2 месяца кросса . На следующее утро недовосстана соревнованиях пришел последним, с щ новление активности всех знзимов большим усилием эакончил дистанцию. 5-18% .

До соревнований СДà — 5,01, оС. -ГФДГм- На третий день спортсмен бежал тем5,08, оС -ГФДГ< — 6,86, ЛДà — 7,08> а повой кросс (10 км за 34 мин 25 с), после соревнований — соответственио после которого активность сС -ГфдГ

4,, б,21, 6,88 и 8, 75.

95 повысилась на 328 б, активность СдГ ь — М

Как показали наблюдения, снижение снизилась на 31, ЛДà — на 24% . Активактивности ЛдГ и возрастание ЛдГ на . ность О(. -ГФдГ повысилась но не и и

Г такую аэробную нагрузку, как спор- тигла исходного уровня. Общее колитивная ходьба, является нехарактер- чество лейкоцитов повысилось всего на ным. изменение спектра ферментов у 18,5%, тогда как в предыдущие дни это о спортсмена соответствует 3-й оно составляло 40 и 30%. Количество г

Зб фазе доэ онологической стадии, т . е . раэрушаккцихся клеток достигло 18-20% . может служить указанием несоответ- Последующие два дня не привели к восствия нагрузки функциональным воз- становлению показателей, а выполняеможностям спортсмена, т.е. перегрузке. мая средняя нагрузка на пятый и шесПример 4. Спортсмен С. Т раэ«_#_ той день воспринималась как большая ряда, бегун на средние дистанцйи. На и очень большая, то сопровождалось тренировке выполнял прикидку — бег иа снижением амплитуды прироста актив100 м, которые пробежал на 12 с. Эта ности энзимов или их снижением увеI нагрузка является аэробной алактатной. личением Числа разрушенных клеток в

В состоянии покоя активность СДà — д периферической Крови до 20% и более.

5,38, ЛДà — 4,37, o(.,-ГФДГи — 5,42,, Таким образом, кумулятивный эффект

М-ГФдГ„ — 5,98, МДà — 5,96, ГХП КФ -,утомления вначале приводил к потере

1,66 и PHK — 0,92. После бега на спЕцифичности ответной реакции на

100 м активность ферментов соответ- нагрузки определенн:го характера, воэственно равна 6,98, 6,79, 8,55, 6,98,. растанию прироста аь"ивности фермен800879

Формула изобретения

% ТронироЭки " уйс 7 лонозоло

20 ь

Е ч оик юг мг г4одгн - гюдг

Составитель С . Малютина

Редактор Н . Вушаева Техред. С.Мигунова Корректор H ° Муски.

Заказ 0 0 59 Тираж 9 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб ., д . 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул . Проектная, 4 тов на последующую нагрузку, недовосстановлению организма через 24-48ч (компенсированное утомление), à B последующем — снижение прироста активности ферментов (1-я фаза четвертой стадии) или снижение их активности ниже исходного уровня, нарастание числа поврежденных клеток крови до 203 и более (декомпенсированное утомление, 2 фаза четвертой стадии).

Через 1-2 дня у спортсменов с подобным типом реакции (1-2 фаза четвертой стадии) проявлялись признаки заболевания„ чаще ангины, острые респираторные заболевания и др.

Предлагаемый способ обеспечивает высокую точность и позволяет установить степень тяжести заболеваний, проводить подбор -доз фармакологических препаратов, судить об эффектив-. ности лечения и степени выздоровления, определять степень воздействия физических и химических факторов на производствах. Это позволит своевременно решать вопросы защитных, профилактических или лечебных мероприятий . Кроме того, способ может быть применен для регуляции тренировочного режима спортсменов, летчиков, космонавтов и др .

Способ диагностики адаптационных реакций организма, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа,,определяют активность дегидрогеназ, сукцината, лактата, малата, сс-глицерофосфата и кислой фосфатазы и по ее величине диагностируют адапта1Ъ ционную реакцию организма.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Гаркави Л. Х., Квакина Е. Б., Уколова М. А. Роль адаптационных

Я реакций в патологических процессах

/ и простые критерии этих реакций у людей .-Сб. "Регуляция энергетического обмена и устойчивость организма".

Пущино, 1975, c . 172-182 .