Способ получения биомассы ,обогащеннойфаговой днк

 

Colo 3 Советских

Социалистических республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (iii 834123 (61). Дополнительное к авт. саид-ву— (51)М. Кл.

С 12 и 1/00//

С 12 N 1/00

С 12 R 1/19 (22) Заявлено 19. 10. 79 (21) 2829413/28-13 с присоединениеае заявки %в (23) Приоритет—

Гввудврстввнньй квинтет

СССР ва делам нзвбрвтвакк н вткритвй

Опубликовано30. 05. 81. Бюллетень Ле 20

Дата опубликования описания 30 05 ° 8 1 (53) УДК 576.8. .093.1(088.8) И. А. Шмите, С.Э. Ансберга, M.ß. Хейсле и M. P. Витенберга (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ESCHERICHIA COLI M-65 (3 с 1857 S>), ОБОГАЩЕННОЙ ФАГОВОЙ ДНК

Изобретение относится к микробиологической промьппленности и касается получения биомассы, обогащенной;биологически активными веществами.

Известен способ получения биомассы Escherichia coli М-65 (Л с 1857 S7) обогащенной фаговой ДИК путем выращи. вания на питательной среде с последующей индукцией фага и внутриклеточным накоплением (1 g.

Однако известный способ не обес.то цечивает высокого выхода биомассы (3,4-4,1 мг/мл) и количества .внутри+ ал клеточного фаза (0,9 ° 10 -1,5 18 БОЕ/мг).

Цель изобретения — повышение выко"

1$ да биомассы и количества внутриклеточного фага.

Указанная цель достигается тем, что в. способе получения биомассы Езсттег iс11!а соli И-65 (л.с 1857 57), обогащенной фаговой ДНК, путем выращивания на питательной среде с последующей индукцией фага и внутриклеточным накоплением, выращивание культуры ведут

2 на среде, содержащей, вес.Х: аминопептид 20-30; хлористый аммоний 0,10,2; глюкозу 0 5-1,0; натрий фосфорнокислый двухзамещенный 1-1,5; калий фосфорнокислый однозамещенный

0,2-0,3 и воду остальное,)индукцию фага проводят прй 44-45ОС в течение 23 мин, а накопление фага проводят в присутствии 0 05-0,1Х лецитина и 0 5IХ глюкозы.

Способ осуществляется следующим образом.

Для получения микробиальной биомассы из Еscherlñhiа Со! i путем использования Escher ichla сот i M-65 (Х с 1857 S ) культуру выращивают на синтетической питательной среде следующего состава, .вес.Х:

Аминопептид., 25-30

Глюкоза g 0 5-1.. йа2НРО, КН 2 04

NH4Cl 0,1-0,2 рН 7,4-7,6.

834123 на 1 л питательной среды. Продолжительность выращивания 3-4 ч.

Выход биомассы, мг/мл 4,0

Количество внут5 .риклеточного фага, БОЕ/мг биомассы, 4,4 10

4!

Пример 2. Питательная среда содержит, вес. .: аминопептид 30, глюкозу 1,О, йа HPO 1,0, КН РО, 0,2;

NH@Cl 0,2.

Остальные операции аналогичны примеру 1. После нагревания культу.о ральной жидкости до 44-45 С глюкозу добавляют в количестве 1,0Х а лецитин 0,05Х. Далее по примеру 1.

Выход биомассы мг/мл 5,2

Количество внутриклеточного вегетативного фага, БОЕ/мг биомассы 2,8 !О ф!

Предлагаемый способ обеспечивает

25 получение фаговой ДНК для нужд молекулярной биологии и исследований s генной инженерии с высоким выходом биомассы и целенаправленным накоплением в ней интактной ДНК фага лямбда.

Глюкозу вводят в питательную среду в виде стерильного раствора.

Проводят термообработку биомассы при 44-45 С в течение 2-3 мин с последующим выращиванием на среде, содер жащей дополнительно 0,05-0,1 лецитина и 0,5-1,0 глюкозы.

Выход биомассы мг/мл 4,0-5,2

Количество внутриклеточного вегетационного фага, БОЕ/мг биомассы 2,8 10 -4,4 ° 10 или количество внутриклеточных молекул

ДНК фага, мол/мг биомассы 2,8 10 -4,4 ° 10

И Н

Hp и м е р 1. Питательная среда содержит, вес. : аминопептид 25; глюкоза 0,5; Na

ИН4Cl .0,1, рН 7,4-7,6.

Глюкозу вводят в питательную сред в виде стерильного раствора в начале ферментации.

Выращивание микробиальной биомассы из Escher ichia col i М-65 (1с 1857

s„), Инокуляция посевного материала.

Культуру g sc her i c hi a co! i М-65 зо (. с 1857 S ) поддерживают на столбиках ИПА под вазелиновым маслом, пересевают 1 раз в 6 мес. Для подновления культуру засевают в мясо-пептонный бульон, инкубируют 10-12 ч при 30 С.

О 35

Инокулят готовят, пересевая 10-!2 ча" совую культуру на 1 л свежей среды из расчета 1:15 и размножают стационарно при 30 2 С.

ФерМентацию культуры Escherichia

col i И-65 (gс 1857 5-!) производят после добавления инокулята 1:20 по отношению к объему среды. Ферментацию проводят при 30 « 2 С в условиях при45 нудительной аэрации (0,5 л воздуха на 1 л питательной среды ).

На ранней логарифмической стадии развития (по калибровочной кривой ) проводят быстрое нагревание культуральной жидкости до 44-45 С в течение 23 мин, после чего быстро охлаждают до

37 1 1 С, добавляют 0,5 глюкозы и

0,1Х лецитина. Если необходимо, проводят подщелачивание культуральной

55 жидкости раствором NaOH. до рН 7,47,6. Устанавливают аэроцию 3 л воздуха

ВНИИПИ Заказ 4128/47

Филиал ППП "Патент", r.

Формула изобретения

Способ получения биомассы Fscherichia col! ц-65 (iL c 1857 5-!), обогащенной фаговой ДНК, путем выращивания на питательной среде с последующей индукцией фага и внутриклеточным накоплением, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения выхода биомассы и количества внутриклеточного фага, выращивание культуры ведут на среде, содержащей, вес. : аминопептид 20-30; хлористый аммоний

0,1-0,2.; глюкозу 0,5-1,0; натрий фосфорнокислый двухзамещенный 1-1,5; калий фосфорнокислый однозамещенный

0,2-0,3 и воду остальное, индукцию фага проводят при 44-45 С в течение

2-3 мин, а накопление фага проводят в присутствии 0 05-0,1 лецитина и

0 5-IX глюкозы.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США !! 38!9482, кл. 195-28, опублик. 1974.

Тираж 528 Подписное

Ужгород, ул. Проектная, 4