Способ хранения культуры тнiовасillus ferrooxidans

 

Союз Советск нх

Соцналнстнческнх

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<»>859439 (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22)Заявлено 18,06,79 (21) 27819 18/28-13 с присоединением заявки Рй(23) П риоритет—

Опубликовано 30.08.81, Бтоллетень ЭВ 32

Дата опубликования описания 30.08. 81 (5! )М. Кл .

С 12 М 1/00

3асударстванны6 коиитет

СССР пю делан изобретений и открытий (53) УДК 576.8, .093,1 (088.8) (72) Авторы изобретения

К.А. Ильина, А.А, Касенова и Л,Ф. Фроло а

Институт микробиологии и вирусологии АН КазалхжойССР (71) Заявитель

154) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КУЛЬТУРЫ ТН I ÎBAC1LLUS

FERR00XiDANS

Изобретение относится к микробиологической промьппленности и касается :. длительного хранения промышленных штаммов микроорганизмов,в частности

Thiobacillus ferrooxidans.

Тионовые бактерии-автотрофные микроорганизмы, способные существовать на минеральной среде за счет энергии, выделяющейся при окислении серы и железа, Thiobacillus ferrooxidans является строгим автотрофом с оптимумом развития рН около 2-2,5. Культура выдерживает высокие концентрации металлов, мьппьяка и серной кислоты, что дает возможность использовать ее для выщелачивания металлов и мышьяка иэ руц и концентратов.

Хранить штамм для промьапленных нужд только методом периодического пересева на жидких питательных средах затруднительно и чревато его потерей, Известный способ хранения тионовых бактерий в лиофильно высушенном состоянии также не пригоден, так как культура не пепеносит органических защитных сред 11.

Наиболее близким к предлагаемому является способ хранения культуры

Thiobaci11us ferrooxidans в жидком азоте. Капли культуры объемом 0,03 мл вносят в стеклянный стакан, содержащий жидкий азот, затем застывшие капли культуры переносят в стеклянные колбочки, которые помещают в сосуд с жидким азотом (температура 12080оC) (2

Однако этот способ трудоемкий, 1$ дорогостоящий и не всегда приемлем для заводских и лабораторных условий.

Цель изобретения - упрощение способа и его удешевление, Поставленная цель достигается тем, что в способе хранения культуры

Thiobaci11us ferrooxidans выращенньй на жидкой питательной среде с последующей ее консервацией, культу- ру помещают в пробирку .или ампулу

859

Формула изобретения со смесью песка и пирита, взятых в .соотношении 1:3, с последующей герметизацией пробирки или ампулы, при этом смесь песка и пирита вносят в количестве 2-3 г на 1-2 мл культуры плотностью 10 клеток/мл,, Сущность способа заключается в следующем.

Тионовые бактерии выращивают на жидкой среде 9К до уровня плотности

Г

10 клеток /мл, затем вносят в стерильные пробирки или ампулы со смесью песка и пирита в соотношении 1:3 в количестве 1-2 мл, песок и пирит предварительно промывают и высушивают. Смесь тщательно перемешивают, рН в культуре 2-2,5 гН 350-370, количество окисленного железа 4. 5-4, 7 г л.

Ампулы запаивают, пробирки парафи1 нируют. В таком виде культуру хранят при комнатнь»х температурах 2,5-3» .

Пример I. Культуру Thiobacillus ferrooxidans выращивают на жидкой среде 91(48 ч, Сост ав среды 9 К.

1-й раствор. в 700 мл дистиллированной воды растворяют сернокислый аммоний (NH4)) ) 0,01 г.

2-й раствор: в 300 мл дистиллиро" ванной воды растворяют 44,2 г Ге50,1х 7Н20 и добавляют 1 мл 10 N серной кислоты.

Растворы стерилизуют отдельно:

1-й раствор при 1 атм и 2-й раствор при 0,5 атм, перед употреблением оба раствора смешивают. Пробирки с культурой тщательно встряхивают, закрывают резиновыми пробками, которые обрезают по краю пробирки, парафинируют или же запаивают в большие ампулы.

После 2 5 лет хранения титр культу9 ры равнялся 10 клеток/мл, рН 1,9

439 4 гН 315, количество окисленного железа 4,3 г/л.

Регенерацию культуры осуществляют следующим образом.

Содержимое пробирки или ампулы переносят в качалочнь»е колбы с пита-. тельной средой 9К. После определенного срока инкубации, который зависит от состояния культуры, ее можно использовать для работы.

Хранение культуры в запарафинированных пробирках и запаянных ампулах в течение 3 лет обеспечивает жизнеспособность клеток Thiobacillus ferгоох1дапз.

Таким образом, предлагаемое техническое решение позволяет упростить и удешевить способ хранения культуры Thiobaciilus Геггоох!4апз.

1. Способ хранения культуры Thiobacillus ferrooxidans, выращенной на жидкой питательной среде с последующей ее консервацией, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения способа и его удешевления, культуру помещают в пробирку или ампулу со смесью песка и пирита, взятых

30 в соотношении 1:3, с последующей герметизацией пробирки или ампулы.

2. Способ по п.l, о т л и ч а юшийся тем, что смесь песка и пирита вносят в количестве 2-3 г на

l-2 мл культуры плотностью 10 клеток,/мл.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Соколов Г.А., Каравайко Г.И.

4о Физиология и геохимическая деятельность тионовых бактерий. М,, "Наука, 19б4.

2. Hanchee R.i. Journal of Opp I i ed bacterio I ogy, чо1ип». 38, Ф 2, 45 р. 191-192, 1975 (прототип) .

Составитель Н. Паников

Редактор К. Лембак Техред Ж.Кастелевич Корректор N. Коста

Заказ 7472743 Тираж 528 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4