Способ получения адипозина

 

<>878296

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 13.03.79 (21) 2761224/28-13 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (51) М. Кл з А 61 К 37/32

Государстооииый комитат

СССР па делам изобрвтвиий и открытьщ (43) ОпУбликовано 07.11.81. Бюллетень ¹ 41 (53) УДК 615.45:615.34 (088.8) (45) Дата опубликования описания 07.11.81 (72} Авторы язобр етенвтя

Ф. Ю. Рышка, Е. И. Кандыба, Е. Е. Антонова и В. В. Кивилшене (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт технологии кровезаменителей и гормональных препаратов (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛИПОЗИНА

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается получения лекарственного средства, применяемого в медицинской практике при алиментарном ожирении.

Известен способ получения адипозина путем экстракции гипофизов убойных животных, осаждения балластных белков, очистки (1).

Однако такой способ длителен по времени (260 ч), получаемый препарат содержит примеси балластных белков, других гормонов и солей до 98% и имеет низкую удельную биологическую активность

1 ЕД/мг. 15

Цель изобретения — повышение активности целевого продукта.

Это достигается тем, что сырье экстрагируют подкисленным водным ацетоном при рН 0,8 — 1,8, экстракт осаждают ацетоном в концентрации 86 — 94%, осадок подкисляют при рН 2,4 — 3,5, целевой продукт сорбируют из раствора на диэтиламиноэтилсефадексе А-25, элюируют буфером при рН 4 — 7, из элюата осаждают органическим растворителем в концентрации 70—

90%.

Способ осуществляют следующим образом.

Гипофизы убоиного скота измельчают на волчке, заливают 4 объемами ацетона и подкпсляют до рН 0,8 — 1,8, перемешивают и течение нескольких часов, нерастворимую часть отделяют фильтрацией или сепарированием, к фильтрату добавляют 2—

4 объема ацетона, а образовавшийся осадок собирают, промывают ацетоном и сушат. Сухой кислый ацетонированный порошок растворяют в воде при рН 2,5 — 3 5, в растворе рН доводят до 5 — 6,5 добавлением щелочи, например 12% -ного водного раствора аммиака. Образовавшийся ocapок отделяют, а надосадочную жидкость пропускают через колонку, наполненную анионитом гелевого типа с ограниченным коэффициентом набухания (от 2 до 6), например типа днэтиламнноэтилсефадекса ДЭАЭ сефадекса — А-25, уравновешенную буфером того же состава, что и раствор кислого ацетонированного порошка после отделения балластных белков при рН 5,0 — 6,5.

Сорбированное на анионите вещество избирательно элюируют буфером, состоящим из одноосновной кислоты, например уксусной или соляной, н основания, например аммиака, в концентрации не менее 0,5 моля и рН от 4,0 до 7,0, преимущественно 5 — 6.

Дополнительную избирательность буфера определяют наличием в нем полярного ор878296

Формула изобретения

Составитель С

Малютина

О.

Орлова

Редактор С. Суркова

Корректор С. Файн

Техред

Заказ 1322/1032 Изд. ¹ 548 Тираж 694 Подписное

1-1ПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Тпп. Харьк, фил. пред. «Патент» ганпческо"o растворителя, например спирта илп ацетона, причем концентрация составляет 10- — 60%, преимущественно 40 — 55%.

С целью сни>кения примесей вещество осаждают из элюата повышением концентрации органического растворителя,о 70—

90%. Затем осадок промывают тем же органическим растворителем и сушат.

Выход продукта из 1 кг гипофизов крупного рогатого скота составляст около

5000 ЕД при активности 5 — 10 ЕД/мг, из

1 кг гипофизов свиней — около 20000 ЕД при активности 10 — 20 ЕД/мг. Дополнительное повышение удельной активности достигают путем молекулярной (j>. ëüòðàöèè через соответствующее молекулярное сито, например, типа сефадскса Г-50.

Пример 1. 2 кг свежезаморожеиных свиных гипофизов измельчают и экстрагируют в течение 1,5 ч при непрерывном перемешивании при комнатной температуре.

Состав экстрагента: 8 л ацетона + л дистиллированной воды + 200 мл соляной кислоты +-200 г хлористого цинка. По окончании экстракции отделяют экстракт от жмыха, жмых утилизируют, а экстракт осаждают 4 объемами ацетона. Через 16—

20 ч ацетоновый маточник сифонируют, а осадок сырца адипозина промывают ацетоном и сушат на воронке Бюхнера под вакуумом. Выход сырца составляет 50—

70 г. 100 г сырца адипозина растворяют в

10 л 0,6% -ного раствора уксусной кислоты и в растворе доводят рН до 6,0 добавлением 12%-ного водного раствора аммиака.

Выпавший осадок балластных белков отделяют центрифугированием, а надосадочную жидкость пропускают через колонку. содержащую 100 мл диэтиламиноэтилсефадекса А-25 (предварительно уравновещенного 0,1 М аммиачно-ацетатным буфером с рН 6,0).

После окончания сорбции смолу промывают 200 мл исходного буфера и заполняют колонку смесью, состоящей из равных объемов 2 М аммиачно-ацетатного буфера с рН 5,0<-0.2 и этилового спирта. Через

20 ч собирают 150 мл элюата и осаждают его добавлением 990 мл этилового спирта.

Оставляют на 20 ч при температуре +5 С.

После этого отделяют осадок центрифугированием, промывают 2 раза по 100 мл этилового спирта, 2 раза по 100 мл ацетона и сушат на воздухе. Вес порошка адипозина составляет 3,6 г. Биологическая а к5

10 !

55 тивпость — 10 ЕД/мг. Выход из 1 кг гипофизов составляет 18000 ЕД.

Пример 2. 2 кг свежезамороженных передних долей гипофизов крупного рогатого скота измельчают и экстр агируют аналогично примеру 1. Выход сырца адипозина составляет 40 r. 100 г сырца адипозпна растворяют в 4 л 0,6%-ного расттвора уксусной кислоты и в растворе доводят рН до 6,0, добавлением 12%-ного водного раствора аммиака. Выпавший осадок балластных белков утилизируют, а к прозрачному раствору добавляют равный объем 0,1 М аммиачно-ацетатного буфера с рН 6,0. Сорбцию, элюирование и осаждение адипозина проводят аналогично примеру 1. Вес порошка адипозина — 4,2 г.

Биологическая активность — 5 ЕД/мг.

Пример 3. 1 г адипозина, полученного по примеру 1, растворяют в 10 мл

0,4%-ного раствора бикарбоната аммония и проводят гельхроматографию на сефадексе Г-50, уравновешенном 0,4%-ным раствором бикарбоната аммония. Фракции, отвечающие адипозину, объединяют и лиофилизируют. Вес адипозина 428 мг. Биологическая активность — 20 ЕД/мг. Выход

85%.

Предлагаемь:и способ позволяет получить цслевой продукт высокого качества без примесей балластных белков, гормонов и солей с высокой активностью

5 — 20 ЕД мг.

Способ получения адипозина путем экстракции гипофпзов убойных животных, осаждения балластных белков, очистки, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта, сырье экстрагируют подкисленным водным ацетоном при рН 0,8 — 1,8, экстракт осаждают ацетоном в концентрации 86 — 94%, осадок подкисляют при рН 2,4 — 35, целевой продукт сорбируют из раствора на диэтиламиноэтилсефадексе А-25, элюируют буфером при рН 4 — 7, из элюата осаждают органическим растворителем в концентрации 70 — 90%.

Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:

1. Авторское свидетельство СССР № 194259, кл. А 61 К 37/32, 1966.