Способ получения биомассы еsснеriснiа coli м-17

 

Союз Советских

Социапистичесиих

Респубпии

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<>ii907067 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) ЗаЯвлено 25. 04. 80 (21) 2949304/28-13 с присоединением заявки М .(23) Приоритет

Опубликовано 23.02.82. Бюллетень И 7

Дата опубликования описания 23.02.82. (51)M. Кл.

С 12 М 1/00//

А 61 К 39/108

А 61 К 39/108

С 12 R 1/19

Государственный комитет

СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК576.8. . 093. 33 (088. 8) Б.А.Клюшин, В.А.Жирнов, Г.А.Угодчиков, Л.В,Кривушкина и А.С.Нелюбин (72) Авторы изобретения (7I ) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ

ESCHERICHIA C0LI M-17

Изобретение относится к микробиологии и касается производства биомассы Escherichia coli M-17.

Известен способ получения биомассы Escherichiа coli M-17 для производства колибактерина путем посева исходной культуры в питательную среду с последующим культивированием в глубинных условиях при интенсивном перемешивании и непрерывной аэрации и выделением целевого продукта (1 J.

Однако известный способ не позволяет увеличить выход живой биомассы E. col i M" 17 (выход живой биомассы из расчета на 1 таблетку весом

0,25 r составляет 10,5 млрд. клеток).

Цель изобретения — повышение выхода живой биомассы.

Эта цель достигается тем, что согласно способу получения биомассы Escherichia coli М-17 для производства колибактерина осуществля- ют путем посева исходной культуры в питательную среду с последующим культивированием в глубинных условиях при интенсивном перемешиоании и непрерывной аэрации и выделением целевого продукта, культивирование ведут в присутствии ионов двухвалентного елеза в концентрации

2 ° 10 8-10 11 при посевной дозе исходной культуры 250-700 млн, микробных клеток на 1 мл среды.

Способ осуществляют следующим образом.

Подготовку ферментера осуществляют. изьестным путем. Затем в ферментер вводят стерильный казеиновый бульон, содержащий 1,25Х желатины с содержанием аминного азота в пределах 220-270 мг и пептона 0,5-0,6Х, рН=7,6-7,7. После этого в ферментер добавляют маточную культуру бак= терий Е. со1i М-17 до концентрации

250-700 мпн. микробных тел на 1 мл среды в ферментере. Затем в фермен90706

Формула изобретения

Составитель С.Малюти1:а

Редактор Г.Волкова Texpep A. Ьабинец Корректор Л.Бокшан

Заказ 5!9/34 Тираж 505 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР на делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

<11илиал 1!1ГП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тер вводят необходимую дозу стерильного раствора ионов двухвалентнoro железа, которую рассчитывают с учетом того, чтобы ее концентрация в

1 . ферментере была 2 10 -8 10 М. Культивирование ведут 7 ч при темпе = ратуре 37 С, скорости вращения мео, шапки 500-700 об/мин, аэрации стерильным воздухом, поддерживая рН в пределах 7,6-7,9. Причем для Коррргиравания рН среды используют 40% раствор глюкозы, поддерживая рН в начале выращивания (первые 2,5 ч) в пределах 7,6 — 7,7 и 7,8-7,9 в конце выращивания, не допуская резких колебаний рН.

Общее количество бактерий Е,со11

М-17 в процессе культивирования определяют обычными способами по оп. тической плотности, а количество живых, например, путем высева на чашки Петри с агаром Энда.

Пример. Б ферментер рабочей емкостью 2 л вводят стерильный казеиновый бульон в количестве 1,8 л, содержащий 1,25Z желатины, 250 мг аминного азота, 0,5% пептона, рН=7,6 о

После установления температуры 37 С в ферментер добавляют маточную культуру бактерий Е. со11 М-17 до концен трации 250 млн, микробных те Я на

1 мл среды. Затем в ферментер добавляют 0,2 мл стерильного раствора

FeS04 7Н 0 с концентрацией 5 0 1!., при этом концентрация ионов двухва лентного железа в ферментере будет

5 10 !.

Культивирование ведут 7 ч при тем-пературе 37 С, скорости вращения мешалки 700 об/мин, аэрации стерильным воздухом, поддерживая рН в пределах 7,6-7,7 первые 2,5 ч и в пределах 7,8-7,9 в конце выращивания пу/ 4 тем подачи 407. раствора глюкозы, не допуская резких колебаний рН.

Увеличение к концу культивирования выхода живых бактерий Е. са1!

M-17 по предлагаемому способу по сравнению с контролем составляет 2!%, Применение предлагаемого способа показало, что после 7 ч культив грования среднее увеличение выхода живых бактерий E. col! М--17 по сравне-. нию с контролем составляет 24%, Внедрение предлагаемого способа только в производстве бактерийных препаратов, в частности сухого колибактерина, позволит существенно увеличить выход целевого продукта без дополнительных затрат сырья (в среднем на !8%), что даст значительный экономический эффект.

Способ получения биомассы Escher i eh! а са1 i M-17 для производства колибактерина путем посева исходной культуры в питательную среду с последующим культивированием ь глубинных условиях при интенсивном перемешивании и непрерывной аэрации и выделением целевого продукта, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода живой биомаскультивирование ведут в присут; твин ионов двухвалентно о железа

-5 -$

,онпентрации 2 10 -8 10 M при посевной дозе исходной культуры 250-. !

00 млн. микробных клеток на 1 мл, i:p еды, Источники информации, принятые во внимание при эксгертизе

1. Авторское свидетельство СССР !! - 324771, кл. А 61 К 23/00, С !2 К 3/ОО, 1971.