Способ определения бактерицидности производственных сточных вод
Союз Советскик
Социалистическии
Республик
ОП ИСАНИЕ
И ЗОБРЕТЕ Ы ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6l ) Дополнительное к ввт, свиид-ву(22) Заявлено 04. 11. 80 (21) 3003302/29-26 с присоединением заявки йе(23)Приоритет
Опубликовано 07. 06 . 82. Бюллетень Jg 2 ) (5! )М. Кл.
G 01 N 21/77
С 02 F 5/10
3Ьсудврстмииый комитет
СССР ао делам изебретеиий и открытий (53) УДК 628. 543 (088.8) Дата опубликования описания 07. 06. 82 (72) Авторы изобретения
Е.Г. Выглазова, Г.П. Черныш и Л.Н. Бала анова -:: - " Я (71) Заявитель
Белгородский филиал Всесоюзного научн витаминного института (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЦИДНОСТИ
ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ СТОЧНЫХ ВОД
Изобретение относится к биохимической очистке сточных вод и может быть использовано для быстрого определения бактерицидности производственных сточных вод и их компонентов, а такжв для контроля за работой сооружений.
Известен способ контроля качества биохимической очистки сточных вод, заключающийся в,сравнении двух видов !
О дегидрогенаэнои активности исходнои иловой смеси с добавлением 1-23 неочи. щенной сточной воды и оценке качества биохимической очистки по разности во времени появления окрашивания
15 сравниваемых образцов (1 ).
Количество добавляемой неочищенной сточной воды устанавливают в зависимости от значения ее БПКполн.
Контроль за изменением дегидроге20 назной активности осуществляют, используя известное свойство трифенилтетразолия хлористого изменять окраску при переходе из бесцветной окис2 ленной формы в окрашенную (формаэан) восстановленную, когда в образце возникают анаэробные условия.
Способ может быть применен для контроля качества процесса биохимической очистки промышленных сточных вод.
Однако использование визуального метода фиксирования момента окрашивания приводит к снижению точности определения.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к предлагаемому является способ определения бактерицидности производственных сточных вод и их .компонентов, который включает следующие операции: наливают в ряд пробирок по
10 мл исследуемой сточной воды или искусственного раствора с исследуе-! мым бактерицидным соединением в раз. личных разведениях. В контрольную пробирку наливают по 2 мл лловой жиак сти с адаптированным активным
15
20 е25
3 9 илом и после тщательного перемешивания по .!,5 мл 1ь-ного раствора
2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (ТТХ), что соответствует
0,48 10 моль/л в конечном объеме исследуемого раствора. Содержимое пробирок вновь перемешивают и пробир ки ставят в термостат или водяную баню с температурой 37 С. Через определенный промежуток времени в зависимости от степени развития бактериальной флоры активный ил приобретает окраску от розового до рубинового цвета за счет образования кристаллов формазана (2 ).
Недостатки известного способа заключаются в сравнительно -низкой чувствительности и недостаточной скорости определения (продолжитель ность анализа 2 ч).
Цель. изобретения — увеличение точности и чувствительности с одновр менным сокращением времени определения бактерицидности производственных сточных вод.
Указанная цель достигается тем, что в способе, основанном на сравнении различных видов дегидрогенаэной активности иловой смеси при 35-37 С, включающем операцию добавления в образцы раствора соли тетразолиЭ с последующей оценкой бактерицидности по окрашиванию сравниваемых образцов, в качестве соли тетразолия используют раствор бромистого 3-(4,5диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) концентрации 0,74 1040,56 10 моль/л в конечном объеме исследуемого раствора.
На фиг. 1 представлено изменение дегидрогенаэной активности с ростом концентрации МТТ; на фиг. 2 - зависимость накопления формазана от времени: а - при применении соли МТТ, d- соли ТТХ.
С ростом концентрации MTT (фиг.1) наблюдается увеличение дегидрогеназной активности. Однако при концентрации более 0,56 ° 10 моль/л отмечено ингибирование микроорганизмов актизного ила, и кривая дегидрогеназной активности падает, в связи с чем в качестве рабочих пределов выбраны концентрации МТТ в конечном объеме исследуемого раствора 0,74"10 0,56 10 моль/л.
Для TTX предельно допустимой концентрацией, при которой не наблюдается иt-!гибированич, является
34323 4
0,8 10 моль/л, а рабочей концентрат 3 цией выбрана концентрация
0,48 10 моль/л в конечном. объеме исследуемого раствора.
Наблюдаемое явление можно объяснить гораздо большей проницаемостью
MTT в микробную клетку и подключения этого акцептора в более глубокие места дыхательной цепи.
Следовательно, в предлагаемом способе расходуется меньше реактивов и возрастает чувствительность.
В табл. 1 приведены результаты определения общей дегидрогеназной активности микроорганизмов активного ила предлагаемым и известным способами.
Из табл. 1 видно, что ошибка воспроизводимости результатов по предлагаемому способу почти вдвое ниже, чем по известному, В табл. 2 приведены сравнительные исследования зависимости накопления формазана от времени.при использовании МТТ и ТТХ, показывающие, что использование МТТ в предлагаемых пределах позволяет сократить время определения до 15-20 мин вместо 2 ч с ТТХ
Способ осуществляют следующим образом.
Наливают в пробирки одинаковые объемы (10 мл) сточной воды или искусствен toro раствора. В контрольную пробирку наливают такой же объем раэбавляющей воды. Затем доливают во все пробирки по 2 мл иловой жидкости с адаптированным активным илом (содержание 9,2-10 мг). Содержимое пробирок тщательно перемешивают и добавляют раствор MTT из расчета
0,74 ° 10 -0,56 1О моль/л в конечном объеме исследуемого раствора.
Содержимое пробирок вновь тщательно перемешивают и термостатируют при
37 С. Через 15 мин процесс восстановления прекращают добавлением к испытуемой.смеси 1 мл ледяной уксусной кислоты, которую вносят непосредствен но в осадок, и смесь центрифугируют
10 мин при 5000 об/мин. Осадок выдерживают в растворителе, например спирте,до полного обесцвечивания.
Затем вновь центрифугируют и окрашенные вытяжки калориметрируют на фотоэлектрическом абсорциометре- нефеломет. ре--69 со светофильтром Ю 1 в кювете
10 мм.
323
Табли ца 1.
Дегидрогеназная активность, мг/г мин.
Ошибка воспроиз- Время проведения водимости, 3 анализа, Способ
126,3 + 11,0
509,0 + 24,0 8,7
+ 4,8
2,0 - 3,0
0,3 — 1,0
Известный
Предлагаемый
Т а б л и ц а 2 (120 мин) (20 мин) ТТХ
МТТ
Оптическая плотность
Концентрация формазана, мг/л
Концентрация формазана, мг/л
Оптическая плотность
65,о
37,8
О, 825
0,820
О, 920
0,920
65,0
37,7
67,5
40,3
0,870
0,955
34,0
0,928
66,0
0,740
0,760
62,0 о,855
34,9
66,о
0,928
34,5
О, 759
5 934
Пример 1. В первую пробирку помещают 10 мл сточной воды Белгородского витаминного комбината, во вторую 10 мл воды (контроль). Затем в каждую пробирку вносят по 2 мл S иловой жидкости с адаптированным активным илом (содержание 9,2-10 мг).
Перемешивают и добавляют по 1 мл
0,14-ного раствора. МТТ (т.е.
О, 19 10 моль/л в конечном объеме), повторно перемешивают, помещают в термостат при 37 С. Через 15 мин добавляют к испытуемой смеси 1 мл ледяной уксусной кислоты.
П р м е р 2. Определение ведут 15 аналогично примеру 1.
В табл. 3 приведены результаты анализа исследуемой и контрольной про. бы сточной воды по примерам 1 и 2.
Ингибирование дегидрогеназной активности больше чем на 204 указывает на токсичность промышленных сточных вод.
Применение предлагаемого способа для ускоренного определения бактерицидности производственных сточных вод позволит повысить в два раза точность определения, снизить расход реагентов и повысить чувствительность метода. При этом время определения сокращается с 2 ч до 15 мин, т.е.. приблизительно в восемь раз.
его использование на очистных сооружениях обеспечит санитарный эффект за счет оперативного контроля за состоянием активного ила и определением токсичности воды при биохимической очистке.
934323
Т а б л и ц а 3
Пример
Проба воды
Концентрация
АИ, r/л
ЗольКонцентрация формазана
10, мг/л
Оптичес
Удельная
ДАИ мл/л
Инг.уд.
ДАИ, 3 ность, r/ë кая плотность раствора
1 Сточ- 7,4 2,68 0,382 17,3 0,365 ная
1,88
Контроль
0,388 17,8
0,372
7,4 2,69 0,296 13,5
0,282 24,2
2 Сточная
Контроль
0,388 17,8
0,372
Формула изобретения
Способ определения бактерицидности производственных сточных вод путем сравнения различных видов дегидрогеназной активности иловой смеси при 35-37 С, включающий введение в о6разец соли тетразолия с последующей оценкой бактерицидности по интенсивности окраски, о т л и ч а ю щ и и
35 с я тем, что, с целью сокращения времени и повышения точности анализа, в качестве соли тетразолия используют раствор бромистого 3-(4,5Риму
Arz
I диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолия концентрации 0,74 10 40,56 -10" моль/л в конечном обьеме исследуемого раствора.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Авторское свидетельство СССР
И 654548, кл. С 02 С 1/02, 1976.
2. Зотов В. Ускоренное определение бактерицидности производственных сточных вод и их компонентов. — "Водоснабжение и санитарная техника", 1972, Ю 3 (прототип).
934323
Ю Ю Ф 120 1Я f8
2rrue
Составитель А. )жаворонкова
Редактор А. Лежнина .Техред Т. Иаточка
Корректор В. Синицкая
Подписное
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Заказ 3916/37 Тираж 887
ВНИИПИ Государственного комитета СССР
IlO 3 6 eT H H OTKpbfTNH
113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д 415
