Способ определения анилина в биологических объектах

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

Оп ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (1 М К з (22) Заявлено 02.10.79 (21) 2849192/28-13

I с присоединением заявки Мо (з 01 J 33/48

Государственный комитет

СССВ ио делам изобретений и открытий (23) Приоритет

t5 ) 4 1616. 07 (088. 8) Опубликовано 30 ° 0782Бюллетень Ì9 28

Дата опубликования описания 30 07. 82

ВСЕСОЮЗНАЯ аатиню1 ухмачвсни 1" .

ЯВВЛЯФПЖА (72) Авторы изобретения

Л.В.Песахович и 3.М.Деева

Тюменский государственный медицинский институ и Алтайский государственный медицинский инсти (71) Заявители (547 СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНИЛИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ

ОБЪЕКТАХ

Изобретение относится к медицине, а именно к способам анализа промыш-. ленных органических ядов в клинической судебно-медицинской токсикологии и в техническом контроле полупродуктов и продуктов синтеза.

Известен способ определения анилина в биологических объектах путем гомогенизации пробы, осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты, отделейия осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости .с последующим опрецелением анилина в гидролизате с помощью реакции азосочетания (1).

Однако известный способ не обеспечивает необходимой точности определения анилина в биологических объектах и имеет недостаточную селективность анализа, что снижает достоверность получаемых результатов.

Цель изобретения — повышение точности и селективности анализа °

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения анилина в биологических объектах путем гомогениэации пробы, осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты, отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости с последующим определением анилина в гидролизате с помощью реакции азосочетания, гидролизат обрабатывают хлороформом, хлороформный экстракт подвергают дополнительной очистке электрофорезом на бумаге, при напряжении 400 В, а в качестве электролита берут буферный раствор Брит- тона-Робинсона при рН 2,3.

Способ осуществляют следующим образом.

Анилин определяют путем гомогениэации пробы, осаждения белков раствором трихлоруксусной кислоты (ТХУК), промывания и отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости, обработки ее хлороформом, дополнительной очистки электрофорезом на бумаге при напряжении 400 В в присутствии электролита буферного раствора Бриттона-Робинсона при рН 2,3, последующего определения анилина с помощью реакции аэосочетания, при этом проводят 3-х кратную обработку осадка раствором ТХУК, 3-х кратную экстракцию основания анилина хлороформом, дополнительную очистку хлороформного экстракта электрофореэом на бумаге при напряжении 400 В, эле947766

Формула изобретения

Составитель Ю.Алмазов

Редактор Н.Гришанова Техред Т. Маточка

Корректор У. Пономаренко

Заказ 5625/68 Тираж 887 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам. изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ктролит-буферный раствор Бриттона

Робинсона, рН 2,3.

Пример. К 10 мл крови добавляют равный объем воды. Через 20 мин по каплям при перемешивании приливают

9 мл 20% раствора ТХУК и оставляют 5 на 10 мин, после чего смесь центрифугируют (6000 об/мин, 5 мин). Надосадочную жидкость сливают, осадок трижды гомогенизируют в течение 5 мин с 10мл 1% раствора ТХУК. Промывную 10 жидкость отделяют центрифугированием. К объединенным центрифугатам добавляют концентрированную соляную кислоту до рН 1 и нагревают на кипящей водяной бане в колбе с обратным воздушным холодильником в течение

1 ч. После гидролиза жидкость охлаждают до комнатной температуры, добавляют 25Ъ раствор аммиака до рН 9 и экстрагируют хлороформом в течение

5 мин (30 мл 3). Образовавшуюся эмульсию центрифугируют, хлороформ- . ные экстракты фильтруют через складчатый фильтр (диаметр 5 < M) в фарфо- ровую чашку, 4=мешивают с 2 мл спиртового раствора соляной кислоты (3 мл концентрированной соляной кислоты, плотностью 1,19 смешивают с 100 мл этилового спирта 95Ъ). Объединенные экстракты выпаривают при комнатной температуре в защищенном от света месте. Сухой остаток растворяют в

0,01 н растворе соляной кислоты. С целью очистки аликвоту DBcTEopcl наносят на полосы хроматографической бумаги FN15 (2 29 см) и подвергают электрофорезу в камерах к прибору

ПВЭФ-1 в течение 1 ч йри напряжении

400 В, электролит-буферный раствор

Бриттона-Робинсона, начальная температура электролита 20 С. Контрольную 40

O полосу разрезают на две части, для проявления которых используют соответственно реакции образования азокрасителя и азометина. Положение зон, на исследуемых электрофореграммах ус- 4g танавливают посредством сравнения с положением окрашенных участков на контрольной полосе. Установленные участки вырезают в пределах 0,5 см от передней и задней границ зон и элюируют 0,01 н раствором соляной кислоты. Для фотоколориметрического определения анилина к 0,5 мл алюата последовательно добавляют 0,25 мл 0,1 н раствора соляной кислоты, 0,05 мл свежеприготовленного 0,01 н раствора нитрита натрия. Смесь встряхивают и через 30 мин добавляют 0,3 мл 0,05Ъ раствора хинозола и 1 мл 0,1 н раствора гидроксида натрия. Объем смеси доводят водой до 10 мл. Оптическую плотность окрашенного раствора измеряют на фотоэлектроколориметре при синем светофильтре, кювета 10 мм.

Раствором сравнения служит смесь реактивов без элюата, содержащего анилин. Количество анилина определяют по калибровочному графику

Применение в предлагаемом способе дополнительной обработки субстрата извлекателем, экстракции органическим растворителем и электрофоретической очистки повышает селективность анализа, увеличивает выход изолируемого вещества и повышает точность анализа в 2 раза.

Способ определения анилина в биологических объектах путем гомогенизации пробы, осаждения белков растворов трихлоруксусной кислоты, отделения осадка, кислотного гидролиза надосадочной жидкости с последующим определением анилина в гидролизате с помощью реакции азосочетания, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности и селективности анализа, гидролизат обрабатывают хлороформом, хлороформный экстракт подвергают дополнительной очистке электрофорезом на бумаге при напряжении 400 В, а в качестве электролита берут буферный раствор Бриттона-Робинсона при рН 2,3.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Гадаскина И.Д., Филов В.А. Превращение и определение промышленных органических ядов в организме. Л., Медицина, с. 272-273, 1971.