Способ идентификации антител к поверхностному антигену гепатита в

 

<»>963509

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. гвнд-ву— (51)М.Кл.з А 61 В 10/00 (22) Заявлено 31.03.81 (21) 3272362 28-13 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 07.10.82. Бюллетень Ь 37 (45) Дата опубликования описания 07.10.82

Государственный комитет ло делам изобретений и открытий (53) УДК Л616-07 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. А. Бурлев, Б. А. Герасун и В. M. Титов

Всесоюзный научно-исследовательский центр по охране здоровья матери и ребенка (71) Заявитель (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ АНТИТЕЛ

К ПОВЕРХНОСТНОМУ АНТИГЕНУ ГЕПАТИТА В

Изобрететтие относится к мединине и может быть использовано в диагностике гепатотропных заболеваний.

Известен способ идентификации антител к поверхностному антигвну гепатита В в реакции встречного иммуноэлектрофореза (1).

Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа идентификации антител к поверхностному антигену гепатита В в реакции встречного иммунозлектрофореза пробу исследуемого образца послвдовательно разводят стаодартной сывороткой, содержащей поверхностныи антиген гепатита В, полученные разделения инкубируют в течение 30 — 60 мин и наличие специфических антител определяют по снижению титра антигена стандартной сыворотки, Пример 1. На тщателыно о безжиренную стеклянную пластинку размером

9Х12 (13Х 18 см) наносят тонкий слой (3 — 4 мм) 1%-ного агара на ацетат-мединаловом буфере, рН 8,3 — 8,6.

В застывшем al.agape строго по трафарету вырезают лунки, которые располагают рядами так, чтобы верхний находился со стороны анодного, а нижний — катодного электродов. Диаметр лунок — 4 мм, расстояние между центрами лунок по горизонтали и верпикали — 7 мм. Элекпродные сосуды заполняют соединительным буфером — тем же что и для приготовления агара.

Параллельно с этим в пластмассовой пластине для гемагглютинации mm в стеклянных пробирках лроводят последовательное пипрование исследуемого образца, иапользуя в качестве растворителя сыворотку, содержащую поверхностныи антиген гепатита В в титре 1: 16 — 1: 32. Всего готовят 10 последовательных разведений

15 от 1:1 до 1:10 (1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1: 10) в объеме 0,1 — 2,0 мл.

Содержимое тщательно перемешивают и инкубируют при 37 С и течение 30 — 60 мнн. После этого все пробы вносят в лун20 ки со стороны катодного электрода. В лунки со стороны аиодного электрода вносят специфические антитела тест-системы. Параллельно с исследуемыми образцамн производят титрование станда|ртной

25 сыворотки, содержащей поверхностный антиген гепатита В. Эти контрольные пробы также вносят в соответствующие лунки;

Таким образом на пластине с агаром одновременно исследуются контрольные и испытуемые образцы.

963509

III l = .;:, 100, Ii — 0

lх

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред И. Пенчко

Редактор Е. Хейфиц

Корректор С. Файн

Заказ 1026/742 Изд. № 241 Тираж 717 Подписное

НПО «Поиск> Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий !!3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент>

Встрс шый цммуноэлсктрофорсз проводят,в течение 90 мин ири силе тока 35—

40 мЛ..

Учет результатов проводят в проходящем свете на темпом фоне. Первоначально у штывают контрольные разведения стандартной сыворотки, содержащеи поверхностный антпген гепатита В (для удо бства попользуют обратные разведения: титр 1: 6 — учит:.пзается как титр 6), затем — титр ацтигсва исследуемого образца. 11олучс ные данные рассчитывают по следующей формуле: где ПИ вЂ” процент ингибиции;

К вЂ” обратный титр стандартного ан виген а;

Π— обратныи титр исследуемого образца.

Положительным результатом реакции считаетcs! величина процента ивгпбицип больше 10%

2о

Использование предложенного способа позволяет осуществлять диагностику специфических анпител к поверхностному антигену гепатита В у доноров крови, больны> вирусным гепатитом (острых и хронических), в группах высокото риска заражения вирусным гепатитом и при выборе сыры и производстве специфического направле;: ного иммуноглобулина против вирусного гепатита типа В, что улучшает систему профилактических, противоэпидемических мероприятий и позволяет организовать промышленный выпуск специфичных противовирусных профилактических и лечебных препаратов.

Всего было абследовано 1560 образцов сывороток плацентарной и абортной крови. В реакции встречного иммуноэлектрофореза обнаружено 3 (0,19%1 положительных образца в то время как при ис- 45 пользовании предложенного способа 24? (15,8% ) обер а з цов.

Предложенный способ в 83 раза чувствительнее, чем способ встречного иммуноэлсктрофореза, при его массовом примецсlili!i. Все поло кительцыс о разцы были идентифицированы па наличие специфичесних антител в методе пассивной гемагглютинацпи. Эти результаты указывают на

85 — 90% совпадение между двумя методами.

Кроме того, было исследовано 20 образIIoIi сывороток, содержащих антитела к поверхностному антигену гепа пита В. В реакции встречного иммуноэлектрофореза выявлено 4 образца, в .,реакпни пассивной гсмаплютивации --- 19 образцов, в радиопммунцом методе — 20. При применении предлоясенного способа было обнаружено

15 образцов.

Предложенный способ превосходит метод встречного иммуноэлектрофореза, незначительно уступает реакции, пассивной гсмап лютинации и значительно отличается от ра.1иаиммунного метода, Все это указывает па значительные перспективы его применения.

Предложенный способ более чувствителен, что увеличивает его информативность ,и тем са мым повышает свойства, необходимые при диагностике и лечении ряда гспатотропцых заболеваний.

Способ идентификации антител и поверхностному антигену гепатита В в реакции встречного иммуноэлектрофореза, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, пробу исследуемого образца последовательно разводят стандартной сывороткой, содержащей поверхностный аптиген гепатита В, полученные разведения инкубируют в течение 30 — 60 мин и наличие специфических антител определяют по снижению титра антигена стандартной сыворотки.

Источник информации, принятый во внима ние при экспертизе:

1, Фримель Х. Иммунологнческие методы. Ч., «Мир», 1979.