Способ определения жизнеспособности гельминтов и их личинок

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (ii) 967471 (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 07 ° 08.80 (23) 2972561/30-15 с присоединением заявки ¹(23) Приоритет-

Опубликовано 23.1082. Бюллетень М39

Р М gj з

A 61 В 10/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (S3) УДК 612. 072, . 7 (088,8) Дата опубликования описания 23.10.82

L»R„,q.

Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ

ГEJIbNHHTOB И ИХ ЛИЧИНОК

Изобретение относится к гельмин тологии, а конкретно к способам,позволяющим дифференцировать живых гельминтов и их личинок от мертвых, и может быть использовано при проведении ряда гельминтологических исследований в ветеринарии и биологии.

Известен способ определения жизнеспособности личинок трематод (адолескарий, парамфистоматид) по способности личинок эксцистироваться под воздействием химических веществ $1) .

Недостатком такого способа является то, что он пригоден только для работы с личинками, находящимися в цистах, которые,главным образом,формируются у трематод, и Не может быть использован при работах а гельминтами, относящимися к другим классам.

Известен также способ определения жизнеспособности гельми нтов и их личинок, заключающийся в стимуляции движения живых объектов нагреванием исследуемого материала до 37-38 С и подсчета под микроскопом неподвижных 25 (.,мертвых) и двигающихся (живых) гельминтов или их зародышей t2).

Недостатком известного способа является невысокая его точность, которая за,висит от многих причин: не все живйе 30 гельминты и личинки при нагревании начинают одновременно двигаться,поэто. му для установления их жизнеспособности приходится вести наблюдение длительное время, при длительном; или повторном нагревании, равно так и при температуре выше оптимальной (38 С), возможна. быстрая гибель гельминтов и их зародышей, на точность влияют характер источника тепла, скорость испарения влаги иэ пробы, температура воздуха, скорость нагревания, вид гельминта и др.

Целью изобретения является повышение точности определения жизнеспособности гельминтов и их личинок.

Поставленная цель достигается тем, что стимуляцию подвижности гельминтов и их личинок осуществляют воздействием на них 40-603-ного водного раствора диметилсульфоксида или диметилформамида в течение 30

40 с.

Способ осуществляется следующим образом.

Готовят 40-60%-ный водный раствор диметилсульфоксида или диметилформамида. Каплю раствора наносят на предметное стекло. Затем с помощью пипетки или препаровальной иглы гель967471

Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Заказ 7941/10

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная,4 минты, например оллуланй и их личинки, помещают в.раствор и через 30-40 с ведут подсчет подвижных (живых/ и неподвижных (мертвых) объектов известными методами, например с помощью микроскопа или лупы. 5

Пример 1. Для установления сроков начала движения всех живых оллулан и их личинок под воздействием предлагаемых веществ готовят 40 и

60%-ные водные растворы .диметилсуль- !О фоксида или диметилформамида. На предметное стекло наносят каплю. одного

1нз растворов, куда помещают до 10 экземпляров гельминтов..Наблюдение за объектами ведут под микроскопом.

В опыте используют 500 экземпляров взрослых оллулани 273 - личинок оллулан. Установлено,что все живые оллулаиы и их личинки начинают дви..гаться в 40%-ном растворе диметил- сульфоксида через 35-37 с, в 60%ном растворе диметилсульфаксида через 32-36 с и в 60%-ном растворе диметилформамнда — через 30 — 40 с.

Пример 2. Свиноматкам, инвазированным оллуланами, задают пиперазин в лечебной дозе, т.е. 15 Г на животное утрбм и столько же вечером. Подопытных и контрольных животных убивают через 10 сут. Прижизненных методов определения эффектив- -ЗО ности препаратов при этом заболева-. нии нет. Для определения эффективности пиперазина берут пробы слизистой оболочки желудка, из которых выделяют оллулан в их личинки. Часть 35 их.помещают в каплю 50%-ного раствора диметилсульфоксида, других — в раствор такой же концентрации диметилформамида, а третьих оставляют для сравнения предложенного способа с Щ известным.

От воздействия растворов диметилсульфоксида и диметилформамида оллула. ны и их личинки как от подопытных

7 так и от контрольных животных начина- 45 .ют активно двигаться через 30-40 с

1 .т. е. остаются .живыми. Следовательно, пиперазин не оказывает на одлулан губительного действия.

При определении жизнеспособности этих же оллулан методом подогревания у 21 гельминта из 96 просмотренных подвижность .не отмечена,что составляеТ 21,83. Причем количество неподвижных гельминтов одинаково как в пробах, взятых от контрольных, танк и от подопытных животных.

Из этого примера видно, что предлагаемый метод точнее, чем метод определения жизнеспособности нагреванием.

Пример 3. Используют живые оллуланы и их личинки. В исходную пробу заранее добавляют 6% убитых соляной кислотой оллулан. Проводят по 5. опытов с 50%-ным раствором диметилсульфоксида и 50%-ным раствором диметилформамида, а также способом нагревания. В каждом опыте учитывается по 100 гельминтов.

Опыт с диметилсульфоксидом: живых гельминтов обнаружено (91, 93, 93, 93.и 94 экземпляров) -92,8 + 0,98 эк- земпляров.

Опыт с диметилформамидом: живых гельминтов обнаружено (91, 92, 92,.

94 и 94 экземпляров) 92,6 «1,2 экземпляров.

Опыт с нагреванием: живых гельминтов обнаружено. <74. 81, 87, 90 и 93 экземпляров) 95 1 6,8 экземпляров.

Следовательно, ошибка предлагаемого метода определения жизнеспособности гельминтов минимальна. В то же время метод нагреваиия дает ошибку намного выше.

Предлагаемый способ определения

1жизнеспособности гельминтов,. напри,мер, оллулан их личинок, обладает высокой точностью, а также отличается простотой в исполнении. Диметилсульфоксид, диметилформамид выпускаются промышленностью, а: расход .этих веществ минимальнйй — с помощью одной капли раствора можно определить жизнеспособность у 100 и более экземпляров оллулан и их личинок.Способ не требует специального оборудования.

Формула изобретения

Способ определения жизнеспособности гельминтов и их личинок, вклю чающий стимуляцию подвижности гельминтов и их личинок и последующий подсчет подвижных и неподвижных объектов, о т л и ч а ю щ и.й с я тем, что, с целью повышения точности способа, стимуляцию подвижности гельминтов и их личинок осуществляют воздействием на них 40-60%-ного водного раствора диметилсульфоксида или диметилформамида в течение 30-40 с.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

9 550156, кл. A 61 В 10/00, 1977..

2. Котельников Г.A. Диагностика гельминтозов животных. М.,"Колос", 1974, с. 188-200.