Способ получения моноспецифической сыворотки
1. (ЛЮСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПБЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ путем нммуннэации животн1ях-продуцентов комплексом антиген-антитело, с последующим кровопусканием и отделением целевого продукта, отличаюад и и с я тем, что, .с целью повышения специфической.активности целе восчэ продукта, лосле первой,инъекции комш1ек х « антиген-антитело извлекают иммунну.ю СЫВ01ЮТКУ, обрабатывайэт ее спшЫфическим антигеном и полученНь комплекс вводят тому же животному-продуценту. 2. Способ по п. 1, от л и чающий с я тем, 4to комплекс антигенантитело вводят пятикратно с интервалом между инъекциями 10 дней.
СОЮЗ СООЕТСНИХ
WUHMNI5 . РЕСПИБЛИН
ГОСХ1ЬЮСтВЕННЫй НОМйтат ССССО
ЛЮ* 9 ЬЮ В ТВОЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ
Й llRTOPCHOMV. СЗИДЕТВ1ЬОТВУ (21) 3356177/28-13 (22). 22.09.81 (46) 23.05.83.Бвл. В 19 (72) Э.Г. Кравцов и М.И; Карманов (71) 1-й Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени медйцинский институт им. И.М, Сеченова (53). 615.373.3(088.8) (56) 1. Кульберг A.ß. Ънтииммуногло-. булины. "Медицина", 1978.
2. Гусев A.È., Язова А.К. Бюллетень экспериментальНОй биологии и медицины. 1970, 9 4,. с. 120. (54)(57) 1. СПОСОБ. ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЯ CblBOPOTKH путем имму-.,SUÄÄ1018643 А ннзации животных-продуцентов комплексом антиген-антитело, с последующим кровопусканием и отделением целевого продукта, о т л и ч а вц и и с я тем, что, с целью повы-. шения специфической активности целе-. вого продукта, лосле.первой инъекции комплексом антиген-антитело извлекают иммуинув сыворотку, обраба.тывают ее специФнческим антигеном и.полученный комплекс вводят тому ие иивотному-продуценту.
2.: Способ о и. 1, о т л и ч а ю- шийся тем, что комплекс антиген:аититело вводят пятикратно с интервалом меиду инъекциями 10 дней.
1018643
Изобретение относится к иммуноло гии и может быть использовано в производстве диагностических сывороток заданной специфичности.
Известен способ получения преципитирующих сывороток узкой специ- 5 фичности, заключающийся в том, что животному-продуценту многократно вводят растворимый антиген с интервалом не менее 10 дней и полученную от него сыворотку сорбируют гетерологич- 30 ным антигеном (1 ).
Известен также способ получения моноспецифической сыворотки путем иммунизации животных-продуцентов комплексом антиген-антитело полученным путем препаративного;выделения последнего из иммуноэлектрофореграммы с последующим кровопусканием и отделением целевого продукта(2 3.
Однако известные способы не обеспечивают высокой специфической актив ности целевого продукта.
Целью изобретения является повышение специфической активности целевого продукта.
Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения моноспецифической сйворотки путем иммунизации животных-продуцентов комплексом антиген-антитело, с последующим кровопусканием и отделением 39 целевого продукта, после первой инъек-, ции комплексом антиген-антитело извле-, кают иммунную сыворотку, обрабатывают ее специфическим антигеном и полученный комплекс вводят тому же 35 животному-продуценту.
Кроме того, комплекс антиген-ан титело вводят пятикратно с интерва- .лом между инъекциями 10 дней.
Способ осуществляется следующим образом.
Предварительно животное-продуцент иммуниэируют заданным антигеном по .общепринятому методу. Затем от живот-45 ного берут кровь, выделяют иммунную сыворотку, сорбируют ее гетерологичным антигеном, после чего формируют преципитат с заданным антигеном.
Этот преципитат используют для реим- 5й мунизации того же животного-продуцента. Вышеописанную операцию повторяют перед каждой последующей реиммунизацией °
Пример 1. Общепринятым мето55 дом получают сорбированную серым веществом мозга кролика иммунную сыворотку морской свинки к белому веществу головного мозга кролика, выявляющую данный антиген в концентра- 6 —. 60 ции не менее 0,2204 мг/мл. Последнюю используют для получения преципитата из экстракта белого вещества мозга кролика. Им осуществляют начальную иммунизацию основного жи" 65 вотного-продуцента. Через lu дней у животного-продуцента забирают 3 мп крови, выделяют сыворотку, смешивают ее в равном объеме с гомогенатом серого вещества. мозга кролика, инкубируют 2 ч при 37оС и 18 ч выдерживают при +4 С, центрифугируют, собирают супернатант. К супернатанту добавляют водно-солевой экстракт белого вещества мозга кролика, вышеописанным способом инкубируют и после
20 минутного центрифугирования при 5000 об/мин "отделяют сформировавшийся преципитат, который используют для реиммуниэации того же самого животного-продуцента. Через каждые
10 дней описанную .процедуру повторяют
После пятикратной реиммунизации животное обескровливается. Целевой продукт (сыворотка к белому веществу мозга кролика ) в реакции двойной иммунодиффузии выявляет один компонент в экстракте белого вещества мозга кролика и не реагирует с се рым веществом. В непрямом иммунолюминесцентном методе полученная сыворотка взаимодействует с глиальными ! элементами подкорковых структур, но не связывается с нервными клетками.
Сыворотка морской свинки, иммунизированной по предлагаемой схеме, выявляет специфический компонент белого вещества мозга кролика в концентрации 0,0072 мг/мл (по белку ), т.е. ее специфическая активность более чем в 30 раз выше, чем у сыворотки, получаемой ранее описанными методами.
Пример 2. Используя общепринятую схему иммунизации, получают сыворотку к комерческому препарату
Ви-антигена брюшнотифозных бактерий.
При этом, после пятикратной реиммуниэации получают сыворотку с титром
1/320 в реакции пассивной гемагглюти-. нации (РПГА). Следует отметить, что в динамике иммунного ответа титр
1/320 был достигнут уже после второй иммунизации животного-продуцента, а последующие введения антигена не дали дальнейшего повышения титра. В реакции двойной иммунодиффузии укаэанная сыворотка взаимодействовала с исходным антигенным материалом, образуя две линии преципитации. Одна из них идентифицировалась с Ви-антигеном, другая с О-антигеном брюшнотифозных бактерий. На тот же препарат
Ви-антигена получают сыворотку по предлагаемому способу, т.е. пятикратную реиммунизацию животного-продуцента осуществляют специфическим преципи татом, образовавшимся при добавлении
Ви-антигена к взятой от животногопродуцента его же собственной иммунной сыворотки, предварительно сорбированный О-антигеном брюшнотифоэных бактерий. В результате пятикратной реиммунизации животного получают
1018643
Составитель В. Дроздов .
Редактор Ан. Шандор Техред R.Харитончик Еорректор М. Шарощи
Заказ. 3575/3 Тираж 713 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, X-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
° сыворотку к Ви-антигену брюшнотифозных бактерий с титром 1/1280 (в РПГА ), не выявлявшую О-антиген в реакции иммунодиффузии.
Использование предлагаемого изобретения позволит повысить специфическую активность диагностических сывороток в процессе их производства.
