Способ получения иммунной сыворотки к вирусу клещевого энцефалита

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУННОЙ СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА , включающий многократное введение животным-продуцентам вируса с последующим вьщелением сыворотки, отличающийся тем, что, с целью повышения активности и специфичности .сыворотки, иммунизацию осуществляют подсадкой на животных зараженных вирусом голодных самок иксодовых клещей.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

%ЮЛИИ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

Н ABTOPCXOIVIV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3311097/28-13 (22) 21.04.81 (46) 30.10.84..Бюл. У - 40 (72) Н.П.Мишаева, В.И. Вотяков и А.Б.Тарасенко (71) Белорусский ордена Трудового

Красного Знамени научно исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (53) 615.373.3(088.8) (56) 1. Патент Франции Р 2145376, кл. А 61 К 23/00, 1974.

2. Шубладзе А.К., Гайдамович С.Я.

Краткий курс практической вирусологии. M., Медгиз, 1954, с. 182 (прототип).,„SU „„974651 (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУННОЙ

СЫВОРОТКИ К ВИРУСУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА, включающий многократное введение животным-продуцентам вируса с последующим выделением сыворотки, отличающийся тем, что, с целью повышения активности и специфичности сыворотки, иммунизацию осуществляют подсадкой на животных зараженных вирусом голодных самок иксодовых клещей.

974651

1

Изобретение относится к области иммунологии, а именно получению

t иммунных сывороток для серологических анализов и лечебно«профилактических целей. 5

Известен способ получения иммунной сыворотки путем многократного введения животным клещевого антигена 513.

Наиболее близким к изобретению является способ получения иммунной 10 сыворотки к вирусу клещевого энцефалита, включающий многократное введение животным-продуцентам вируса с последующим выделением сыворотки $2).

l5

Однако известные способы не поз-. воляют получить иммунную сыворотку с высокой активностью и специфично. стью..

Целью изобретения является повы- 20 шение активности и специфичности.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения иммунной сыворотки к вирусу энцефалита, включающего многократное. введе- 25 ние животным-продуцентам вируса с последующим выделением сыворотки, . иммунизацию осуществляют подсадкой на животных зараженных вирусом голодных самок иксодовых клещей.

Иммунизацию проводят следующим образом.

На выстриженную спину животного подсаживают зараженных клещей в приклеенный мешочек. Мешочек завязывают,З5 животное сажают в бак стоящий над кюветой с водой. Спустя 7-8 дней

) напитавшихся клещей снимают, дают животному отдых 10-14- дней, после чего берут 2 мл крови для контроль- 40 ного определения количества антител в серологических реакциях, например в .М реакциибиологической нейтрализации.

Если титры антител недостаточно высокие, посадку зараженных клещей повторя-45 ют 1-2 раза. После получения высоких титров антител в сыворотке у животных частично или полностью забирают кровь, помещают на 1 ч при 37 С, затем о на 16-18 ч при 4 С, сыворотку после о центрифугирования 20 мин при

2500 об/мин отсасывают, разливают по ампулам и хранят в холодильнике до момента исследования

Пример 1. На двух морских свинок подсаживают по tO самок клещей Dermacentor andersoni с титром вируса 4,5 lg Les /0,03 мл. Через

7 дней напитавшйхся клещей снимают, животному дают отдых 10 дней и снова

1подсаживают голодных самок с таким же содержанием вируса. После насыщения этой группы клещей животных выдерживают 2 недели и обескровливают. Для контроля морских свинок иммунизируют общеизвестным способом.

Сыворотку из опытных и контрольных животных проверяют в реакции нейтрализации. Титр вируса, йспользованного в реакции, составлял 7,25

1g LD50 . Индекс нейтрализации cblBOротки, полученной по предлагаемому способу, — 100000.

Индекс нейтрализации сыворотки, полученной по общеизвестному способу, - 2773.

Пример 2. На двух морских свинок подсаживают по 10 голодных самок клещей Ixodes ricinus с титром вируса 5,5 1g Ц)5 /0,03 мл.

)Иммунизацию животных проводят двукратным подсаживанием клещей с интервалом в .12 дней между. подсадками. Контролем служат 2 морские свинки, иммунизированные по известному способу. После окончания иммунизации животных выдерживают 2 недели, после чего забирают кровь и исследуют сыворотку в реакции нейтрализации. В первом и втором примерах титр вируса, использованного в реакции, составил 7,25 1д L25o

Индекс нейтрализации сыворотки, полу/ ченной по предлагаемому способу—

113500, а полученной по известному способу — 2415.

Пример 3. На трех кроликов подсадили по 25 самок голодных клещей

Dermacentor andersoni с титром вируса

6,3 lg | D5 . Затем подсадку партий зараженных клещей повторили еще

2 раза с интервалом между подсадками соответственно 15 и 30 дней Данные по исследованию сыворотки, полученной по предлагаемому способу, по сравнению с результатами исследования сыворотки в контроле представлены в таблице.

974651

Сравнительные результаты известного и предложенного способов

Логарифмы индекса нейтрализации

Число животных в опыте

Индекс нейтрализации

Способ

Известный

2,26

182,8

Предлагаемый

17540

4,24

Редактор Л. Утехина Техред Т.Дубинчак

Корректор А. Ференц

Заказ 7093/3 Тираж 687, Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Как видно иэ приведенных данных титры антител к вирусу клещевого энцефалита в сыворотках, полученных при неоднократном инфицировании кормлением на животных иксодовых клею ей, достоверно выше, чем при применении известного способа (P (0,01}.

Применение сыворотки для серологических анализов.

Иммунная сыворотка, полученная по схеме, указанной в примере 1, была использована для идентификации вирусного агента, вьщеленного из яйцекладок клещей. Титрованием на белых мышах массой 5-6 г было установлено, что титр вьщеленного из яйцекладок агента бып 3,4 1g 1,Р /0,03 мл.

Агент был исследован в реакции нейт-; рализации с вышеуказанной сывороткой по общепринятой методике. В . контроле использовали сыворотку от интактных.морских свинок. Результаты реакции нейтрализации показали, что иммунная сыворотка полностью нейтрализовала действие вирусного

43 агента. Все белые мыши в опыте выжили. В контроле, где применялась сыворотка интактных зверьков, все животные погибли. Таким образом, с помощью иммунной сыворотки, полученной по предлагаемому способу, 45 было показано, что выделенный агент

I принадлежит к группе клещевого энцефалита.

Использование иммунной сыворотки в профилактических целях.

Сыворотку получали, как указано в примере 3. Затем ее использовали в эксперименте для предохранения лабораторных животных от трансмнссионного заражения вирусом клещевого энцефалита. В этой целью группе из

10 белых мышей ввели подкожно по 1 мл иммунной сыворотки. В контроле 8 мышам ввели по 1 мл неиммунной сыворотки. На опытных и контрольных животных посадили по 2 зараженных клеща с содержанием вируса 3,91 1я LD5o /

/0,03 мл. В опыте выжило 80+12,64Х мышей, в контроле — 25 + 15,31Х. Различия статистически достоверны (P <0,01) .

Предложенный способ повволяет получить иммунную сыворотку с высокими титрами антител, титры антител в 1001000 раз выше, чем при получении известным способом, при этом иммунные сыворотки с высоким титром антител можно получить от реэистентных к вирусу клещевого энцефалита животных, например кроликов. Индекс нейтрализации сыворотки, полученной по предлагаемому способу от кроликов, равен 17 40, а полученной по общеизвестному способу — 182,8.