Способ определения рецессивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЦЕССИВНОГО ГЕНА ПИГМЕНТАЦИИ У ЖИВОТНЫХ С БЕЛОЙ ШЕРСТЬЮ путем измерения изменений ее характеристик после облучения ультрафиолетовыми лучами, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и быстроты способа, в качестве измеряемой характеристики используют интенсивность люминесценции пробы шерсти.

(19) (11) 3(51) G 0 1 N 3 3 4 8

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОтНРИТИй (21) 3415123/30-15 (22) 30.03.82 (46) 23.07.83. Бюл. Р 27 (72) Э.Б. Бсеволодов, И.Ф. Латыпов, Ю.Ф. Мартынов и К.М. Разознаев (71) Институт экспериментальной биологии АН Казахской ССР (53) 575. 113 (088. 8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР, Р 681373. кл. G 01 N 33/48, 1979. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЦЕССИВНОГО ГЕНА ПИГМЕНТАЦИИ У ЖИБОТНКХ С

БЕЛОЙ ШЕРСТЬЮ путем измерения изменений ее характеристик после облучения ультрафиолетовыми лучами, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности и быстроты способа, в качестве измеряемой характеристики используют интенсивность люминесценции пробы шерсти.

1030726

Изобретение относится к селекции ,сельскохозяйственных животных, преимущественно овец, и может быть использовано для проверки отбираемых для племенного использования животных на гомозиготность по белой масти и для отбора из стада гомозиготных или гетерозиготных особей для проведения генетических экспериментов.

Известен способ определения рецес- о сивного гена пигментации шерсти у животных с белой шерстью, основанный на изучении изменения сигнала электронного парамагнитного резонанса после ультрафиолетового облучения образ-15 цов шерсти (1).

Недостатком этого метода является установление присутствия гена у данной особи по результатам корреляционного анализа, т.е. по результа- 7р там обязательного исследования образцов шерсти от (как минимум) нескольких десятков животных.

Целью изобретения является повышение точности и быстроты способа.

В способе определения рецессинного гена пигментации у животных с белой шерстью путем измерения изменений ее характеристик после облучения ультрафиолетовыми лучами в качестве измеряемой характеристики используют интенсивность люминесценции пробы шерсти.

Пример. Для осуществления предлагаемого способа можно испольэовать в качестве флюориметра, например, люминесцентный микроскоп МЛ-2 с микрофотометрической насадкой ФМЭЛ1у4.2 (н состав которой входит фотоэлектронный умножитель ФЭУ-39А, соединенный с электрометрическим уси- 40 лителем у5-7), а в качестве ультрафиолетового облучателя — терапевтическую установку OPK-21 со ртутнокварцевой лампой высокого давления

IIPT-375. Образцы состриженной весной 45 шерсти из нижней защищенной сохранившимся жиронотом части штапеля моют н трех сменах ксилола, высушивают при комнатных условиях, нарезают ножникороткие QTpeBKH длиной оКо 50 ло 0 5 мм, помещают в дистиллированную воду, налитую на чистое предметное стекло, и, по возможности, равномерно распределяют на предметном стекле. Препарат хранят в темноте или при слабом рассеянном освещении до полного высыхания в течение нескольких часов. Далее препарат устанавливают на столик люминесцентного микроскопа, предварительно отьюстиро" ванного для наблюдения волос в свете 6О их люминесценции при освещении сверху через объектив светом ртутной лам. пы сверхвысокого давления ДРК-120, пропущенным через светофильтр УФС3(5)(зона пропускания 300-400 нм).Вы Я бор чувствительности прибора диафраг-. мы осуществляется с таким расчетом, чтобы темновой ток ФЭУ не превышал

10-20% длины шкалы гальнанометра усилителя у5-7,а помещение на столик микроскопа эталона яркости люминесценции — уранового стекла ЖС-19 толщиной 1,5 мм,при использовании зонда

0,1 мм насадки ФМЭЛ-1У4.2 при объек тине 40х и запирающем светофильтре

ЖС-3(2) с зоной пропускания больше

400 нм вызывает дополнительное отклонение стрелки гальнанометра еще на 1/3 шкалы. Для измерения яркостилюминесценции волос устанавливается зонд 0,5 мм. При этих условиях диаметры наблюдаемых в окуляр изображений волос оказываются немного большим, чем диаметр иэображения зонда.

Перемещая предметный столик микроскопа, последонательно устанавливают изображения 100 волоскон так, что центр зонда оказывается на продольной оси.волоса, и для каждого нолоска регистрируют показания гальванометра, соответствующие яркости его люминесценции. Затем стекло с волосками подвергают облучению лампой

ДРТ-375 (лучистый поток при длине волны 240-320 нм равен 30 Вт) с расстояния 0,5 м в течение 1 ч, после чего вновь наливают на препарат дистиллированную воду и после высушивания стекла с волосками в темноте или на рассеянном свету в течение несколь ких часов. повторяют процедуру измерения яркости люминесценции 100 волосков, Далее для 100 волосков вычисляют среднюю яркость по (3 ) и после (3 ф ) облучения лампой ДРТ-375 и разность средних яркостей выражают в процентах исходной яркости

3 а-Э

h3"- — - --- 100% °

7q

На чертеже представлен график осуществления способа.

Животные, образцы шерсти которых имеют ЬЗ больше 29%, являются гомоэиготнымй по доминантной белой масти, т.е. лишены рецессивного гека пигмен-. тации шерсти, а образцы с b.Ç меньше

21% принадлежат гетерозиготам, т.е. животным, несущим рецессивный ген пиг ментации. В силу стохастических флюктуаций в редких случаях возможно получение значений g.Ç меньше 30% и больше 21%. В этом случае необходимо произвести повторные измерения З1 и З ф на новом препарате шерсти от того же животного и взять среднее значение прежнего и нового значения ь.), которое неизменно оказывается или больше или равно 30% или меньше 21%.

Преимуществом предлаГаемого сПособа является возможность определить наличие у данного животного рецессивного гена пигментации шерсти, ограничившись исследованием шерсти только

1030726

Составитель A. Макаров

Техред A.Ач !корректор О. Билак

Редактор Н. Лазаренко

Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5203/45

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 этого животного без исследования многих десятков других. животных, как этого требует существенный способ, основанный на ЭПР-спетрометрии образцов шерсти с последующим корреляционным .анализом. Это существенно, когда воз- 5 никаЕт необходимость исследовать конкретное животноеунамеченное для широкого генетического использования, на наличие рецессивного гена пигментации шерсти. !О

В этом случае предлагаемый способ снижает .необходимость в трудовых затратах на сбор шерсти от многих десятков особей, расходы времени и ма- !5 териалов и взвешивание большого числа образцов шерсти, необходимых для проведения корреляционного анализа, н потребность в самом проведении десятков записей ЭПР-сигналов и их корреляционном анализе. Процедура приготовления препарата шерсти для флюориметрического исследования не требует такой медленной процедуры, как взвешивание образцов на аналитических весах, без которого нельзя обойтись при ЭПР-спектрометрическом способе определения рецессивного. гена. Время измерения яркости люминесценции одной пробы шерсти составляет 30 мин. Эа три рабочих дня квалифицированный лаборант может исследовать 10 образцов с учетом необходимости двухкратного флюориметрирова ния образца, мытья, смачивания, сушки шерсти и настройки прибора по эта"лону яркости.