Способ качественного определения цикутотоксина

 

СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИКУТОТОКСИНА путем обработки анализируемой пробы химическим ipeareHTOM отличающи йс я тем, что, с целью повышения чувствительности , специфичности и упрощения способа, анализируемую пробу предварительно обрабатывают 0,05-0,15 н. раствором соляной кислоты, в качестве химического реагента используют 1,5-2,5%-ный раствор сульфата церия (IV) при объемном соотношении анализируемой пробы раствора сульфата церия (IV), равном 2-1:1, с последующим определением полученных кристаллов микрокристаллоскопическим способом. .§

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

3(59 G 01 N 31/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И О(НРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВторСноч СвидетельСТВУ (21) 3448879/23-04 (22) 02.06.82 (46) 15.10.83. Бюл. Ю 38 (72) М.М.Дмитриченко (71) Иркутский государственный медицинский институт (53) 543..24.087(088.8) (56) 1. Лемберский Я.Х., Валаха" нов A.Ä. Химические реакции идентификации цикутотоксина. — . Фармация "

9 6, 1944, с.25-27.

2. Об идентификации веха ядовитого при судебно-химической экспертизе. Информационное письмо М 71/О.М., 16.01.81, с.4-5 (прототип).

ÄÄSUÄÄ1 048405 А (54) (57) СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИКУТОТОКСИНА путем обработки анализируемой пробы химическим реагентом отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, специфичности и упрощения способа, анализируемую пробу предварительно обрабатывают 0,05-0,15 н. раствором соляной кислоты, в качестве химического реагента используют

1,5-2,5Ъ-ный раствор сульфата церия. (IV) при объемном соотношении анализируемой пробы раствора сульфата церия (IV), равном 2-1:1, с после» дующим определением полученных кристаллов микрокристаллоскопическим способом. е

1048405

40

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к токсико-химическому анализу, и может быть использовано в бюро судебномедицинской экспертизы для идентификации цикутотоксина, относящегося к классу полиинов.

Известны способы качественного определения цикутотоксина путем взаимодействия его с химическим реагентом, таким как реэорцин, пиро- !О катехин или пирогаллол Ll 3.

Однако данные реакции не обладают чувстнительностью и специфичностью, так как резорцин, пирокатехин и пирогаллол дают окрашенные сое- )5 динения с любим окислителем и даже кислородом воздуха, причем окраска получаемых соединений не устойчива.

Наиболее близким к предлагаемому янляется способ определения цикутотоксина хроматоспектрофотометрическим путем. Предварительно измельченные растительные остатки обрабатывают диэтилоным эфиро>и, фильтруют, упаринают и полученный остаток растворяют н этаноле. Этанольный . раствор хроматографируют н тонком слое ссрбента. Цикутотоксин обнаруживают, обрабатывая хроматограмму серной кислотой или раствором щелочи (109.-ный едкий кали в 50%-ном этиловом спирте с последующим нагреванием н течение 2-3 мин при

100-105 С или ныдер>кинанием хроматограммы в течение 2-3 мин в парах иода. Цикутотоксин проявляется н З5 ниде темно-коричневого пятна. другие полиины Веха ядовитого при данных условиях обработки приобретают коричневую окраску (2.!.

Однако известный способ мало специфичен, так как обнаружение цикутотоксина проводят после проявления хроматограммы по появлению целого ряда пятен одинаковой коричневой окраски. Цикутотоксин в предло- 45 женной системе растворителей — диэтиловый эфир:петролейный эфир — имеет наиболее низкое значение Rf, что делает его определение неконкретным. Кроме того, укаэанный способ .обладает довольно низкой чувствительностью, что делает его малопригодным для проведения токсико-химического анализа. Открынаемый минимум цикутотоксина по известному способу составляет всего 50 мкг. 55

Цель изобретения — повышение чувствительности, специфичности и упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу качест- 60 венного определения цикутотоксина анализируемую пробу обрабатывают

0,05-0,15 н. раствором соляной кислоты, в качестве химического реагента используют 1,5-2,5Ъ-ный раствор сульфата церия (IV) при объемном соотношении анализируемой пробы и раствора сульфата церия (TV), равным

2-1:1, с последующим определением полученных кристаллов микрокристаллоскопическим способом.

1!редварительная обработка анализируемой пробы раствором соляной кислоты и затем раствором сульфата церия (IV) позволяет провести специфическое и чувствительное качественное определение цикутотоксина в исследуемом образце. Такое определение достигается тем, что в результате осуществления способа образуется продукт реакции — кристаллы характерной формы сферолиты из призм и игольчатых кристаллов, форма которых наблюдается под микроскопом.

Проведение микрокристаллоскопической реакции на цикутотоксин обеспечивает воэможность идентификации

era н смеси с другими веществами.

Установлено, что другие яды, такие как нуредал, морфин, стрихнин и кокаин, не мешают образонанию кристаллов характерной формы для цикутотоксина.

Предварительная обработка анализируемой пробы 0,05-0,!.5 н. раствором соляной кислоты необходима для реакции взаимодействия химического реагента сульфата церия (IV) с цикутотоксином. Отсутстние предварительной обработки анализируемой пробы 0,, 05-0,15 н. раствором соляной кислоты вызовет лишь крис таллизацию химического реагента, следонательно идентификация цикутотоксина будет ненозможной.

Использование 0,05-0,15 н.раствора соляной кислоты является достаточным для последующего получения кристаллов — продукта взаимодействия цикутотоксина с сульфатом церия (1У)

Использование большей концентрации соляной кислоты является нецелесообразным, так как возможен гидролиэ цикутотоксина и кристаллы характерной формы не образуются.

Использование в качестве химического реагента 1,5-2,5Ъ-ного раст-, вора сульфата церия (IV) позволяет получить его устойчивое соединение с цикутотоксином при характерной форме кристаллон.

Использование 1,5-2,5Ъ-ного раствора сульфата церия (IV) является оптимальным для образования кристаллов, так как меньшая концентрация данного химического реагента значительно удлиняет время кристаллизации (до 10 ч), большая концентрация приводит к- образованию мелких кристаллов с менее характерной формой при загрязнении поля зрения в микроскопе кристаллами самого

1048405

Составитель В.Шкилькова

Редактор В.Ковтун Техред B..даущкорей Корректор A. Повх

Заказ 7924/51 Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 химического реагента — сульфата церия (IV) .

Оптимальный вариант кристаллизации достигается при соотношении реагентов 2:1 или 1:1.

Увеличение объемной части химического реагента в указанном выше. соотношении мешает качественному определению цикутотоксина вследствие

его параллельной кристаллизации.

В результате осуществления предлагаемого способа получаются кристаллы характерной формы — сферолиты иэ призм и игольчатых кристаллов, бесцветные, больших размеров.

Чувствительность данного способа характеризуется открываемым минимумом, который равен 0,4 мкг при предельном разбавлении 1:20000. В известном же способе отКрываемый минимум равен 50 мкг, а предельное разбавление 1:200.

Пример .1. Навеску 0,10 r цикутотоксина растворяют н мерной колбе на 100 мл н 963-ном зтиловом спирте и доводят объем до метки..

Один миллиметр полученного исходного раствора переносят в мерную колбу на 25 мл и доводят объем до метки 96%-ньм зтилоным спиртом.

Одну каплю полученного разбанленного раствора цикутотоксина наносят на предметное стекло и добавляют одну каплю 0,05 н. растнора соляной кислоты. Затем к обработанной пробе добавляют одну каплю 1,5%-ного раствора сульфата церия (IV). Результат проведенной реакции качественного определения цикутотоксина наблюдают через 3 ч по характерной форме кристаллов — сферолиты иэ призм и игольчатйх кристаллов при наличии мелких кристаллов химического реагента — сульфата церия (IV), отдельные прямоугольники или бесформенные сростки иэ них.

Пример 2. На предметное стекло помещают 2 капли исследуемого раствора цикутотоксина,одну каплю соляной кислоты 0,10 н.концентрации и одну каплю 2,0%-ного раствора суль;фата церия (IV). Наблюдают орму кристаллон под микроскопом через 3 ч.

Пример 3. На предметное

5 стекло помещают одну каплю исследуемого раствора цикутотоксина, одну каплю 0,15 н. раствора соляной кислоты и одну каплю 2,5%-ного раство- ра сульфата церия (1V) . Характерную форму кристаллов наблюдают под микроскопом через 2 ч.

Во всех случаях качественного определения цикутотоксина по предлагаемому способу образуются крис15 таллы характерной формы — сферолиI ты иэ призм и игольчатых кристаллов, бесцветные, больших размеров.

Более четкая кристаллизация идет при соотношении 2,0%-ного раствора сульфата церия (IY) и раство20 ра цикутотоксина 1:1 и соляной кислоты 0,10 н. концентрации.

Таким образом, предлагаемый способ обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Открываемый

25 минимум цикутотоксина по предлагаемому способу составляет 0,4 мкг, п)ри предельном разбавлении 1:20000.

В известном же способе открываемый минимум не менее 50 мкг при пре3р дельном разбавлении 1:200.

Высокая специфичность способа обеспечивается подбором условий и проведением микрокристаллоскопической реакции. Так, образование сфе35 ролитон из призм и игольчатых кристаллов при взаимодействии с раствором сульфата церия (IV) характерно только для одного вещества — цикутотоксина, в то время как изнестный

4() способ дает не специфичные скрашивания с любым органичЬским соедиНени ем.

Способ значительно проще известного, общедоступен и может быть при4 менен н любОЙ аналитическОЙ лабОра торин. Способ не требует специального оборудования и подготовки специалистов, используемые реактивы бшедоступны.