Штамм @ @ ифрж 2-продуцент биологически активных веществ женьшеня и способ получения биологически активных веществ

 

Штамм Рапах ginseng ИФРЖ2 1 (хранится в коллекции культур растительных клеток Института физиологии растений им. К.А.Тимирязева АН СССР) продуцент биологически активных ве- , ществ женьшеня. 2. Способ получения биологически активных веществ путем выращивания штамма - продуцента на питательной среде, содержащей микрои макросоли, -стимуляторы роста, сахар и агарагар с последующим вьщелением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения биологической ак ивности целевого продукта в качертве продуцента используют штамм Рапах ginseng ИФРЖ2, и выращивание ведут на среде, содержащей, МГ/Л ВОДЫ

„SU„„1058281

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СоаелистИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

3 С 12 Н 5/00.Ф .

> )ф

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /,, 3

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТЗЕКИЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЭОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ.стимуляторы роста, сахар и агарагар с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения биологической активности целевого продукта в качестве продуцента используют штамм Panax ginseng ИФРЖ2,и выращивание ведут на среде, содержащей, мг/л воды:

1 145-1 850

1490-2100

420-500

350-400

150-210

4,2-8,0

15,6-26,7

6,0-10,3

0,53-0,90

0,25-0,30

0,03-0,075

0,03-0,075

25,0-30,0

26,1-40,1

0,40-0,80

2,5.104 - 3,5 ° 104

7,103

1,0-3,0 (21) 3393566/28-13

-(22) 04.01.82 (46) 07. 10. 84. Бюл. У 37 (72) P. Г. Бутенко, Н.А. Мясоедов, З.Б.Камина и Л.И.Слепян (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева и Ленинградский химико-фармацевтический институт (53) 578.085 ° 23(088.8) (56) Патент ФРГ М 2143946, кл. А 61 К 35/78, 1978.

2. Писецкая Н.Ф. К вопросу подбора питательной среды для культуры ткани женьшеня,, "Растительные ресурсы", У 6, в. 4, 1970, 516-520. (54) llITANM PANAX GINSENG.ÈÔÐÆ2-ПРОДУЦЕНТ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

ЖЕНЬШЕНЯ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ, (57) Штамм Panax ginseng ИФРЖ2 Ф 1 (хранится в коллекции культур растительных клеток Института физиологии растений им. К.А.Тимирязева АН СССР)— продуцент биологически активных веществ женьшеня.

2. Способ получения биологически активных веществ путем выращивания штамма — продуцента на питательной среде, содержащей микро- и макросоли, НН 4НО3

КАРОЯ

СаС1

MgSO4 7Н,О

КН РО+

НЗВВ03

Мп$0+ 4Н О

Еп$04. 7Н 0

КЭ

На Ио04 2Н О

Сп104 5Н g5

СоС1 2Н О

Ре$04 . 7Н О

Na>, ЭДТА.

Тиаминбромид (в„)

Сахар

Агар-агар

g-Нафтилуксусная кислота

1058281

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и может быть использовано в косметической . промышленности для приготовле ния кремов, лосьонов, а также в сельском хозяйстве.

Известен способ получения солонинсодержащих биологически активных препаратов при культивировании женьшеня на питательной среде, сложного состава (1 ).

Известен штамм Panax ginseng H4PR1продуцент биологически активных веществ женьшеня.

Известен также способ получения биологически активных веществ путем культивирования штамма-продуцента на питательной среде, содержащей, мг/л воды:

m4NO 1650 кю 1900

CaCl г 2Н О 440

MgSOq 7Н О 370

KH PO 170

Н3 803 6,20

MnS04 - 4Н О 22,80

7п$04 7Н О 8,60

К3 0,83

NaгМоО4.. 2Н10 0.25

Сп$04 5НгО 0,025

Ге$04 7Н О 27,80

Na> ЭДТА 37,30 (натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты), 35

Тиаминбромид (в., ) 09 40

Q- Йаф тилук сус ная кислота (НУК) 2

Кинетин 1 40

Инозит 80

Гидролиэат каэеина 500

4.

Сахароза 3 ° 10

Агар-агар 7 10 12 j.

g$

Однако известные технические решения не обеспечивают высокой биологической активности целевого продукта.

Целью изобретения является повышение биологической активности целевого продукта.

Указанная цепь достигается тем, что при осуществлении способа получения биологически активных,.веществ, 55 предусматривающем выращивание штаммапродуцента на питательной среде, со-держащей микро- и макросоли, стимуляторы роста, сахар и агар-агар, с последующим выделением целевого продукта.

Отличием является то, что в качестве продуцента используют штамм Раnax ginseng ИФРЖ2, а выращивание ведут на среде, содержащей, мг/л воды:.

NH4NO 1145-1850

4 я

KN0 1490-2 100

Сас1 420-500

MgSO+. 7НгО 350-400

КНгРО4 150-210

Н,БО 4,2-8,0

Мп$0 - 4Н О 15,6-26,7 п$04

К9 0,53-0,90

ХаМо04 ° 2Н О 0,25-0,30

Сы$0 5НгО 0,03-0,075

Со С1г 2Н г0 0,03 0,075

Fe$04 7Н О 25,0-30,0

Ма г ЭДТА, 26, 1-40, 1

Тиаминбромид (Ä) 0,40-0,80

Сахар 2,5 10 - 3,5 104

Агар-агар 6 10э — 7 .10

d.-Нафтилуксусная кислота 1,0 — 3,0

Для осуществления способа предложен штамм Panax ginseng ИФРЖ2 (коллекционный номер 1) — продуцент биологически активных веществ, которые связаны между, собой единым изобретательским замыслом.

Штамм Рапах ginseng ИФРЖ2 получен в Институте физиологии растений им. К.А.Тимирязева и хранится в коллекции культур растительных клеток данного Инстиута под номером 1.

Штамм характеризуется следующими признаками.

Штамм представляет собой кремовобелую, выхлую, оводненную клеточную массу со специфическим запахом и вкусом. Популяция состоит на 60-90% из клеток меристематического типа (с размером от 252 до 92,4 мкм) и на

2-10Х из клеток паренхимного типа

{с размером от 75,6 до 201,6 мкм).

Лигнификация составляет до 20Х с образованием проводящих элементов.

Ткань, растущая на среде, иэ состава которой исключен один из регуляторов роста — кинетин, гидролизат казеина и инозит, обладает хорошей интенсивностью роста. Ростовой индекс составляет 19,5-16,5, содержание сухого вещества 3,5-4,0Х. Цикл выращивания характеризуется S-образной кривой с лаг-фазой до 3-5 сут, фазой экспонен1058281

0,15-0,30

0,03-0;075

0,03-0,075

25,0-30,0

26,1-40,1

Таблица 1

Выход биомассы

Сырая масса

М+тп, r

Вариант среды Масса исходного инокулята г

Штамм

14,15+0,68

18,09 .0,53

Известная

ИФРЖ1

ИФРЖ2

Предлагаемая

3 циального роста (5-10 сут), линейной фахой (10-33 сут), фазой замедления роста (32-35 сут) н стационарной фазой (35-37 сут). Кривая митотической активности имеет двувершинный характер с максимумом в первую и третью недели. Среднее число хромосом

75+7,1 с вариацией от 41 до 136.

Использование штамма ИФРЖ2 в качестве продуцента биологически актив- 1ð ных веществ женьшеня н способ получения биологически активных веществ илнюстрируются следующим примером.

Пример 1. В колбы Эрленмейера емкостью 250 мл разливают по 50 мл 15 предлагаемой питательной среды, следующего состава, мг/л воды:

NH NO 1145-1850 кю 1490-2100

СаС1 . 2Н О 420-500

МГЯОФ 7Н20 350-400

КН З Р04 1 5 0-2 1 0

3 3

4,2-8, О

MnSO< 4Н О 15,6-26,7

ZnSO< 7Н О 6,0-10,3 25

KI 0,53-0, 90

По истечение цикла выращивания биомассу весом 18,09 r отделяют от 45 агара и высушивают в сушильном шкафу при температуре 60 С. Высу|пенную ткань измельчают до размера частиц

0,05-0,1 мм и используют в качестве целевого продукта. 50

Получение биологически активных веществ.

В перколятор (1,0 л) помещают

100 r измельченной сухой биомассы штамма ИЖФР2, заливают 500 мл 35Х- 55 ного этанола до образования "зеркаль- ного слоя над сырьем" и оставляют на срок до 24 ч. По истечении укаа РоО 2Н зО

cuSO4 . 5Н20

СоС12 . 6Н О

FeSO4 7Н20

Na ЭДТЛ

Тиаминбромид (В ) 0,40-0,80

Сахар 2,5 10+ — 3,5 ° 104

Агар-агар 6 10 — 7 ° 1О (-Нафтилуксусная кислота 1,0 — 3,0 при рН = 5,8, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре

120 С в течение 15 мин. Затем в стерильных: условиях на поверхность агаризованной среды помещают 1 r ткани штамма Рапах ginseng ИФРЖ2.

Колбы с инокулятом инкубируют при температуре 26 С и относительной влажности воздуха 70Х. Цикл выращивания составляет 37 сут.

По истечении выращивания, выросшую биомассу отделяют от агара, взвешивают. Сравнительные данные по выходу биомассы приведены в табл. 1.. занного срока экстракт перкалируют со скоростью 5 мл/мин с одновременным поступлением на сырье 357-кого этанола с-такой же скоростью. Экстракцию продолжают до получения 1 л найстойки. Полученную настойку оставляют в течение 2 дней, фильтруют и используют по назначению в качестве целевого продукта.

Фармакологические испытания биологически активных веществ из штаммов ИФРЖ и ИФРЖ2 проводились на не" линейных ьыпах-самцах.

Результаты представлены в табл. 2.

1058281

Таблица 2

Сравнение биологической активности штаммов ИФРЖ1 и ИФРЖ2

Стимуляция, Ж

Доза, мп/20 г

Препарат из штамма

ИФРЖ1

ИФРЖ2

0,1

121,7

130,4

83,3

0,1

+ отношение времени бега (в мин.) контрольных и опытных животных X.

1 | условная стимулирующая единица действия, обеспечивающая повышение работоспособности на ЭЗЖ от 1 r сырья.

Редактор П. Горькова Техред Ж.Кастелевич Корректор А. Ильин, 1

Заказ 7029/1 . Тираж 521 Подписное, ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб.„ д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная, 4

Применение нового штамма-.продуцента ИФРЖ2 биологически активных веществ - панаксозидов женьшеня и способа получения панаксозидов позволяI ет повысить выход биологически активных веществ за счет повышения выхода биомасс1ы, уменьшить íà 39Х затраты по получению I кг сухой биомассы женьшеня по сравнению с известной средой и улучшить фармакологические свойства целевого продукI та.