Способ дифференциальной диагностики гемобластозов

 

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ путем исследования клеток крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, проводят реакцию розеткообразования лейкоцитов пациентов с тучными клет ками в соотношении

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 3(Я) A 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3210402/28-13 ,(22) 24.09.80 ,(46) 23.01.84. Бюл. М 3

1 (72) И. С. Никольский, В. A Мазуренко, 10.A. Гриневич, Л.П. Киндэеньский, О.Д. Черненко и В.В.Овсиенко (71) Киевский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови и Киевский научноисследовательский рентгено-радиоло гический и онкологический институт (53) 616.07 (088.8) (56) 1. Кассирский И.А., Алексеев Г.A. Клиническая гематология.

М., 1970, с. 110-130.

2. Кудыбайло P.В ° Лимфогранулематоз. М., 1971, с. 40-43, 58-59. (54) (57) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ

ДИАГНОСТИКИ ГЕМОБЛАСТОЗОВ путем исследования клеток крови, о т л ич а ю ш н и с я тем, что, с целью повышения точности способа, проводят реакцию розеткообразования лейкоцитов пациентов с тучными клетками в соотношении (50-100):1 соответственно, полученную смесь центрифугируют, осадок ресуспендируют, подсчитывают образовавшиеся розетки и при величине розеткообраэования 5,0-6,2% диагностируют лимфогранулематоэ, а при величине этого показателя 16,7-31,53 диагностируют лейкоэ.

1066100

Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике гемобластоэов.

Известен способ диагностики гемобластоэов, основанный на цитоморфологическом исследовании, позволяющем проводить количественную дифференцировку отдельных элементов гемограммы,миелограммы и констатировать степень зрелости клеток крови (:12 .

Недостатком способа является его невысокая точность.

Иэвестен также способ дифференциальной диагностики гемобластозов путем исследования клеток крови 21.

Однако известный способ также t5 не обладает высокой точностью.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу дифферен- р0 циальной диагностики гемобластозов путем исследования клеток в крови, проводят реакцию роэеткообразования лейкоцитов пациентов с тучными клетками в со тношении (50-100):1 25 соответственно,. полученную смесь центрифугируют, осадок ресуспендируют, подсчитывают образовавшиеся розетки и при величине розеткообраэования 5,0-6,2% диагностируют ,лимфогранулематоэ, а при величине этого показателя 16,7-31,5% диагностируют лейкоз.

Способ осуществляют следующим образом.

Из гепариэированной крови пациента в градиенте фиколла и верографина выделяют лимфоциты известным способом.

Тучные клетки получают путем промывания брюшной полости крыс

10 мл раствора гемоцелл с последующей очисткой суспензии клеток в градиенте фиколла и верографина.

Пробы, содержащие смесь.лейкоцитов и тучных клеток в соотношении (50-100):1 соответственно, центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин.

Образовавшийся осадок клеток ресуспендируют пастеровской пипеткой и в виде капли переносят на предметное стекло, покрытое тонким слоем 0,1% нейтрального красного.

Тучные клетки окрашивают при трехкратном пипетировании капли. Суспенэию вносят в гемоцитометр и подсчитывают количество розеток на 200 тучных клеток. Розеткой считают клеточную ассоциацию, включающую тучную клетку с присоединенными к ней тремя и более лейкоцитами. 60

И при величине розеткообразования 5,0-6,2% диагностируют лимфогранулематоз, а при величине этого показателя 16,7-31,5% диагностируют лейкоз. 65

Пример 1. У больного А берут кровь на исследование. В центрифужную пробирку наливают 2 мл смеси фиколла и верографина (плотность 1,077) и наслаивают на нее 2 мл гепаризированной крови больного. Полученную смесь центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин.

По окончании центрифугирования в интерфазе на границе плазмы крови и смеси фиколла с ферографином наблюдают образование белого кольца, содержащего преимущественно лимфоциты.

Клетки кольца отбирают пастеровской пипеткой и переносят в пробирку, где дважды отмывают раствором гемоцелл, ресуспендируют в этом растворе, подсчитывают в гемоцитометре и разводят до концентрации 10 /мл.

Тучные клетки получают следующим образом. Под гексеналовым внутримышечным наркозом крыс м .весом

150-200 r внутрибрюшинно вводят

10 мл подогретого до 37 С раствора/гемоцелл.

В течение 2 мин. делают массаж брюшной стенки, затем делают ее срединный разрез и кишечник крысы перекладывают в стеклянную воронку, помешенную в центрифужную пробирку.

Введенный в брюшную полость раствор гемоцелл, содержащий вымытые клетки перионеальной полости, собирают в пробирку, затем 5 мл этой взвеси клеток наслаивают в центрифужной пробирке на 2 мл смеси фиколла и центрифугируют 15 мин нри 250 об/мин, IIo окончании центрифугирования в гетерофазе собираются лимфоциты,а тучные клетки оседают на дно пробирки. Содержимое пробирки до самого ее дна отбрасывают, а тучные клетки, лежащие на дне пробирки,ресуспенди руют в растворе гемоцелл.и 2 раза им же отвывают.

Затем взвесь клеток в виде капли переносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, покрытого тонким слоем высохшего 0,1% нейтрального красного. !

Каплю 3 раза пипетируют пастеровской пипеткой. При этом нейтральный красный окрашивает тучные клетки,а лимфоциты, содержащиеся в виде небольшой примеси, остаются бесцветными.

Затем эту взвесь переносят в гемоцитометр, подсчитывают количество .тучных клетбк и разводят до концентрации 10 /мл.

В пробирку помещают 1 мп взвеси лейкоцитов больного лимфогра.нулематозом и 1 мл взвеси тучных клеток, содержимое перемешивают и центрифугируют 5 мин при 250 об/мин.

1068100

Составитель Н. Хрусталева

Техред Л.Пилипенко КоррЕктор Й.Зимокосов

Редактор A. Черных

Заказ .11351/3

Тираж 691 Подписное .

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная,4

Образовавшийся осадок клеток ресуспендируют паетеровской пипеткой и в виде капли переносят на покровное стекло, покрытое тонким слоем

0,1Ъ нейтрального красного. Вносят суспензию в гемоцитометр и подсчитывают количество образовавшихся розеток на 200 тучных клеток. При этом наблюдают величину розеткообразования равную 6,0%, что соответствует диагнозу лимфогранулематоз. 10

Пример 2. У больного Б берут кровь на исследование. В пробирку помешают взвеси лейкоцитов больного лейкозом и взвесь тучных клеток, полученные способом описанным . 15 в примере 1,. в соотношении 50:1 соответственно.

Пробы центрифугируют 5 мин. при

250 об/мин., осадок ресуспендируют и подсчитывают количество образо- . 20 вавшихся розеток на 200 тучных клеток. В данном случае наблюдают величину розеткообразования равную

ЗО,ОЪ, что соответствует диагнозу лейкоза.

Пример 3. Пробу, содержащую смесь лимфоцитов больного лейкозом и тучных клеток в соотношении 100:1 соответственно, центрифугируют 5 мин. при 250 об/мин., осадок ресуспендируют и подсчитывают количество образовавшихся розеток на 200 тучных клеток. При этом величина розеткообразования составила 16,7%, что соответствует диагнозу лейкоза.

Использование предлагаемого способа дифференциальной диагностики гемобластозов позволит повысить точность диагностики, способствовать развитию представлений о природе этих патогенетических процес;сов, что, позволит повысить эффективность лечения больных.