Среда для определения активности антибиотиков

 

СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ, содержащая источник азота, натрий фосфорнокислый двузамещенный, агар-агар и дистиллированную воду,о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения точности определения, она в качестве источника азота содержит аммоний уксуснокислый при следующем качественном соотношении компонентов, г/л: Аммоний уксуснокислый3 ,0-5,0 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 2,0-3,0 Агар-агар 15,0-20,0 i Дистиллированная водаДо 1 л СЛ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСИИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) З(5)) С 12 Q 1 04

1

Q P f}

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2,0-3 0

15,0-20,0

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (,21) 3507433/28-13 (22) 29. 10 ° 82 (46) 07,06,84, Бюл, Р 21 (72) Е,M,Áåðøòåéí, Н.Г.Васильева и M.С,Поляк (71) Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (531 615.779,90 (088.8) (56) 1, Государственная фармакопея

СССР, Х издание, 1968, с. 948.

2. Каталог сухих питательных сред, выпускаемых в СССР для медицинской бактериологии, Вып.1, М., 1980, с. 21-22 (прототип), (54) (57) СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ, содержащая источник азота, натрий фосфорнокислый двузамещенный, агар-агар и дистиллированную воду,о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения точности определения, она в качестве источника азота содержит аммоний уксуснокислый при следующем качественном соотношении компонентов, г/л:

Аммоний уксуснокислый 3,0-5,0

Натрий фосфорнокислый двузамещенный

Агар-агар

Дистиллированная вода До 1 л.109б?81

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается определения антибиотической активности °

Известна среда для определения активности антибиотиков, содержащая бульон Хоттингера, Na HP04,, агарагар )1j, Известна также среда для определения активности антибиотиков, содержащая панкреатический гидролиэат 10 кильки, хлористый натрий, натрий осАорнокислый двузамещенный, агар-агар и дистиллированную воду (2j .

Однако известные среды не обеспечивают высокой точности определе- 15 ния из-эа нестандартности источника азота, Цель изобретения — повышение точности определения.

Эта цель достигается тем, что пи- рц тательная среда для определения активности антибиотиков, содержащая источник азота, натрий фосфорнокислый двуэамещенный, агар"агар и дистиллированную воду, в Качестве источника азота содержит аммоний уксуснокислый: при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Аммоний уксуснокислый 3,0-5,0

Натрий фосфорнокис- ЗО лый двузамещенный 2,0-3,0

Агар-агар 15,0-20,0

Дистиллированная вода До 1 л

H p и м е р 1. Для определения биологической активности неомицина и стрептомицина питательную среду следующего состава, г/л: аммоний уксуснокислый 5, натрий фосфорно- 4Î кислый двуэамещенный 3, агар-агар 20, вода дистиллированная до 1 л, рН после стерилизации 7,8-8,0, расплавляют на водяной бане, охлаждают до

70 С и вносят 1% глюкозы и 2 ° 10 спор45

BacilEus subtiiis,ÀÒÑÑ бб33 на 1 мл среды. Засеянную питательную среду разливают по 10 мл (один слой) в стерильные чашки, Петри, После застывания питательной среды делают лунки и подсушивают чашки со средой при комнатной температуре 1 -20 мин, Далее лунки заполняют растворами контрольной (1 мкг/мл) и испытуемой концентрации антибиотиков в фосфатном буфере Р 4, Затем чашки помещают в термостат при 37 С. После 1820 ч инкубации замеряют диаметры зон задержки роста тест-микроба и рассчитывают активность испытуемого образца по предварительно построенной стандартной кривой с использованием следующих концентраций неомицина, мкг/мл: 0,5; 0,75, 1,0; 1,2 и 1,5 в фосфатном буфере Р 4, Аналогичным образом определяют активность стрептомицина.

Для построения стандартной кривой стрептомицина берут такие же концентрации, как и для неомицина. Контрольная концентрация неомицина и стрептомицина 1 мкг/мл в фосфатном буфере Р 4, Пример 2 ° Для определения биологической активности мономицина и канамицина используют среду следующего состава, r/ë; аммоний уксуснокислый 4, натрий фосфорнокислый двуэамещенный 2,5, агар-агар 18, вода дистиллированная до 1 л;рН после стерилизации 7,8 — 8,0. Условия проведения анализа те же, что в примере 1.

Для построения стандартной кривой мономицина и канамицина используют следующие концентрации этих антибиотиков, мкг/мл; 1,0, 1,5, 2,0; 3,0 и 4,0 в фосфатном буфере Р 4. Контрольная концентрация мономицина и канамицина 2 мкг/мл, Пример 3. Для определения биологической активности гентамицина, тобрамицина и амикацина используют питательную среду следующего состава, г/л: аммоний уксуснокислый 3; натрий фосфорнокислый двузамещенный

2, агар-агар 15, вода дистиллированная до 1 л; рН посде стерилизации

7,8-8,0. Условия проведения анализа те же, что в примере 1. Для построения стандартной кривой гентамицина, тобрамицина и амикацина используют следующие концентрации этих антибио» тиков мкг/мл: 0,5, 0,75; 1,0,1,2, 1,5 в фосфатном буфере Р 4. Контроль ная концентрация гентамицина, тобрамицина и амикацина 1 мкг/мл.

Сравнительные данные по воспроизводимости результатов и точности определения на примере определения биологической активности неомицина и стрептомицина представлены в таблице.

Использование изобретения позволяет снизить вариабелъность результатов анализа, что повышает точность определения, исключить иэ состава среды пищевое сырье, что удешевляет среду и упрощает способ ее приготовления, 1096281

Результаты определения биологической активности аминогликозидов

На среде по ГФ Х

На предлагаемой среде

На среде прототипа

9 па тии

Антибиотик

Число опрееРеэуль тат мкг/ лений

1 1,0 13 677,5 12,1 2,0 16 675,8 14,6 10,0 12 676,8 25,2

2 1,0 10 724 7 13,4 2,0 16 722,0 18,5 10,0 12 723,0 18,5

Стрептомицин

9 697,2 5,8 2,0 12 688,8 21,4 10,0 12 690,2 20,4

3 1,0

1 1,0 10 702,0 6,7 4,0 10 702,5 11,2 10,0 12 702,0 12,0

2 1,0 10 647,5 6,3 4,0 10 647,5 12,4 10,0 12 648,0 11 8

Неомицин

Составитель Г.Смирнова

Техред С.Легеза Корректор А Т««

Редактор Т,Портная

Заказ 3744/18 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород. ул, Проектная. 4 онроль ая оненраня тан ара

Число

onределений

Стан дарт ное отклонение

5Х

Контроль ная концен трация стандарта

Чис ло

onределений

Реэуль тат

Х мкг/

/мл

Стан арт ное отклонение

5Х

Контроль ная концен трация стандарта

Резуль тат

Х мкг/

/мл

Стан. дарт ное отклонение