Способ определения степени иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ИММУНОГЕННОСТИ АВИРУЛЕНТНЫХ ШТАМШВ ЧУМНОРО МИКРОБА путем подкожного лз; ВйЕН:.. заражения белых мьшей культурами испытуемого и вирулентного штаммов чумного микроба, отличаю щийс я тем, что, с целью ускорения способа, культуры испытуемого и вирулентного штаммов вводят совместнр, при этом культуру вирулентного штамма используют в дозе 10-10 Del и иммуногенность штаммов определяют по показателю LDуд , выраженному числом Del вирулентного штамма, при этом при LD50 равном 200 Del и выше - штаьм иммуногенн, при менее 200 Del и более 10 Del - штамм с ослабленной иммуногенностью, а i при LD равном 10 Del и меньше (Л штамм неиммуногенный.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (19) (И) (5D 4 С 12 N 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И 0THPblTPM (21) 3514669/28-13 (22) 24. 11.82 (46) 07. 11.86. Бюл. Р 41 (71) Иркутский государственный научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока ,(72) Г.П.Апарин н Т.И.Вершинина (53) 576.8.093.35(088.8) (56) Бургасов П.Н., Анисимова Т.И., Кузнецова О.P. и др. Основные критерии отбора вакуумных штаммов чум,ного микроба. Методические указания.

Саратов, 1976, с. 34 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ

ИМИУНОГЕННОСТИ АВИРУЛЕНТЯМХ ШТАММОВ

ЧУМНОГО ИИКРОБА путем подкожного заражения белых мышей культурами ис- пытуемого и вирулентного штаммов чумного микроба, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью ускорения способа, культуры испытуемого и виру-. лентного штаммов вводят совместно, при этом культуру вирулентного штамма используют в дозе 10-10 Dcl u иммуногенность штаммов определяют. по показателю ?Ю О, выраженному числом Dcl вирулентного штамма, при этом при 1.0 д равном 200 Dcl и выше — штамм иммуногенный, при ЬР менее 200 Dcl и более 10 Dcl - штамм с ослабленной нммуногенностью, а с при ЬР равном 10 Dcl и меньше9 штамм неиммуногенный.

1 11ОО

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для первичного изучения иммуногенности авирулентных штаммов чумного микроба.

I

Известен способ определения степени иммуногенности авирулентных . штаммов чумного микроба путем подкожного заражения белых мьппей культурой испытуемого штамма, через 21 10 день - культурой вирулентного штамма и через 21 день после последнего заражения определяют иммуногенность по показателю ЕР „, Однако известный способ длителен, 15 так как ответ получают через 42 дня.

Целью изобретения является ускорение способа.

Цель достигается тем, что культуры испытуемого и вирулентного штам- 20 мов вводят совместно, при этом культуру вирулентного,штамма используют в дозе 10-10 Dcl и иммуноген- ность штаммов определяют по показателю ЬРп, выраженному числом Рс2 ви- 25 рулентного штамма, при этом при LD <, равном 200 Рс», и выше — штамм иммуногенный, при ЬР менее 200 Рсй и .более tO Dcf — штамм с ослабленной иммуногенностью, а при,LD<, равном

10 РсУ и меньше, — штамм неиммуногенный.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят разведение испытуемого авирулентного штамма в концентрации

2 10 м.к./мл и серийные разведения двухсуточной агаровой культуры вирулентного штамма чумного микроба (Dcl не более 10 м.к.) в концентра- 40 циях 2,10в 2„10 2 . 10Ч и

2 ° 10 м.к./мл. Перед заражением ех

tempore смешивают девять частей суспензии авирулентного штамма с одной частью каждой их четырех суспензий вирулунтного штамма. Полученными смесями в объеме 0,5 мл заражают подкожно во внутреннюю поверхность бедра по пять белых мышей на дозу. Таким образом, каждой мьппи вводится по

107 м.к. авирулентного штамма и микробы вирулентного штамма в одной из следующих доз: 10з 10э 10» и

10 м.к. Животные погибают в обычные для заболеваний чумой сроки. По ре1 эультатам опыта определяют показа304 2 тель LD вирулентного штамма и выражают его числом Dcf.

Пример 1. Готовят суспензию двухсуточной агаровой культуры штамма Yersinia pesris ЕЧ в концентрации

2 ° 10 м.к./мл и суспензии вирулент-

7 ного штамма Y.pestis 1300 (Dcf

10 м.к.) в концентрациях 2 ° 10, 2»

«10, 2 ° 10, 2i10 м.к./мл. В боксе для заражения животных смешивают по

0,5 мл каждой взвеси штамма 1300 с

4,5 мл суспензии штамма ЕЧ. По 0,5 мл

- каждой смеси вводят подкожно пяти беспородным белым мьппам. Инфицирующие дозы штаммов EV и 1300 соответ«

7 т ственно составляют 10 и 10 ; 10 и

f0, . 10 и 104, 10 и 10 м.к. Кроме того, заражают культурой штамма

1300 в дозе 10 м.к. 5 белых мышей (контроль Рсй) и культурой штамма

ЕЧ в дозе 10 м.к. 5 белых мьппей (контроль авирулентности штамма). В течение 18-21 сут. следят эа гибелью животных вьпкивших к этому сроку белых мьппей убивают.

Результаты заражения представлены в табл..1.

По результатам испытания культура штамма EV расценивается как иммуногенная L — - Р» равна 208,3 Рсй.

Пример 2. Из вакционного штамма ЕЧ получена субкультура

EVF1, не продуцирующая,фракцию чумного микроба. Определение иммуногенности проводят по методике, описанной в примере 1.

В табл. 2 приведены данные по иммуногенности штамма

По результатам испытания. культура оценена неиммуногенной LD рав»а на 3, 16 Dcl.

Определение иммуногенности прове-. дено у пяти авирулентных штаммов чумного микроба (см. табл. 3).

Сравнительные данные по точности определения при наличии ускорения способа приведены в табл, 4.

Использование предлагаемого способа позволяет сократить время изучения иммуногенности в два раза, тем самым создает экономию средства для содержания зараженнь1х.животных в специальных помещениях; совмеще.ние вакцинации и заражения в одной операции исключает двухэтапность исследования.

1100304

Таблица 1

УО штамма, 1 300, мк

Погибло

102

208, 3

20830

10э

10

2 0

10

10

Таблица 2

Погибло

10э

3,16

316,3

10э

10 0

10э

Доза культуры штамма

Доза субкультуры

EVF 1

Доза культуры штамма

1300 доза культуры штамма 1300

Заражено белых мышей

Заражено белых мишей

<> ео штамма, м.к.

LD штамма, Dc X

ЬР у@ штамма

1300, Dcl

1100304

Таблица

ЕР, мк

ЬВ вирулентного штамма.при т введении 10 м.к. авирулентного штамма, Dcf

Степень

Характеристика штамма

Культура иммуногеннос-ти

1 опыт 2 опыт

Вакцинный

7,478 1О

233,8 208,3

Иммуногенный

ЕЧ

>256 237, 1

1,994 10

То же

1300 P826 Оттена

Иеиммуногенный.>3, 125 ° 10.

3,501 -10

3,3

2,1

6,1 (F,, - Pen T;„) То же

ЕЧ

1300 Са+

2,7

1э5

Таблица 4

Хультура!

1редлагаеюй способ т ! 0!э внрулелтного игам а при введении с !0 авнрулентного италиа и предели колебаний этого покаэателя, Dct, а такие P (достоверность) по отноиенин к реэультатан опита с нсполъэованиен

° таэаеа EV лень

ED« предели колебаний, н.к. о ности! опьп

Т предали ко- P лебаний

233,8

7478

208, 3! йасуногенный

4157-13450!

71,4-3!8,4

0,os 3

1300 P»256

»0,05

1994

»0,05

128-3185

То хе

%%

-o,î! Ненмнуногенный,926 з,з со,о!

2,1

»3125000 с0,05

2,5-4,4.0,8-5,!

EV-5 с0,05 . 350100 с0,01 То хе

184000 666500 с0 01

6,1

0,8-4,8

4,5-8,4

Получен из вирулентного штамма

1300 на среде

Джексона-Берроуза

Потерявший иммуногенность

Получен из вирулентноз"о штамма

1300 на среде

Хигучи-Смита

81,7- 531

231,1

97,7-593,4 т3, 125 10, То же

Продолжение табл.4.

1100304

Преллагаеиьв1 способ культура

2 опыт! опыт

Пределы ко- P лебаний елены K аннй

3125000 с 0,01 То ке

1300 Cat

2,7

0,01 с 0,02

2, 1-3,6

0,6»3,4

Ф

Проводилн сравнение показателей LD,, так как по результатам опыта сравнение показателей Ы® воэмокно.

П роводили сравнение показателей ЕП, так как по результатам сравнение показателей ПП

Редактор Л. Письман

Корректор В. Бутяга, Техр ед M.Ходаиич

Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35 ° Раушская наб., д. 4/5

Заказ 6053/1

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4., t о внрулентного нтанча при введении с 10 м.к нрулентного нтамма и пределы колебаний этого аэателл, Dct, а такке P (достоверность) по оненню к результатам опыта с использованием a EV

Кве, пределы колебаний, м.к.

Pпоо ноле ни к авэо ит аииа