Способ очистки сыворотки крови от липидов
СПОСОБ ОЧИСТКИ СЫВОРОТКИ КРОВИ ОТ ЛИПИДОВ путем центрифугирования гетерогенной системы, содержащей сыворотку и органический растворитель с меньшим удельным весом, чем сыворотка, отличающийся тем, что, с целью сохранения нативности белков сыворотки, в гетерогенную систему дополнительно вводят хлороформ и проводят центрифугирование системы при соотношении верхней фазы, сыворотки и нижней фазы 10:15:10 по объему.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСГЬ БЛИН
0% (И1А
3658 А 61 К 35 16
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
OO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OYHPblYHA
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВ (21) 2984125/28-13 (22),18.06.80 (46) 07.07.84.Бюл. N- 25 (72) С.Г.Благородов, Л.В.Бабушкина и О.А.Кубасова (71) Ростовский-на-Дону научноисследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и гигиены (53) 611.216.23-002(088.8) (56) 1. 1.i@id Research, 1976, v.17, ¹ 2, р. 176-181 (прототип). (54) (57) СПОСОБ. ОЧИСТКИ СЫВОРОТКИ
КРОВИ ОТ ЛИПИДОВ путем центрифугирования гетерогенной системы, содержащей сыворотку и органический растворитель с меньшим удельным весом, чем сыворотка, отличающийся тем, что, с целью сохранения нативности белков сыворотки, в гетерогенную систему дополнительно вводят хлороформ и проводят центрифугирование системы при соотношении верхней фазы, сыворотки и нижней фазы 10: 15: 10 по объему.
1101235
Пример. В центрифужные полиэтиленовые пробирки диаметром 28 мм на слой хлороформа (10 мл) наслаивают слой прозрачной сыворотки, лишенной хиломикронов: промышленной (допускаемой МРТУ-42 Ф 84-56 для производства белкового препарата гамма-глобулина) или донорской (15 мл) т
Сверху на слой сыворотки наслаивают слой диэтилового эфира (10 мл)„ пробирки накрывают крышкой. Центрифугируют в течение 30 мин при скорости
50000 д при охлаждении ротора центриь фуги до 0 — +4 С. Сыворотку после центрифугирования отделяют вакуумом.
Содержание липидов в контрольных и опытных образцах сыворотки определяют методом К.И.Хуэрго. Результаты представлены в табл. 1.
Испытание на нативность обезжиренных по предлагаемому и известному способам сывороток крови проводилось по изучению степени коагуляции белка (табл.2), сохранения электрофоретической подвижности фракции (табл.3) сохранения фракционного состава сыворотки (табл.4) и сохранения татра антител во фракции гамма-глобулина {табл.5). В таблицах показатели выражены в средних арифметических величинах из 5 сывороточных образцов. (сыворотки, взятые для эксперимента, до извлечения липидов были прозрачны и слегка опалесцировали).
Предлагаемый способ освобождает белковые образцы от липидов с сохранением нативных физико-химических свойств белковых образцов, а также в отличие от известного способа, непригодного для очистки от липидов промышленных плацентарных и абортных сывороток вследствие их коагуляции, является универсальным.
I Таблица !
Показатель
Контроль
Промышленные сыворотки
Донорские сыворотки
Содержание липидов, мг.7.
362,72+49,956 563 634+
10,860
140, 094+
Т1,946
181, 362+
7,819
Степень очистки (средний процент) й::::
61,3
67,6
Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к способам очистки белковых растворов с сохранением нативных свойств белков, и может быть использовано в биохимичес- ких анализах при колориметрическом
1 определении веществ, имеющих максимум поглощения в той же области спектра, что и липиды, а также в производстве белковых препаратов крови с целью очистки от балластных липидов, присутствие которых оказывает значительное влияние как на физико-химические свойства препаратов, особенно при хранении, так и обусловливает 15 ряд побочных явлений при введении.
Известен способ полного освобождения плазмы или сыворотки крови от липидов путем добавления к ней двойного, объема смеси бутанол: диизопропило- 2п вый эфир (40:60) и встряхивания при комнатной температуре в течение
30 мин с последующим разделением фаз центрифугированием jT) .
Однако известный способ не обеспе- 2s чивает сохранения цативности белков сыворотки и не является универсальным (очистка некоторых образцов невозможна).
Целью изобретения является сохранение нативности белков сыворотки при очистке ее от липидов.
Указанная цель достигается тем, что согласно способу очистки сыворотки крови от липидов путем центри-, фугирования гетерогенной системы, содержащей сыворотку и органический растворитель с меньшим удельным весом, чем сыворотка, в гетерогенную систему дополнительно вводят 4О хлороформ и проводят центрифугирование системы при соотношении верхней фазы, сыворотки и нижней фазы
10: 15:!О по объему.
Скоростное центрифугирование с хлороформом
Донорские Промышленные сыворотки сыворотки
1101235
Таблица 2
Степень коагуляции
Способ.
При очистке сильная коагуляция, образование желеобразного геля
Абортная
Известный
После очистки коагуляции и гелеобразования нет, сыворотка прозрачна, опалесценции нет
Предлагаемый
Известный
После очистки сильная коагуляция, образование желеобразного геля
Плацентарная
После очистки коагуляции и гелеобразования нет, сыворотка прозрачна, опалесценции нет
Предлагаемый
Известный
После очистки коагуляция составила 6,2Х, гелеобразования нет, сильная опалесценция
Донорская промышленная
После очистки коагуляции и гелеобразования нет, сыворотка прозрачна, опалесценции нет
Предлагаемый
Таблица 3
» О
Электрофьретическая подвижность, 10 см/В с
Фракции сыворо-. ток
11 "Глобулин
Гамма-глобулин лин
Альбумин до очист ки до очи стки после до очиосле чисти до очи- постки сле до очист оочистки стки ле очистки чики тки
Известный способ
Абортная
7,39 On- 9,04 реде1,37 Опре- 3,03 делить. невозможвозможвоэможи о но но но но
Плацентарная 1, 36
2,72 ""- 4,95 -"- 6.48 -"- 8,7t
-Глобулии (. после очист ки
Определить не5 63, Определить нелить невозможОпределить невозмож1101235
Продолжение табл. 3
1 64 1»48 3»45 3»04 4 07 3»85 5» 15 5»32 5»99 6 3кая
Предлагаемый способ
Абортная
1,37 1,35
3,03 3,00 5,63 5,72 7,39 7,40 9,04 9,11
Плацентарная 1,36 1,36
2,72 2,70 4,95 4,98 6,48 6,45 8,71 8,65
Донорская
1,64 1,65
3,45 3,50 4,07 4,10 5,15 5,06 5,99 5,93
Таблица 4
Содержание белка во фракциях, 7
Фракции сыворотки
-Глобулин
Р --Глобулин
2t -Глобулин до очист- после до очист- после ки очистки ки ОЧИСТКИ
ДО ОЧИСТ после очистки
Известный способ
15,8 13,8 10,5
8,2
6,7
16,9
6,4
17,3
Определить невозможно
14,4
9,5
15,7
Абортная
Предлагаемый способ
8,2
t6,9
17,0
8,2
6,4
6,3
17,3
17,2
15,7
9,5
15,7
Донорская
Плацентарная
Донорская
Плацентарная
Абортная
14, 8 Определить невозможно
13,8 13,8 .14,8 14,9
14,4 14,5
Определить невозможно
1101235
Продолжение табл.4
Содержание белка во фракциях,7
Содержание общего.бел.
1 -Глобулин
Альбумин ка, г 7. до очистки после очистКи ки ки
6,7 6,2
4,6
3,8
56,4
63,2
Донорская
5,9 Опреде лить
Плацентарная
56,3
5,2
Определить возможно
3,8
6,6
56,6
6,7 Г>,8
4,6. 56,4
56,3
Плацентарная
5,3
56,3
56,3
S,9 5,9
6,6 6,6
3,8
Абортная
3,9
56,6
56,4
Таблица 5
Грипп /АЕ/мл
Сыворотка
Аг
До очистки После очистки До очистки После очистки
Известный способ
157
Плацентарная
Определение невозможно
272
Абортная
148
159
108
Донорская
170
283
Предлагаемый способ
160
278
157
272
Плацентарная
148
148
161
159
Абортная
283
287
174
170
Донорская
ВНИИПИ Заказ 4690/3 Тираж 688 Подписное >илиал ППП "Патент"э г.Ужгород, ул.Проектная, 4
Фракции сыворотки
Абортная.
Донорская до очистки после очистки
Определить неОпределение невозможно невозможно до очистпосле очистневозможно
