Способ определения хлорпропамида в сыворотке крови

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРПРОПАЮЩА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ путем осаждения белков, обработки супернатанта химическими реагентами с последующим фотометрированием, о т л и ч а rout и и с я тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, обработку химическими реагентами ведут перед осаждением белков, при этом к пробе добавляют метиленовую синь и полученный цветной комплекс экстрагируют хлороформом .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК зш

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3571016/28-13 (22) 12.01.83 (46) 07.08.84. Бюл. Р 29 (72) В.В. Соколовский, Ц.Г. Масевич и E.Н. Сафонова (71) Ленинградский санитарно-гигиенический медицинский институт (53) 616.07(088.8) (56) 1. Splingler Г., Keiser Н.

"Arzneimittel-Forsch", 1956, с. 760.

2, Splingler Г. — "Klin. Wschz.", 1957, 35,5, с. 533 (прототип).

„„Я0„„1107052 А (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРПРОПАМДА B СЫВОРОТКЕ КРОВИ путем осаждения белков, обработки супернатанта

<имическими реагентами с последующим фотометрированием, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью. ускорения и повышения точности способа, обработку химическими реагентами ведут перед осаждением белков, при этом к пробе добавляют метиленовую синь и полученный цветной комплекс экстрагируют хлороформом.

1107052 определения хлорпропамида в сыворотке крови, включающий высушивание сыворотки крови заморажиганием, экстрагирование раствором соляной кислоты и эфиром уксусной кислоты, нагре- 10 вание экстракта, добавление к нему метанола и измерение УФ- a6cop6uHHtlj.

Известен также способ определения хлорпропамида в сыворотке крови путем фотометрирования, основанный íà 15 появлении окрашенных в желтык цвет дериватов.динитроанилина $2 .

Недостатками известного способа являются трудоемкость и длительность хода определения, а также нЕдостаточ- 2п ная его точность при исследовании сывороток крови, содержащих гемоглобин.

Цель изобретения — ускорение и повышение точности способа.

Указанная цель достигается тем, 25 что согласно способу определения хлорпропамида в сыворотке крови путем осаждения белков, обработки супернатанта химическими реагентами с последующим фотометрированием обработку химическими реагентами ведут перед осаждением белков, при этом к пробе добавляют метиленовую синь, и полученный цветной комплекс экстраXJIOPOAOPMOM, 35

Способ осуществляют следующим образом.

В контрольной пробе раствор хлорпропамида заменяют 2 мл 0,05 Н раствором едкого натрия. Вычисляют разницу между оптической плотностью контрольной и опытной проб, а затем на графике находят значение концентрации хлорпропамида, соответствующее этой разнице. Разница между величинами оптической плотности контрольной и опытной проб равная О, I соответствует концентрации хлорпропамида 2,5 MrX.

Изобретение относится к клинической биохимии, а именно к способам определения лекарственного препарата хлорпропамида в крови.

Известен способ количественного

У пациента берут 10 мл венозной крови натощак, После этого больной принимает 1,0 г хлорпропамида внутрь."О

Через 24 ч после приема препарата у него вновь берут 10 мл венозной крови, которой дают свернуться, после чего сгусток удаляют центрифугированием в течение 20 мин при 1000 об/мин.

К 2 мл сыворотки крови добавляют 1 мл водного раствора метиленового синего (25 х 10 М), быстро перемешивают, добавляют 3 мл хлороформа и энергично встряхивают в течение 1 мин. Пробирку оставляют до разделения слоев, затем осторожно отсасывают водный слой, переносят в чистую .пробирку, отбирают

2 мл и смешивают с 1 мл 10Х-ного водного раствора метафосфорной кисло-55 ты для осаждения белков. Осадок отделяют центрифугированием в течение

15 мин при 3500 об/мин. Надосадочной жидкостью заполняют фотометрическую кювету и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны

680 нм против воды. В качестве контроля используется сыворотка крови, взятая у того же больного перед приемом хлорпропамида.

По разнице между величинами оптической плотности контрольной и опытной проб определяют концентрацию хлорпропамида в сыворотке крови, пользуясь калибровочным графиком.

Построение калибровочного графика происходит следующим образом.

Готовят стандартные растворы хлорпропамида следующих концентраций, мг.7.: 10,0; 7,5; 5,0; 2,5 (на 0,05 Н растворе едкого натрия) ° К 2 мл образца раствора хлорпропамица добавляют 1 мл водного раствора метиленового синего (25 х 10 М), перемешивают и экстрагируют комплекс хлорофс рмом, встряхивая смесь с 3 мл последнего. По завершении сепарации водный слой переносят в чистую пробирку, отбирают 2 мл, смешивают с 1 мл водного раствора метафосфорной кислоты (10_#_) и фотометрируют, как указано выше.

Измерения повторяют на трех заново приготовленных сериях растворов хлорпропамида и по средним величинам оптической плотности, соответствующим каждой из его концентраций, строят калибровочный график. Полученное значение экстракций откладывают на оси ординат, а соответствующие им концентрации хлорпропамида в стандартных растворах — на оси абсцисс.

Из полученных точек на, осях абсцисс и ординат восстанавливают перпендикулярные к осям ординат до пересечения друг с другом. Точки пересечения этих перпендикуляров являются точками графика зависимости оптической плотности стандартных растворов от концентрации в них хлорпропамида.

Составитель И. Емельяненко

Редактор А. Козориз Техред Л.Коцюбняк Корректор А. Тяско

Заказ 5751/3t Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 1107

Пример t. Больной П. 54 лет, история болезни Ф 8790, поступил в клинику пропедевтики внутренних заболеваний с диагнозом сахарный диабет, впервые выявленный, портальный цирроз печени. Жалобы при поступлении на сухость во рту, частые мочеиспускания, кожный зуд, общее недомогание, слабость. При поступлении: сахар крови натощак 11,2 ммоль/л; сахар в моче 4% 0

Больному было начато лечение диетой с ограничением углеводов и хлорпропамидом. Контроль концентрации хлорпропамида в крови после его приема внутрь проводился предлагаемым способом. Параллельно исследовали уровень гликемии. Через 24 ч после однократного приема внутрь хлорпропамида в дозе 1,0 г его концентрация в крови оказалась низкой (0,75 мг%), уровень гликемии существенно не изменился (10,8 ммоль/л) . Дальнейший прием максимальной терапевтической дозы хлорпропамида в течение 20 дн не привел к нормализации уровня сахара крови натощак и к исчезновению глюкозурии. Концентрация хлор- пропамида в сыворотке крови была низкой (2,5 Mr%). Отсутствие компенсации сахарного диабета после перо30 рального лечения в течение 3-х недель заставило отказаться от проводимой терапии и начать лечение инсулином. В стационаре больной провел

46 дн.

Пример 2. Больной Б. 70 лет, 5 история болезни Ф 9240, поступил в .клинику пропедевтики внутренних заболеваний с жалобами на головную боль, редкие сжимающие боли за грудиной, сухость во рту, частые мочеис40 пускания. Диагноз: сахарный диабет впервые выявленный, ишемическая болезнь сердца, атеросклероз коронарных сосудов. При поступлении: сахар

052 4 крови натощак 12,0 ммоль/л; сахар в моче 67. Больному было начато лечение диетой с ограничением углеводов и хлорпропамидом. Контроль концентрации хлорпропамида в крови после его приема внутрь проводился предлагаемым способом. Параллельно исследовали уровень гликемии. Через 24 ч после однократного приема внутрь хлорпропамида в дозе 1,0 г его концентрация в крови оказалась высокой (5,0 мг7), уровень гликемии существенно не изменился (11,6 ммоль/л).

Дальнейший прием хлорпропамида в дозе 0,75 г в сутки в течение 3-х дн привел к нарастанию концентрации препарата в крови до 7,5 мг7.. Уровень гликемии натощак все еще оставался высоким (8,6 ммоль/л), однако самочувствие больного значительно улучшилось (прекратилась головная боль, исчезла сухость во рту, уменьшилась частота мочеиспускания). Больной был выписан из стационара на амбулаторное лечение. Дальнейший прием хлорпропамида происходил под наблюдением эндокринолога поликлиники. На двадцатый день лечения уровеНь хлорпропамида в крови достиг 9,125 мг7., уровень гликемии натощак нормализовался (4,6 ммоль/л), исчезла глюкозурия.

В стационаре больной провел 7 дн.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет своевременно судить о целесообразности назначения хлорпропамида каждому конкретному больному для компенсации сахарного диабета, сокращая тем самым сроки пребывания больных в стационаре.

Предлагаемый способ обеспечивает получение данных о концентрации хлорпропамида в крови после его приема внутрь и позволяет определять малые концентрации хлорпропамнда в сыворотке крови.