Способ эпимеризации гиббереллин-7-альдегидов

 

1 . СПОСОБ ЭПИМЕРИЗАЦИИ ГИББЕРЕЛЛИН-7-АЛЬДЕГИДОВ , отличающийся тем, что гиббереллин-7-альдегид с альдегидной группой в 6 еЛ- или 6/ -положении или его 14с-меченый аналог енолизируют щелочным агентом, а затем подвергают обработке донором водорода или дейтерия или трития в атмосфере инертного газа в среде органического растворителя. 2.Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с я тем, что в качестве щелочного агента используют гидрид калия или динзопропиламид лития или 2,2,6,6-тетрамётилпиперидид лития. 3.Способ по п. 1,отлича ющ и и с я тем, что перед енолизацией проводят защиту кислых атомов водорода в исходных соединениях.fi

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) (И) э М) С 0 7 0 30 7/9 3

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (89) 138663 (ГДР) (21) 7770762/23-04 (22) 16.08.79 (31) W P С 07 D/207758 (32) 12.09.78 . (33) ГДР (46) 23.08.84. Бюл. 9 31 (72) Лишевски. Манфред и Адам Гюнтер, (ГДР) (71) Академи дер Виссеншафтен дер ГДР и Институт фюр Биохеми дер Пфленцен .(ГДР) (53) 547.728.2. 07(088.8) (54)(57) I. СПОСОБ ЭПИМЕРИЗАЦИИ ГИББЕРЕЛЛИН-7-АЛЬДЕГИДОВ, о т л и ч а юшийся тем, что гиббереллин-7-апьде гид с альдегидной группой в

6 Ы-- или 6Р -положении или его 14с-меченый аналог енолизируют щелочным агентом, а затем подвергают обработке донором водорода или дейтерия или трития в атмосфере инертного газа в среде органического растворителя.

2. Способ по п. I о т л и ч а юшийся тем, что в качестве щелочного агента используют гидрид калия или диизопропиламид лития или

2,2,6,6-тетраметилпиперидид лития.

3. Способ по и. I, отличаюшийся тем, что перед енолиэацией проводят защиту кислых атомов водорода в исходных соединениях. Я! !09399

Изобретение относится к способу эпимеризации г ббереллин-7-альдеги— аов, которые представляют собой гиббереллиновые производные, имеющие у шестого атома основного скелета энт-гиббереллана альдегидную группу . Причем ал ьде гид ная групп а может находиться в природном 6!ь -па— ложении или в эпимернам ба -положении.

У гиббереллин-7-альдегидов основ- 10 ной скелет энт-гиббереллана является неизменным или малоизменен (например, секо-, гомо-, нор- или динар-энт-гиббереллан, в данном случае в эпимерном виде или содержащий t5 многократные связи и в данном случае по разному замещен. Мечеными гиббер еллин-7- альдегидами являются такие соединения, которые мечены тритием или дейтерием.

Гиббереллины как фитог арманы мно— гократного действия имеют большое биологическое значение. Известно, что модификация структуры таких в природе существующих гиббереллинов ведет к соединениям с измененной биологической активностью.

Далее, гиббереллины используют в виде их меченых представителей, так, например, для биотехнологических спо30 собов, для исследования биосинтеза, Метаболизма, транспорта, распределе ния, способа действия и анализа соотношения между структурой и действием этих фитогормонов и их частично син,t Д1

,тетических структурных аналогов,как ос ,нова для синтеза новых активных веществ.

Известны гиббереллин-7-альдегиды, которые имеют в естественном бф -положении основного скелета энт-гпб° "40 береллана альдегидную группу t N.Lischewski und G.Adam. Описание изобретения к патенту ГДР 1! 112 753

М.Lischewski und G.Adam. Tetrahedron Letters 2835 (1974). N.Lischew45

ski und С.Adam. Описание изобретения к патенту ГДР Н- 120975. N.Lischewski und G.Adam, Tetrahedron

1.etters 2569 (1975). М.Lischewski

und G.Adam, Z. Chem 16, 486 (1976).

Л,R.Hanson and J.Hawher J Chem.

Soc.Chem. Comm. 1971, 208 und

Phytochemistry 12, 1073 (1973).

В.E. Cross, К.Norton und J.Ñ.Stewerd, J.Chem.Soc.(с) 1968, 1054,"

В.E Cross und 3 L.Gatfield ibid ! 971, 1539 4. однако до сих пор не были синтезированы гиббереллин-7-альдегиды, которые имели 6bl в эпимернам б oL -положении альдегидную группу.

Известна получение меченых гиббереллин-7-альце гидов с альдегидной группой в 68-положении. Так, была описано получение б- Н- или,б — Н2

-гиббереллин-А -альдегида и гиббе— реллин-Ал, — альдегида. с !.R. Bearder, J.Nacme1 lan und В.О.Phinney, Phytochemistry 12, 2173, 26! 5. (1973);

J.Н.Graebe, P.Íåddån und J.MacNillan

J.chem. Soc. Chem. Comm. 1975, 161;

P. Hedden, .3.Маспп11ап und В.О. Phiney, J. chem. Бос., Perkin 1974, !

5873 .

Однако, из-за жестких условий (длительное время реакций, большой из быток щелочи, повышенные температуры) этот способ применим лишь к гиббереллинам, которые довольно стойки по отношению к щелочам и дает лиль небольшой выход.

Далее, известен синтез 7 — Н, 3 ! 7 — С--гиббереллин — А, -альдегида !

В.Dockerill,, R.Evans und J.R.Han

son, J.Chem.Soc . Chem. Comm. 1977, 919J.

Такие замещенные критием на седьмой позиции гиббереллин-7-альдегиды Ht;:ют тат недостаток, что при биосинтетическом или химическом превращении 7-альдегидной функции в карбаксильную группу является . тритий.

Целью изобретения является разр аботка способа получения новых и доступных гиббереллин-7-апьдегидов с альдегидной группой в бж-положении, позволяющего получить меченные гиббереллин-7-альдегиды с высоким выходом .

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу эпимериз ации гиббереллин — 7-альдегидов гиббереллин-7-альде гид с альдегиднай группой в бб=нли б — положении или ега !4с-меченый аналог энолизируют щелочным агентом, а затем подвергают обработке донором водорода или дейтерия или трития в атмосфере инертнога газа в среде органического растворителя, Желательно в качестве щелочного агента испольэовать гидрид калия или диизопропиламид лития или 2,2, 6,6—

-тетраметилпиперидид лития, а перед энолизацией проводить защиту кислых атомов водорода в исходных соепинениЯХ.

I 109399

В качестве щелочных агентов используют прежде всего сильные, но мало нуклеофильнь«е щелочи. ТакиM образом, с использованием сильных но мало нуклеофильных щелочей впервые возможно энолизировать С,« « — гиббереллин-7 †альдегиды с 19- 10 лактонным кольцом, причем для образования энолата достаточно добавлять щелочь в экнивалент10 ном количестве или лишь н небольшом избытке (например, 1,1 эквивалент) . Это подходит для гиббереллин-7 — альдегидон без кислых атомов водорода (например, гиббереллин-А -7—

-альдегид) . При использовании гиббереллин — 7-альдегидов с кислыми атомами водорода (например, гибберелли н-7-ал ьде гиды, содержащие гидр ок-"сильные или карбоксильные группы) целесообразно замещать эти

20 атомы водорода. В качестве защитных групп для гидроксильных групп можно использовать, например, триметилсилильную группу, третичную бутилдиметилсилильную группу или тетрагидропиранильную группу. Помимо этого карбоксильные группы этерифициру«ст или нейтрализуют избытком щелочи. Энолизация гиббереллин-7-альдегидов в присутствии кис- З0 лых атомов водорода тоже возможна.

Однако здесь требуется соответственно больше эквивалентов щелочи, чтобы произошло образование энолата.

Предложенный способ осуществля— ют в атмосфере аргона или азота в органическом растворителе, предпочтительно в абс. тетрагидрофуране или абс. диоксане. Исходные гиб- 40 береллин-7-альдегиды получают из—

«вестными способами химическим путем

Т M. Li s chewski H G . .Adam. Опи сания изобретений к патентам ГДР - 120875, кл . С 07 D 307/77; 11 112753, 45 кл. С 07 5/06; M.Lischewski n, G.Adam

Tetrahedron Letters 197, 2835; ibid.

1975, 2569; ibid. 1975, 3691; Z.Chem, 16, 486 (1976) или микробным путем

3 R Bearder. J MacMillan и В.О.phinney, Phytochemistry 12, 2173 (1973);

J. R.Hanson u J. Haul1 er, J. Chem.

Soc. Chem. Comm. 1971, 208 и Р?«ytochemistry 12, 1073 (1973)1.

Как соединения со свойствами донора водорода, дейтерия или трития (в дальнейшем обозначены кaê доноры водорода, дейтерия или трития) могут быть использованы сам «е раз— ные соединения с водородом, дсйтерием или тритием, способ«ными к об«е««у, например Н О, 1 дО, I O, Н-ОR, 2.

H OR. причем 1 является замещен— ной или незамещенной алкилт ной, арильной или ацильной группировкой, а также остатком органических или неорганических кислот . При использовании кислот образующиеся гиббереллин-7альдегиды не подвергают щелоч««ь«м нли нуклеофильным условиям, что особенно важно для получения неустойчивых к щелочам гиббереллин-7-альдегидов.

Независимо от того, исходят ли для мечения гиббереллин-7-альдегида с альдегидной группой в 6р-положении или же с альдегидной группой в 6 -положении, всегда получают как меченые гиббереллин-7-альдегиды с альдегидной группой в 6p — положе ««и««, т ак и меченые гиббереллин-7-альдегиды с альде гидной группой в бс«.-положении .

Как во время образ онания энолата, так и при превращении с донорами водорода, дейтерия или трития температура колеблется в «««ироких пределах. Целесообразно работать н пределах между -78 С и комнатной температурой .

Обработку продуктов реакции прс«изводят по обычным методам, ««априМер путем хроматографии на колонке с применением органических растворителей. Следует отметить, что оба образовавшихся по способу изомеры характеризуются легкой хроматографической разделимостью.

При ме р I. К3304 мг (1 ммол ь) гибберелли н-Аз-7-ал ьдегида (Io,), растворенного в ) 5 мл абс.пиридина, добавляют 2 мп гексаметилдисилазана и 2 мл триметилхлорсилана. Оставляют на 3 ч при комнатной температуре и после этого выпаривают в накууме . После добавления насыщенного раствора NaHCO исчерпывающе встряхивают с эфиром. Об«ьединенные эфирные фазы выступаюг безводным MpSO и ныпаривают в вакууме.

Остаток оставляют на ночь под вакуумом над Рц 0!0. После этого силилированный гиббереллин-7-альде гид растворяют в атмосфере аргона в 8 мл свободного от кислорода абс. ТГФ-е и добавляют при комнатной температуре

44 мг (1, I ммоль) гидрида калия. После одного часа перемешивания при комнатной температуре добавляют 1 мл, !09399

45 ледяной уксусной кислоты и 2 мл воды. Раствор оставляют на ночь для удаления защитных групп, лотом выпаривают и после добавления насыщенного раствора NaHCOq несколько раз 5 встряхивают с этиловым эфиром уксусной кислоты. Высушив ание органических фаз с помощью NGgSO и выпаривание в вакууме дает остаток,, который хроматографируют на 20 г силикагеля (Moe lm) . Вымывание с хлороформом (фр акции 1-35), хлороформом/ этиловым эфиром уксусной кислоты

9: 1 об/об (фракции 36-60), хлороформом/этиловым эфиром уксусной !5 кислоты 8:2 об/об (фракции 61-60) и хлороформом/этиловым эфиром уксусной кислоты 7:3 об/об (фракции 91 — 150) дает при объединении фракции 68-89

96 мг исходного альдегида 1о .

Из фракции 94-141 изолируют

143 мг = 61% от теоретического значения 6-зпигиббереллин-А -7-альде8 гида (1с! ) (расчет выхода относитель-но превращенному альдегиду la) 25 т. пл. 185- 87 C (из ацетона/н — гексана). ГоЦ1, <О С (с = 0,35 — этанол), MC: м/е 330 (М+ или M ), ИК(СНС ): мд 3600 (ОН), 2 7 30 и 1 725 (ал ьде гид), 1775 (g-лактон-СО) и 1665 см (=СН ) „ цетон-Д61 19 !

00 МГц — I <> . б ТМС (S 18-Н), 2 75 (сЫ, j=!0 Гц и j =2 5 Гц; 6 Н) .

2 97 (d, j =1О Гц, 5-Н 1, 4,32 (m, 3-4), 4,89 и 5,2! (17 Гц)

5,84 (сЫ, j=9 Гц и j =2,5 Гц- 2-Н), 6,28 (dd, j=9 Гц и j =2 1 ц, 1-Н) и

40 9,80 ррш (части на мио. частей) (с 9 3 =2, 5 Гц, 7-Н) Анапогично получают из 1 ммоль гиббереллин-7-альдегида с альдегид— ной группой в 6 -положении и

1,1 ммоль гидрида калия следующей гиббереллин-7-альдегиды с альдегидной группой в 6Я-положении: б-эп1 гиббереллин-А -7-альдегид (!id). Выход 153 мг = 64% от теоретического значения (93 мг II@ получают), вымывание с хлороформом/ этиловым эфиром уксусной кислоты

7:3 об/об, т.пп. 182-186ОС (из аце- тона/H-гексана), MC: м/е 332 (М+), ИК (нуйол): 1А«34!О (br., ОН), l 755 (Д -лактон-СО) и 1720 см (альдегид) .

6-эпигиббереллин-А4-7-альде гид (l l l d" ) . .Выход 152 мг = 68% от теоретического значения (86 мг 111 а получают), вымывание с хлороформом, . аморфный, МС: м/е 316 (М ), ИК ( (CHCLg) g e 3610 (ÎH), 2725, 2820 и 1 725 (альде гид) и 1 775 см (— лактон-СО) . б-эпигиббереллин-А.-7-альде гид

1У3 ) Выход 152 мг = 70% от теоре тического значения (97 мг 1Ус1 получают), вымывание с хлороформом т.пл. 195-197 С (из хлороформа/н — гексана), МС м/е 314 (М+), ИК (нуйол): щ 3400 (br., UH), 1755 () — лактон — СО) и 1720 см -" (альдегид) . б-эпигиббереллин-A8 — 7-ал ьде гид (V б) . Выход 150 мг = 60% от еоретического значения (98 мг Va снова получают), вы ывание с хлороформом/этиловым эфиром уксусной кислоты 7: 8 об/об, аморфный, MC: м/е

348 (М ), ИК (нуйол)1 мд« 3400 (Ьг., ÎH), 1750 ($ -лактон-CG) и

1720 см (альдегид). б-эпигиббереллин-А 1-7-альдегид (У1 б). Берется 30 мг (О,! ммоль)

Уlс! и 9 мг гидрида калия. Здесь не надо силилировать. Выход 14,2 мг

69% У1 < (9,7 мг Уlа снова получают), вымывание с н-гексаном/хлоро— формом 4:6 об/об, аморфный, MC: м/е

300 (M+), ИК (СНС . ): 1д с 2 725 и 1/25 (альдегид), 1775 см (g— лактон-СО) .

Пример?.3304мг (! ммоль) гиббереллин-А -7 — альдегида (Ia) силилируют аналогично примеру I. Потом смешивают по каплям раствор из 0(3), 0(13)-бис-триметилсилил--гиббереллин — А — 7-альдегида в 5 мл абс. ТГФ в атмосфере арона при -78 С с раствором диизопропиламида лития (изготовленного из 2 абс.

ТГФ, 11! мг диизопропиламина и 70 мг бутиллития).

Оставляют на 10 мин при — 78 С.

1О мин при 0"С и 30 мин при 20 С и потом добавляют ? мл воды и l мл ледяной уксусной кислоты. Теперь оставляют на 12 - и потом обрабатывают аналогично примеру 1 и хроматографИРУ1от, Выход 104 мг = 50% от теоретического значения б-эпигиббереллин-А .-7-а:!bдегида (lg) (122 мг !> получили на3 ад) у Вымы в ание с хлор оформиM/эти ловым эфиром уксусной кислотч 7: 3

7 3 Об/об физи:!ppY èp и т- р (. 1и1109 399 ческие данные, как в примере 1

П р и ме р 3. К 330 мг (! ммоль) гиббереллин-А -7-альде гид а (la), который аналогично примеру 1 силилировали, добавляют по каплям в атмос- 5 фере аргона прн -78 С 5 мп абс. ТГФ и раствор 2,2 6,6-тетраметилпиперидида (изготовленного из 2 мп абс.ТГФ, 160 мг 2,2,6,6-тетраметилпиперидина и 70,4 мг бутиллития).Оставляют на 10 мин при -78 С, 10 мин при О С и

30 мин при 20 С и добавляют 1 мл метанола и 1 мп ледяной уксусной кислоты. Оставляют теперь на !2 ч и обрабатывают аналогично по приме- 15 ру 1 и остаток хроматографируют. л

Выход: 99 мг = 47K от теоретического значения 6-эпигнббереллин-А -7-альдегида (18) (120 мг Iа получают), вымывание с хлороформом/ 20 этиловым эфиром уксусной кислоты

7:3 об/об, физические и спектроскопические данные как по примеру 1.

Пример 4. Аналогично примеру 1 из ммоль гиббереллин-7-апь- 2S дегида с апьдегидной группой в

6<1-положении и 1,1 ммоль гидрида калия получают следующие гиббереллин-7-альдегиды с альдегидной группой в б„ -положении.

Гиббереллин-А -7-альдегид (Ia ) .

Выход 99 мг = 54X от теоретического значения (146 мг 1о получают) вымывание с хлороформом/этиловым эфиром уксусной кислоты 8:2 об/об, т.пл. 172 — 175 С (из ацетона) l )

1)

+ l 18,8 (с = 0,61; этанол) .

МС: м/е 330 (M+ или M ), HK (CHC Ip): ф,,„с 3610 (OH), 2723, 2820 и 1725 (альде гид), l? 75 лактон-СО) и 1635 см (-CH=CH-), I00 МГц — 1н „, . о 1,14

1 (S, 18-Н ), 2, 79 (dd = 10 Гц и Х = 2,5 Гц,6-Н), 3,29 {d, J = 10,5 Гц, 5-Н), 4s

4 06 (d, J = 3 5 Гц, 3-Н), 4,93 и 5,24 {m, 17-Н2), 5,90 (dd, J = 9,5 Гц и У =3,5 Гц, 2-Н), 6,39 (d, J = 9,5 Гц, 1-Н) и

9,84 пппп (d, J = 2,5 Гц, 7-Н) . 50

Гиббереллин-А, -7-альдегид (I 1 с1 ) . я

Выход 90 мг = 527. от теоретического значения (158 мг 1б получают), : вымывание с хлороформом/этиловшм эфиром уксусной кислоты 8: 2 об/об

55 ! аморфный, МС: и/е 332 (М+ или М

ИК (СНС1з1: 5м ес 3610 < 0H), 2725, 2820 и 1725 (альдегиц)и 1770 ем

{$-лактон-CO) .

Гиббереллин-Ап-7-альдегид { 1Уа ) . я

Выход 94 мг = 597 от теоретического значения (155 мг У l о получают) вымывание с н — гексаном/хлороформом I: 9 об/об т . пл. 152-153, С (из эфира), MC: м/е 314 (М+), ИК (СНС1 ): f

3605 (0H), 2725 и 1725 (альдегид) и 1775 см " (O -лактон-СО).

Гиббереллин-Ае-7-апьдегид (Уо ). л

Выход 95 мг = 497 от теоретического значения (154 мг Y б .получают}

BbfMbfBGHHp с хлороформом/этиловым эфиром уксусной кислоты

4: 6 об/об аморфный, МС: м/е 348 (M ), ИК (.нуйол): „А 3400 (Ьг., ОН,! 750 (g-лактон-CO) и 1720 см (альде гид) .

Гиббереллин-А>-7-альдегид (IO) .

Применяют только 30 мг (О, I ммоль)

6-эпигиббереллин-А -7-альдегид. СилиЦ лирования здесь не надо. Выход

9,3 мг = 622 (1с! (15 мг Id получают), вымывание с н-гексаном/ хлороформом 1:1 об/об, аморфный, МС: м/е 300 (М ).

Пример 5. К 330 мг (1 ììîëü) гиббереллин-А>-7 — ал ьде гида (! с! ), который аналогично примеру силили-ровали, в атмосфере аргона добавляют 8 MTI абс, ТГФ и 44 мг {1, ммоль) гидрида калия . После часового перемешивания к эноляту добавляют при комнатной температуре 0,1 мл "-Н О (5, 55 ммоль) (удельная радиоактйвность 3 мКври/ммоль) . Теперь пере— мешивают три минуты и смешивают с I мп ледяной уксусной кислоты.

Путем многократного выпаривания в вакууме и многократного добавления метанола возможно удалить нестабильный тритий. Для удаления защитных групп к остатку добавляют 8 мл ТГФ, 2 мп Н О и 1 мл ледяной уксусной кислоты и оставляют на ночь. После выпаривания в вакууме наливают насыщенный раствор NaHCO, несколько раз встряхивают с этиловым эфиром уксусной кислоты. Высушивание органической фазы с помощью Иа $0ц и выпаривание в вакууме дает остаток, который аналогично примеру I храматографн— руют. При вымывании с хлороформо. / этиловым эфиром уксусной кислоты

8:2 об/об получают 99 мг = 307 от теоретического значения (6- II) †гнб.%

1109399

9 береллин-А -7-альдегида (! +) щего удельную радиоактивность

l,37 мКюри/ммоль. Последовательное вы!1ывание с хлороформом/этиловым эфиром уксусной кислоты /:3 o6/об дает 145 мг = 447 от теоретического значения Г б- Н1-6-э пи гиб береллин-А — 7-альдегида (I rl с удельной радиоактивностью 1,,47 мКюри/ммоль.

Физические и спектроскопические дан- 10 ные этих соединений как в примерах

l и4.

Аналогично получают из 1 ммоль гиббереллин-7-альдегида с альдегидной группой в 6р положении 1,1 ммоль 15 гидрида калия и 0,1 мп Н O (удельная радиоактивность 3 мКюри/ммоль) следующие Гб- Hl-гиббереллин-7-альь дегиды с альдегидной группой в бсср-положении и Гб- Hj -гиббереллин- 20

-7-альдегиды с альдегидной группой в бр -положении (физические и спектроскопические данные полученных сое.динений см. в примерах 1 и 4).

I;6- Н1-гиббереллин-А -7-альдегид 25 (11%) и 6- Н,1-6 †эпигиббереллин-А -7-альдегид (1!r). Вымывание с хлороформом/этиловым эфиром уксусной кислоты 8:2 об/об, выход 93 мг — 28% от теоретического значения

11 5 (удельная радиоактивность

1,32 мКюри/ммоль) вымывание с хло-, реформом/этиловым эфиром уксусной кислоты 7:3 об/об, выход 150 мг л 45% от теоретического значения

11г (удельная радиоактивность

1,48 мКюри/ммоль).

Гб- Н)-гиббереллин-А <-7-альдегид (1116) и (б- Нг -б-эпигиббереллин-А — 7-альдегид (11! г ) . Вымы4 40 вание с н-гексаном/хлороформом

2:8 об/об, выход 91,5 мг = 297 от теоретического значения 111 в (удельная радиоактивность 1,35 мКюри/ммоль), аморфный, МС: м/е 316 (М ), ИК (СНС13): g 3610 (ОН), 2725 и 1725 (апьдегид) и 1775 см (gлактон-СО), вымывание с хлороформ .м, л выход 149 мг = 47X от теоретического значения l I I r (удельная радиоакти в иост ь 1, 49 мКюри /ммол ь ) . Гб- Н) -гиббереллин-А -7-альдеЪ гид (IУ В ) и t6- Н)-6-эпигиббереллин-А -7-альдегид (!Уг ) . Вымывание с н-гексаном/хлороформом

I:9 об/об, выход 101 мг = 327 от теоретического значения 1 е (удельная радиоактивность 1,39 мКюри/ммоль), < вымы!3 а(<не (. х. < < !э Оформом выход

l,53 мг - - 49 <>r теоретического зна— чения IУ т (удельная радиоактивность 1,5 мКюри/ммоль).

Гб — H) — гиббереллин — А -7-альде— гид (Ув) и !б- Hj -б-эг|игибберел— лин-AB-7 "ггеr

100 мг = 297. от теоретического значенияя V ь (удельная р адио активность

l, 10 мКюри/ммоль), вымывание с хлоре- . рмом/этиловым эфиром уксусной кислоты 2: 8 об/об, выход 147 мг — 427 от теоретического значения

V r (удельная радиоактивность

l,2 мКюри/ммоль) . (.6- Н) -гиббереллин-А <,-7-альдегид (У1ь) и !б- Hj -6-эпигиббереллин-А <,-7 — альде гид (У l г ) . Применяют . 30 мг (О, 1 ммоль) У l р и 9 мг гидрида калия . Здесь не надо силили— ров ания, вымыв ание с н- ге к саном/ хлороформом 1: 1 об/об, выход 9,9 мг= — 337 от теоретического значения

У1 Ф (удельная радиоактивность l

1,42 .мКюри/ммоль), вымывание с н-гексаном/хлороформом 4: 6 об/об, вы— л ход 13,8 мг = 46% от теоретического значения У г (удельная радиоакtHBHocTb 1,5 мКюри/ммоль).

Г б- НI-ãèááeðåëëèí-А -7-альде1

Ю гид (УШ) и 1б- HI-6 — эпигибберел— лин — А4 -7-альдегид (1Х) . К раствору,. состоящему из 3, 16 мг (0,01 ммоль) гиббереллин-А > -7-альдегид", (УП) в 0,5 мл абс. ТГФ добавляют при комнатной температуре в атмосфере аргона 1 мг гидрида калия. После часового перемешивания добавляют

0,1 мп !1 0 (удельная радиоактивность 3 мКюри/ммоль) и после трех минут наливают 0,5 мл ледяной уксусной кислоты. Потом выпаривают в вакууме и с целью удаления трития, способного к обмену, остаток растворяют в этиловом эфире уксусной кислоты и несколько раз встряхивают с 27-ным водным НС!. После высушивания с помощью NagSO< и выпари— вания в вакууме получают после тонкослойногo хроматографического разделения на сипикагеле (Mer< k).

l,2? мг = 407. от теоретичесA кого значения t.б- Н)-гиббереллин3

-А -7-альдегида (У!11): т. пл. I 60162<" С (из ацетона/н-гексана), МС: м!е 316 (М Э, I 109399!

ИК (СНС1 в): „, „, 2730 (альдегид) и 1710 см " (br., С=О), !,1 мг — 35% от теоретического значения (6- H$ -6-эпигиббереллин-А -7-альдегида (!Х), аморфный, 5

MC: м/е 3! 6 (N ), ИК (СНС1 ): QM rL 2730 (альдегид) и 1705 см (Ьт, C=O) .

Аналогично получают из I ммоль гнббереллин-7 — альдегида с альдегид— ной группой в бЫ-положении, 1, I ммоль

1 гидрида калия и 0,1 мп Н«О (удельная радиоактивность 3 мКюри/ммоль) следующие 16- H) -гиббереллин-7-альдегиды с альдегидной группой в 6 — положении и 1.6- H1 — гиббереллин-7-альдегиды с альдегидной группой в бр-по ложении (физические и спектроскопи ческие данные выявленных соединений представлены в примерах 1 и 4). 20

L6 — H1-гиббереллин-А -7 — апьдегид (1в) и Р 6 — Н) -б-эпигиббереллин-Aj,-"

1 — 7-апьде гид 1 г. Вымывание с хлороформом/этиловым эфиром уксусной кислоты 8:2 об/об, выход 103 мг ,4

31% 1 (удельная радиоактивность

1,5 мКюри/ммоль).

Вымывание с хлороформом/этиловым эфиром уксусной кислоты 7:3 аб/об, выход 148,3 мг = 457. от теоретического значения l r (удельная радиоактивность 1,38 мКюри/ммоль).

Гб- Н;1-гиббереллин-А -7-альдеЪ гид (I! в) и 6- Н1-6 — эпигиббереллин-А« -7 — альдегид jl 1г). Вымывание с хло35 роформом/этиловым эфиром уксусной кислоты 8:2 об/об, выход 86,5 мг л

= 267 от теоретического значения

11 I«(удельная радиоактивность

1,43 мКюри/ммоль).

Вымывание с хлороформом/этиловым эфиром уксусной KHcJIoTbl 7:3 об/об, н выход !63 мг = 497 от теоретического значения 11 г (удельная радиоактивность 1,33 мКюри/ммоль) . (6-5Н1-гиббереллин-Аq-7-альдегид (111 З) и f6 Hl -6-эпигиббереллин-Л вЂ”.7-альде гид (1 1 I r ) . Вымы— вание с н-гексаном/хлороформом л

2:8 об/об, выход 82 мг = 267. от теоретического значения l! 1 в (удель50 ная радиоактивность 1,5 мКюри/ммоль) вымывание с хлороформом, выход

161 мг = 51% от теоретического значения I l l г (удельная радиоактивность 1,31 мКюри/ммоль) .

Гб- Н) — гибб ереллин-А -7-альде— гид (IУ В) и Гб- H7 — 6-эпигиббереллин-А «-7-альдегид (1УГ) . Вымывание с н-гексаном/хлороформом

1: 9 об/об, выход 94 мг = 307 от теоретического значения I Ус! (удельная радиоактивность 1 «5 мКюри/ммоль), вымывание с хлороформом, выход л

157 мг = 507 от теоретического значения IУ (удельная радиоактивность

I, 36 мКюри/ммоль) ., 6- Н1-гиббереллин — А -7-альдегид ъ з (У I 8) и (6- Hl -б-эпигиббереллин-. — A -7-апьдегид (Y l r ) . Берут 30 мг (О, I ммоль) У18 и 9 мг гидрида калия. Силили;.ования здесь не надо.

Вымывание с и — гексаном/хлороформом

I:1 об/об, выход 9,6 мг = 327 от теоретического значения У1 8 (удельная радиоактивность 1,5 мКюри/ммоль) вымывание с н-гексаном/хлороформом

4:6 об/об, выход 15,9 мг = 53% от теоретического значения У l r (удельная радиоактивность 1,40 мКюри/ммоль).

IT р и м е р 6. Аналогично примеру 5 энолат получают из 330,4 мг (1 ммоль) гиббереллин — А в-7-альдегида (1р) и 44 мг (1,1 ммоль) гид рида калия, которые превращают с помощью 0,1 мл Н О (5,55 ммоль

99, 97-ная частота ). Аналогичная обработка и хроматографирование дает

16- H) -гиббереллин-А -7-альдегид (Х): выход 102,5 мг = 317 от теоретического значения, т.пл. 172 — 174 С (из ацетона/н-гексана), МС: м/е «И или М )

1«!эзар -спектре протс ны (5-Н) и b-g) появляются как на сингулет, следовательно, (6- Н) не видно, и 6- Н)-6— эпигиббереллин — A -7-альдегид (X 1): л выход 142,3 мг = 437 от теоретического значения, т.пл. 184-187 С (из ацетона/н-гексана), MC: м/е 331 (M или М 3 в Iн „ « -спектре также протоны (5-Н) и (7-Н «появляются как сингулет, (6- Н) отсутствует.

Пример 7. Аналогично примеру 5 энолат получают из 3,3 мг (0,01 .ммоль) (17- " С1-гиббереллин-А>-7-апьде гида (удельная радиоактивность 0,23 мКюри/ммоль) и 4 мг гидрида калия, который после этого замещают тритием с помощью 0,1

О, 1 мп Hg 0 (удельная радиоактивность 3 мКюри/ммоль) . Аналогичная обработка и тонкослойная хроматография дают L17- " С, С- Н1-гибл з береллин-А>-7-альдегид (удельная ра! 109399

Составитель Н .Куликова

Техред Л. Микеш

Редактор В. Данко

Корректор О.Луговая

Заказ 5997/17 Тираж 410 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная,4 диоактивность C: 0,23 мКюри/ммоль

3 удельная радиоактивность Н:

1,39 мКюри/ммоль| и 17- ""Ñ, 6- Н,!—

-6-эпигиббереллин-А -7-альдегид (удельная радиоактивность С: лч

0,20 мКюри/ммоль, удельная радиоактивность Н: 1,44 мКюри/ммоль .

Предложенный способ позволяет получить меченые гиббереллин-7-альдегиды с альдегидной группой в

6o -положении.

Предложенный. способ общеприменим к гиббереллин-7-альдегидам, причем неустойчивые к щелочам структурные признаки не изменяются. Благодаря мягким условиям при проведении реакции предложенный способ пригоден для эпимеризации и мечения даже С -гиббереллин-7-вльдегидов с 19 10 лактонным кольцом, например, можно получать (6- Hj или 16- H) -гиббереллин-А -7-альде гид, -гиббереллин-А -7-альдегид, -гиббереллин-А -7-альдегид, -гиббереллин-А>-7-альдегид, гиббереллин-А„-7-альдетид, -гибберелин-А8-7-апьдегид и -гиббереллин-А -7-альдегид, которые до сих пор не было возможности получать другим путем.

Кроме того, предложенный способ позволит получать известные меченые гиббер еллины-7-ал ьде гиды, например

5- Н -гиббер еллин-А -7-альде гид с большими выходами, чем раньше описано.

Также получение двойных меченых

1иббереллин-7-альдегидов возможно с помощью предложенного способа. fla— пример, получ 110Т таким образом (1 7 — С, 6- l! — ги б береллин — Ao — 7 — ал ь— дегид и Ц 7- С, 6- H) -6-эпигнббереллин-А> 7-альдегид из (17- С) -гиб Ч береллин-А>-7-альде гида, (! —" 1!, 6-> Hl -гиббереллин-А>-7-ал ьдегид и

Г1-"- Н, 1, 6- Н! -6-э пи гибб ер еллин-А -7-альдегид из 11 — Н -гибберелЬ лин — А -7-альдегида, а также Е6- Н, 3

15-"Щ-гиббереллин — А -7-альдегид и 6- Н, 15- Н1-6-эпигиббереллин-—:.; -7-альдегиц из 515- H) -гибберелз лин-А -7 — апьдегида.

Полученные по предложенному способу гиббереллин-.7-альдегиды с альдегидной группой в 6д-положении показывают измененную биологическую активность по сравнению с исходными

20 веществами. При этом характерно для полученных меченых гиббереллин †7-альдегидов то, что мечение устойчивое и достигается с большой удельной радиоактивно тью. Так как метку

25 легко можно обнаружить или локализовать и она находится на такой позиции, на которой до сих пор не было обнаружено биохимических изменений, эти соединения, например, отлично подходят для исследования биосинтеза ипи метаболизма.

Кроме того, полученные по предложенному способу меченые гиббереллин-7-альдегиды служат исходными веществами для получения меченых природных гиббереллинов и их производных.