Штамм гибридных клеток кэма,используемый для получения моноклональных антител к вирусу клещевого энцефалита
ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК КЭМА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА. Штамм гибридных клеток КЭМА, № 45/5/ (Коллекция перевиваемых клеточных линий Института вирусологии им. Д.И. Ивановского), используемый для получения моноклональных антител к вирусу клещевого энцефалита. (Л
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
3(у) С 12 N 5/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3637980/28-13 (22) 24.08.83„ (46) 23.08.84. Бюл. N 31 (72) А.С. Новохатский, А.А.Кущ, И.В. Малахова, С.Я. Гайдамович, Е.Э. Мельникова, Н.А. Свешникова и В.M. Жданов (71) Институт вирусологии им.Д.И.Ивановского (53). 576.8.097.5(088.8) (56) 1. Dittmar D., Haines Н.G., Castro A. Иопос1опа1 antibodies
Specific for dengue virus type 3.
J. Clinical Microbiology, 1980, v. 12, р. 74-78.
2. Novak М., Greshicova М., Sekeyova M., et аl. Production of
monoclonal antibodies with haemagg1u" с1nation — inhibition activity to
the Scalica strain of the tickborne
encephalities complex — Acta virology
1983, v. 27, р. 34-42 (прототип)., SU„„, 1 9433 А (54) (57) ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК
К3МА, ИСПОЛЬЗУЕИЬЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА. (57) Штамм гибридных клеток К3МА, У 45/5/ (Коллекция перевиваемых клеточных линий Института вирусологии им. Д.И. Ивановского), используемый для получения моноклональных антител к вирусу клещевого энцефалита.
1109433
Изобретение относится к медицине и касается нового штамма клеток КЭМА, используемого для получения антител к вирусу клещевого энцефалита.
Известен штамм клеток, продуцирующий моноклональные антитела к фла-< вовирусам Денге (1).
Известен штамм клеток, продуцирующий моноклональные антитела к вирусу клещевого энцефалита f 2 J.
Однако моноклональные антитела первого штамма не способны реагировать с вирусом клещевого энцефалита, а антитела, продуцируемые вторым штаммом, реагируют с непатогенным штам-мом Скалица и обладают только антигемагглютинирующей активностью.
Целью изобретения является получение моноклональньгх антител к групповой для вирусов комплекса клещевого энцефалита детерминанте.
Цель достигается созданием штамма гибридных клеток КЭМА, используе-. мого для получения моноклональных антител к вирусу клещевого энцефалита.
Штамм перевиваемь>х мь<шиных клеток
КЭМА (гибридома) получен путем слияния мышиной миеломы Х63-Ag 8/653 с клетками селезенки мышей, иммунизи30 рованных вирусом клещевогс энцефалита и представляет собой моноклон гибридных мышиных клеток.
Штамм клеток КЭМА хранится в кол-лекции перевиваемых клеточных линий
Института вирусологии им.Д.И. ИвановсЗ5 кого АМН СССР под номером 45/5/ и характеризуется следующими признаками.
Культуральные характеристики.
Среда для культивирования — cpa." да Далбекко с 15% эмбриональной телячьей сыворотки, пируватом натрия,, 4 г/л глюкозы, антибиотиком гентамицином 50 мкг/мл. Характер роста— стационарная суспензия. Метод снятия -> встряхивание. Частота пассирования через 2-4 сут. Посевная доза ;50 000 клеток в 1 мл. Кратность рассева
1:3, 1:5.
Консервация клеток.
Клетки КЭМА заморожены на 8, 15,„
40 пассажах. Общее количество ампул
50 по 5-10 млн. клеток в ампуле.
Криозащитная среда — ростовая среда 55 с 50% эмбриональной телячьей сыворот-ки и lOX глицерина. Выживаемость при размораживании 73%.
Сведения о контаминантах линии.
Бактерии не обнаружены, грибы и дрожжи не обнаружены, микоплазмы не обнаружены, вирусы — обнаружены части« цы типа А и С, аналогичные частицам родительского штамма клеток Х63-Ag8/653.
llзоферменты, Подвижность глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы и лактатдегидрогеназы в клетках клона КЭМА характерна для мь>шиных клеток.
Морфология культуры.
Культура состоит из слабо прикрепляющихся к субстрату округлых клеток различной величины с ядрами, занимающими большую часть клетки. Ядрышки крупные, встречаются двуядерные клетки. Цитоплазма обычно имеет в,<д тонкого ободка или ядро смещено к одной стороне клетки.
Кариология культуры.
k÷pèàòèï соответствует виду (мышиных), С помощью метода С"окраски стабильные маркеры не выявлены. Модальный класс — 93 хромосомы (модальный
KfIBcc для родительской MHeJIQMHoA линии Х63-А88/653 — 51 хромосома).
Активность моноклональных антител сералогических реакциях.
Образцы индуцированной клетками
КЭ11А асцитной.жидкости мышей (АЖ) и культуральнои жидкости (КЖ) исследуют в реакции непрямой иммунофлуоресценции (НМФА) и реакции связывания комплемента (РСК). Реакции ставят общепринятыми методами.
Излучение моноклональных антител в НМФА приведено в табл. 1.
Р<-. .зультать> опытов, приведенных в табл„ 1, показывают, что все образцы АЖ и КЖ содержат специфические к вирусу клещевого энцефалита антитела,, Контрольные исследования с вирусами ВЭЛ и Денге 11 отрицательно.
Изучение моноклональных антител к вирусу клещевого энцефалита в РСК приведено в табл. 2.
Результаты РСК показывают, что моноклональные антитела специфически реагируют с антигеном клещевого энцефалита и не взаимодействуют с антигенами вирусов ВЭЛ (альфавирус) и Денге 1 1 (флавивирус).
Использование штамма гибридных клеток КЭМА позволяет получать МоНо клональные высокоактивные специфические антитела к высокопатогенному для человека штамма вируса клещевого энцефалита, исключает опасность контакта с вирусом, позволяет усовершенствовать методы индикации возбудите
Т а б л и ц а 1
Контроль
Образцы моноклональных антител К3МА
Титры с вирусом клещевого энцефалита
Незараженные клетки
1: 640
О
АЖ М- 1
АЖВ2
О
1:320
1:320
О
1:16
О
f:64
О, О
1:32
Та блица 2
Контроль
Образцы моноклональных антител
Титры с антигеном клещевого энцефалита
Антиген
ВЭЛ
Антиген
Денге 11
1: 160
1:80
О
1:80
О
1:32
1: f6
Составитель Г. Смирнова
Техред Л. Коцюбняк Корректор О. Билак
Редактор С. Патрушева
Заказ 6004/18 Тираж 552 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
f13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент",.r. Ужгород, ул. Проектная, 4
КЖВ1
КЖФ2
КЖМЗ
АЖ В 1
АЖ%2
AN Ф 3
КЖ М 1 ля и диагностики заболевания, а также получение и.очистку вируса, вирусных препаратов применительно к вирусу клещевого энцефалита.
Клетки, зараженные вирусами
83JI Денге 11, J
