Штамм микроскопического гриба @ @ @ @ @ @ @ -3-продуцент линазы

 

Штамм микроскопического гриба Rhizopus oryzae Went et prin Geerlings AC-3 (коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селек-ции пpo ft ШIлeнныx микроорганизмов, регистрационный номер ЦМПМ -223) продуцент липазы.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

PECflVSËÈН

09) (111

Э!511 С 12 N l5/00; С 12 N 9/20;

С 12 R 1/845

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ . !3

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНЯТИЙ

Н ASTQPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3588638/28-13 (22) 24. 03. 83 (46) 07. 09. 84. Бюл. № 33 (72) И.М,Арендс, В.В.Дорохов, Г.А. Казаков, T. М. Сверчкова и Ю. И, Гончаров (71) Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (53) 663. 15 (088. 8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

¹ 734273, кл. С 12 lV 15/00, 1978.

2. Мухамеджанова Т. Г., Безбородов А.М, Влияние источников азота и углерода на накопление липазы грибом

Rhizopus oryzae )414.-"Прикладная биохимия и микробиология", 1982, 18, № 1, с. 16 — 22 (прототип}. (54 ) ШТАММ МИКРОС КОПИЧЕ СКО ГО ГРИБА

RHIZ0PUS 0RYZAE MENT ЕТ PRIN GEERLINGS

АС-3 — ПРОДУЦЕНТ ЛИПАЗЫ. (57) Штамм микроскопического гриба

Rhizopus oryzae Ment et prin Geerlings АС-3 (коллекция Центрального музея промьппленных микроорганизмов

Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селек" ции промышленных микроорганизмов, регистрационный номер ЦМПМ -223) продуцент липазы.

1 I I 120

Изобретение относится к ферментной отрасли промышленности ." пред-. ставляет собой ноный штамм микро-скопического гриба, который может быть использован для получения ферБ мента липаэы, применяемого н пищевой, кожевенной э химической отраслях промышленности и в синтетических моющих средствах для частичного илн полного гидролиэ а жиров различной

t JQ природы, н медицине и сельском хозяй стве.

Известны штампы микроорганизмов продуцентов липазы, к которым относится штамм Penicillium sol. пш

l5

Mes tling ЛИА-Т-080 — продуцент липолитического фермента.

При глубинном культивировании на

96 — 115 ч ферментации обеспечивается активность 1370 — 1550 ед/мп, 2Q

Нит ат ел ьн ая среда — и ептон, глицерин, соли, рН 6,9, температура

74 C C 13.

Наиболее близким по технической сущностн и достигаемому эффекту к

25 предлагаемому является штамм Rhi zopus

ory zae I 414, который выр апов ают глубинным способом при 4 =-30 C на качалке н течение 3 сут на среде, содержащеи, /с . соевая мука 1, 22; ку курузный крахмал 0,24: кукурузный экстракт 0

0,25, олеиновая кислота 0,56, при рН 7, О. Максимальная активность, определяемая методом Ота и Ямада, составляет 13800 ед/мп 521 .

Недостатком известных штаммон-про-35 дуцентон является низкий уровень активности лнпазы.

Цель изобретения — выделение штамма микроскопического гриба, обладающего повьпиенной способностью к био- 40 синтезу липазы.

Предлагаемый штамм Rhizopus огукае

Ment et Prin. Geerlings AC-3 выделен из сточных бытовых нод Домодедонского района Московской области, 45 подвергнут рассену -с выделением моноспороной культуры, многократным пассажам на агаризонанной смеси вытяжки из солодОвых ростков н отвара отрубей или на агаризованном ячмен- =,9 ном сусле, а также хранению в течение 5 лет. Штамм отличается устойчивыми морфологическими свойства я, Культивирование Rhizopus oryzae

Ment et Prin Geerlings АС-3 проводи-ли на питательной среде, содержащей, Х: соевая мука 1,22; кукурузный крахмал 0,24; кукурузный экст60 3 ракт 0,25; олеиновая кислота 0,56, рН среды 7,0, температура 30 С, аэробные условия (условия, указанные н прототипе). Активность определяли по методу Ота и Ямада. Активность при этом составила 20650 ед/мп по ср внению с 13800 ед/мл у известн" го штамма, За единицу активности принимается такое количество фермента, которое способно высвобождать 1 микромоль олеиновой кислоты из 40Хной эмульсии оливкового масла за

1 ч при 37 С, Проверкой, проведенной в течение

4 лет, установлено, что при хранении и пересенах уровень активности лнпаэы Rhizopus огувае Ment et Prin

Ceer lings AC-3 не снижается.

Штамм Rhkzopus oryzae Ment et

Prin C er1ings АС-3 характеризуется следующими морфологическими и культурально-биохимическими приз <аками, позволяющими отличить его от других штаммов.

Морфологические признаки. Колонии хорошо спороносящие, с хорошо развитым воздушным мицелием, рыхло-войлочные, высотой 0,8-1, 2 см. Колонии пестро-серые. Мицелий плохо смачивается водой.

Стнлоспорангиеносцы прямые, буроватые, отходят по 1 — 3 от шейки риэоида. Ризоиды короткие. Стилоспоранглн 50 — 150 мк в диаметре. Колонка элпиптически-шаровидная 40 — 80 « 35 — 70 мк, коричневатая. Спорангиеспоры шаронидно-эллиптические 5,5 — 8 Х 5 — 6 мк, более или менее хорошо исчерченные, коричневато-сеоые Штамм термотолерантный с максимумом 42 — 43 С.

Культуральные признаки. На синтетической агаризованной среде Чапека с пептоном растет быстро. На 1 сут колонии состоят из бесцветного, ползучего, волокнистого мицелия. ,Споры образуктся на 2-3 сут. На среде с кукурузным экстрактом и эфиром образуется воздушный мицелий.

На сусло — а аре колонии через 2 сут светло-серого цвета, Мицелий сероватого оттенка, плотный, пушистый.

Спороносная зона темно-серого и черного оттенков. На 3 сут спороношение обильное, обратная сторона колонии желтоватая,. Колонии растут быстро, достигая краев чашки, На пшеничных отрубях растет хорошо. Через 2 сут

3 11 отруби полностью пронизаны белым мицелием и покрыты серочерными спорами. На 3 — 4 сут образуется плотный корж, проросший высоким воздушным мицелием.

Отношение к углеродному питанию.

Усваивает глюкозу, лактозу, сахароэу, мапьтозу, крахмал, глицерин из жиров " хлопковое, оливковое, подсолнечное, горчичное,,персиковое масла, кашалотовый, говяжий жиры.

Отношение к азотному питанию.

Усваивает нитраты, лучше азот в аммонийном форме. Из органических источников азота ассимилирует пептон, желатин, казеин, дрожжевой экстракт, мочевииу, кукурузный экстракт.

Отношение к температуре. Мезофил, температура 20 — 43 С, оптимальная температура 28 — 30 С.

Отношение к кислотности среды.

Растет в широких пределах рН от

3,0 до 9,0, оптимум рН 7,0 — 8,0.

Пример I. Штамм Rhizopus

oryzae Went et Rein АС-3 выращивают в глубинных условиях на среде, содержащей, Ж: соевая мука 2; дифосфат аммония 0,6; фосфат калия 0,1; сульфат магния 0,05; поливиниловый спирт 0,3; оливковое масло 0,5, рН 7,0 — 7,2, при 30 С в течение

51 ч. Максимальная активность липаэы 15360 ед/мл.

Пример 2.ШтаммВЬ.oryzae Ment

et Prin АС-3 выращивают на качалке на среде прототипа при 30 С в течение о

3 сут. Максимапьная активность липазы составляет 20650 ед/мп, рН среды 7,0.

Пример 3. Штамм Rh. oryzae

Ment et Prin Geerlings AC- 3 выращивают на качалке на среде, содержащей, Х: соевая мука 3; сульфат аммония 1,38; сахароза 0 13; мел 0 52; дикалий фосфат 0,2; сульфат магния

О,1; оливковое масло 0,5, рН 7,0, время роста 80 - 90 ч. Активность

14230 ед/мп.

Пример 4. Штамм Rh. огухае

Went et Prin Geerlings AC-3 выращивают на среде прототипа при тех же условиях, но при рН 3,0. Активность при этом составляет 2500 ед/мп.

Пример 5. Штами выращивают на среде, содержащей, Ж: глюкоза 3; соевая мука 2; кукурузный экстракт 3; казенн. 2; американский лесной орех

12060 4

2; СаСО 2; М050, 0,05, рН 6,0, С 24 С, время 48 ч. Активность при этом составляет 7230 ед/мп.

Пример 6. Культуру Rhizopus

oryzae Went et Prin Geer1iags АС-3 выращивают на среде прототипа при тех же условиях, но при рН среды 9,0. Активность при этом составляет 4280 ед/мл.

Таким образом, выделенный новый штамм по сравнению с прототипом обладает преимуществами, заключающи" мися в повышенной (на 50X) способности к биосинтезу целевого продукта — липазы, в устойчивом росте в ши" роком диапазоне начальной кислотности среды (pH 3,0 - 9,0), пригодности для поверхностного культивирования. Микроскопический гриб. Rhizopus огугае Went et Prin Geer1ьп8в АС-3 представляет собой новую культуру со стойкими морфологическими и биохимическими свойствами и признаками.

Использование предлагаемого штамма дает возможность при организации производства липазы в СССР получить высокоактивные препараты липазы с болыним выходом.

Липаза, продуцируемая Rhizopus

oryzae Went et Prin Geerlings АС-3 отличается широким диапазоном рН-действия (от 3,0 до 8,0) с оптимумом действия рН 6,0 — 7,0. Она отличается широкой субстратной специфичностью н способностью частично или полностью гидролизовать различные природные жиры и масла и синтетические триглицериды, что откры вает саиае широкие перспективы ее применения в таких отраслях народного хозяйства, как кожевенная и меховая, сыроделие, рыбная промышленность. Ферментативный гидролиэ растительного сырья липазой позволит заменить дорогой и трудоемкий способ щелочной высокотемпературной деструкции с целью получения жирных кислот и глицерина. Частичный гидролиз позволит получать моноглицериды, применяемые в пищевой л промышленности в качестве эмульга- торов. Стабильность в широком диапазоне рН и активность в кислой и слабощелочной зоне открывает возможность применения в медицине, так как липаза Rhizopus orvzae Went et

Prin Geerlings АС-3 активна на всех этапах желудочно-кишечного тракта.