Способ выращивания дрожжей

 

1. СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ ДРОЖЖЕЙ , предусматривающий приготовление посевного материала с последующим перенесением его на питательную срод5-, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта , перед перенесением на пктагслъную среду посевной материал подвергают центрифугированию, а перенесение на питатетльную среду осуществляют через 0,017-24 ч после центрифугирования . 2.Способ по п. 1, отличающ и и с я тем, что посевной материа;: центрифугируют в физиологическом растворе с силой соответствующей 1400-2400 в течение мин. § 3.Способ по п. 1, отлич а гоад и и с я тем, что посевной материал центрифугируют в воде с силой, соответствующей 2750-3750 , в течение 30-60 мин.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТ

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3419618/28-13; 3419630/28-13

3429193/28-13 (22) 02.02.82 (46) 15,07.84. Бюл. Р 26 (72) Н.C:.Çàïoðîæåö, Г.К.Палий, С.А.Иванова и Н.Ф.Пшеничный (71) Винницкий медицинский институт им. Н.И.Пирогова (53) 663.14(088.8) (56) 1. Жизнь микробов в зкстремальных условиях. Под ред. Л.М.Кашнера.

М., "Мир", 1981, с.147.

2. Никитин Г.A., Биохимические основы микробиологических производств.

Киев. "Вища школа", 1981, с.220-221.

3. Ждан-Пушкина С. !., Ровчан И.А., Щелкунова С.А. Задания к практическим занятиям по микробиологии. Л., ЛГУ, 1974. с.5-6.

„„Я0„„11О28О9 А

M5D С 12 И 1/16; С 12 ." 1/72; (54) (57) 1. СПОСОБ ВЬ!РП ИВАННН ЛРО н—

ЖЕЙ, предусматривающий приготовление посевного материала с последующим перенесением его на питательную среду, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, перед перенесением на питательную среду посевной материал подвергают центрифугированию, а перенесенис на питатетльную среду осуществляют через 0,017-24 ч после центрифугирования.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что посевной материа; центрифугируют в физиологическом растворе с силой соответствующей

1400-2400 в течение 1п-40 мин. Я

3. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что посевной материал центрифугируют в воде с силой, соответствтюиев 2750-3750 g, в теиение

30-60 мин.

1102809

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам ныращинания дрожжей, и может быть исполь,зовано н микробиологической промышлснности.

Известен способ выращивания микроорганиэмон путем воздействия на них и питательную среду повышенньм гидростатическим давлением, а также давлением с использованием других газов (13. )О

Однако для подачи этого давления используют дорогостоящую аппаратуру, требующую нысококвалифицированногс обслуживающего персонала, что удорожает выпускаемую продукцию. 15

Известен способ выращивания микроорганизмов, включащий обработку культуральной жидкости центрифужным давлением (2 J.

Однако использование центрифужного давления в известном способе позволяет лишь отделить клетки микроорганизмов от культуральной жидкости и не приводит к ускорению роста дрожжей.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемоМу эффекту является способ выращивания дрожжей, предусматривающий приготовление посевного материала с последующим перенесением его на питатель- 30 ную среду (3 ).

К недостаткам этого способа относится низкий выход дрожжей.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта. 35

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу ныращинания, дрожжей,,предусматринаюшему приготовление поСевного материала с последук,щим перенесением его на питательную среду, перед перенесением на пита40 тельную среду посевной материал центрифугируют, а перенесение на питательную среду осуществляют через 0,01724 ч после центрифугирования.

При этом посевной материал центри- 45 фугируют н физиологическом растворе с силой соответствующей 1400 †24 g, в течение 10-40 мин или н воле — с силой соответствующей 2750-3750 g в течение 30-60 мин. 50

Спопоб осуществляют следующим образом, Посевной материал дрожжи "accharoщycc .-. "1...).",1эе, ",and>da я111can.-, C: .ndi 1 1 (,1)i., в количестве 0,1-10 г помещают н 1 л кипяченой и охлажденной до 25-30 С воды или физиологического раствора 0,85%-ный раствор хлорида натрия)при 75 — 30 C н тщатель— но перемешивают до получения однородной cyc:пензии. Этой смесью наполнякъ . б0 центрифужные пробирки и включают центрифугу. При этом центрифуге придают обороты, соответствующие

1400 †24 или 2750-3750 g, используя, номограмму для pac÷e ra центробежного 65 ускорения. Центрифугирование ведут з течение 10-60 мин. Затем пробирки вынимают иэ центрифуги, перемешина ют их содержимое и используют по назначению н течение 1 мин-24 ч.

Например, смесь переносят н емкости, н которых проводится технологический процесс выращивания микроорганизмов согласно известным способам получения биомассы на соответствующих питательных средах, а также на физиологическом растворе(0,85%-ный раствор хлорида натрия), используют для научных исследований, демонстрации при обучении и др.

Определение достоверности способа и демонстрацию воздействия повышенного центрифужного давления на дрожжи осуществляют по следующей схеме.

Берут 0,1 г биомассы дрожжей и зали° вают 1 л Физраствора или воды при

25 — 30 C. Содержимое сосуда тщательно перемешивают до получения однородной суспенэии и разливают в 13 центрифужных пробирок по 50 мл н каждую.

Первая пробирка с суспенэией дрожжей контрольная, 2 - 13-ая -опытные.

Последние помещают в гнезде центрифуги, например, марки ЦЛР-1 и центрифугируют.

После центрифугиронания осевшую взвесь дрожжей в пробирках тщательно перемешивают до получения однородной суспенэии и делают посевы на солодовое сусло. Аналогично поступают в контроле. Перед инкубацией в термо стате при 30 С как в контроле, так и н суспензии опытных сосудах проводят подсчет количества клеток при помощи электронного счетчика

Пикоскель. В период инкубации в термостате через определенные промежутки времени снова проводят подсчет количества микроорганизмон.

B табл. 1 и 2 представлено влияние силы центрифужного давления и времени обработки на выход дрожжей Басcharomyces cerevisiac обработка без воды и рода Candida соответственно.

Влияние интервала нремени, в течение которого клетки дрожжей переносят на питательную среду, на выход дрожжей представлено в табл.3.

Полученные результаты показывают, что обработка дрожжей рода Candi—

18 н физиологическом растворе позволяет увеличить выход на 121-293%, а дрожжей рода,"ac:haromyces на

155-335%. Обработка в воде позволяет добиться увеличения выхода на 43231%.

Использование параметров обработки эа пределами предлагаемых не сопровождается достаточным увеличением выхода дрожжей.

Пример 1. Дрожжи Faccharo— гнусе.; сеreыsiaе с супендируют В физиологическом растворе и обрабаты1102809

Таблица 1

Время центрифугирования,мин

Пробир ка, н

Относительное центрифужное ускорение ОЦУ

Количество клеток

Первая серия опытОв

3250

164

108

3250

255

168

3250

290

191

3250

351

231

3250

180

118

Вторая серия опытов

2400

171

113

2750

218

143

3250

258

170

3750

342

225

30

4250

169

Контроль

Без центрифугироэания обработка в физиологическом расторе

152

100

Контроль

215

Без центрифугирования

1400

100

243

113

1700

404

188

1750

470

218

1800

434

202 вают на центрифуге с силой соответствующей 1750 ф 30 мин с последующим ересевом на солодовое сусло через 4 ч после центрифугирования. Учет количества клеток ведут через 6 ч после начала инкубации в термостате при ЗО C. Количество клеток в 1 мл

592 10, что составляет прирост

6 по отношению к контролю 281%.

Пример 2. Дрожжи рода Condids помещают в пробирки с физиологическим раствором и центрифугируют при температуре окружающей среды

13-15 С 10 мин с силой соответствующей 2000 g . Затем пробирки вынимают, забирают по 0,1 мл центрифугата и высевают его на среду Сабуро(суслоагар )в чашках Петри. Чашки помещают в термостат при 30 С и термостатируют 1 -2 сут. Затем подсчитывают количество выросших колоний. в контроле . и опыте.

Число колоний 933, в контроле, 319.

Пример 3. Центрифугирование

Saccharomyces проводят в воде при

2250 при 13-15 С окружающей среды

40 мин. Затем выбирают 0,1 мл центрифугата, который высевают на среду Сабуро в чашки Петри, которые термостатируют при 30 С 24 ч. Затем подсчитывают количество выросших колоний 110, в контроле 45.

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет увеличить выход дрожжей на 43-335%. в 1 мл питатель- в процентах ной среды i10 к контролю

1102809

Продолжение табл. 1

Время центрифугирования,мин

Копичество клеток

239

2000

2400

232

108

1750

109

234

212%

1750

456

218

470

10

191

410

119

255

Т а б л и v а 2

4500

3500

Скорость центрифугирования, об/мин

1500

900

ОЦУ, g

Бремя обработки, мин

10 20 30 40 Конт- 10 20 30 40 Конт— роль роль

Выход дрожжей (число колоний) 281 128 148 112 254 290 218 170 117 218

Продолжение табл. 2.

Скорость центрифугирования, об)мин

6000

5000

3000

2000

Время обработки, мин

10 20 30 40 Конт- 10 20 30 40 Контроль роль

Выход дрожжей число колоний

933 897 323 342 319 289 204 170 197 163

Пробирка, 9

Относительное центрифужное ускорение 011У

1750 в 1 мл питательной среды 10

6 в проце нтах к контролю

1 10?809

Т а б л и ц а 3

Количество клеток в 1 мл питательной среды i10 через интервалы времени подсчета клеток после центрифугирования

Время цвнтрифугиро вания, мин

1 мин 20 мин 40 мин 1 ч 1,5 ч 2 ч Зч24ч

215

219

215 216 216

208 125 (146) (148) (146) (146) (141) (85) (146) 10 229

439

456

461

532

612

276 (165) (200) (213) (246) (212) (200) (294) (221) 470 (219) 20 495 (335) 454 (207) 480 (223) 522 (242) 494 (229) 600 (289) 227

-(182) 410

424

30 444

469

243

502

653

552 (265) (194) (191) (194) (300) (304) (230) (232) П р и м е ч а н и е. 1 Контроль(беэ центрифугирования) — в скобках указаны прогенты, т.е. увеличение количества клеток в процентах по сравнению с временем 1 мин.Время центрифугирования(10,20 и 30 мин) — в скобках указаны проценты, т.е. на сколько процентов возросло количество клетов по сравнению с соответствующим контролем, укаэанногo в каждом столбике таблицы.

Сэставитель В.Голимбет

Редактор М.Недолуженко Техред Л. Коцюбняк Корректор М.Шароши

»» »

Заказ 5917 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Конт- 148 роль (беэ центрифугирования) (100) Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4