Способ получения липидов

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПИДОВ, предусматривающий выращивание дрожжей в условиях аэрации иа питательной среде, содержащей углеводороды в качестве ИСТОЧНИКА углерода, а также источники азота, фосфора, калия и магния, сгущение полученной суспензии дрожжей, вшерживание сгущенной суспензии при нагревании с последующими отделением биомассы дрожжей и экстракцией иэ нее лишздов, о т л и ч а ю щ и И с я тем, что, с целью увеличения содержания фосфолипидной фракции в липидах, ввдерживание сгущеннсзй суспензии, осуществляют при температуре 55-95°С в Течение 45-180 мин.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3547006/28-13 (22), 28.01.83 (46) 07.03.85. Бюл. Ф 9 (72) Е.С.Алентьева, О.И.Великославинская, И.И.Бахметьева, Г.И.Мещанкин и И.А.Пятакова (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ и ФЕБ Петрольхемишес комбинат Шведт (ГДР) (53) 663.1.8(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

1 273760, кл . С 12 P 7/64, 1969.

2.. Авторское свидетельство СССР .У 362870, кл. С 12 Р 7/64, 1971.

„„SU„„.I 102276 A

4(С ° 12 Р 7/64, С 12 Р 1/72 (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПИДОВ, предусматривающий выращивание дрожжей в условиях аэрации на питательной среде, содержащей углеводороды в качестве источника углерода, а также источники азота, фосфора, калия и магния, сгущение полученной суспенэии дрожжей, выдерживание сгущенной суспенэии при нагревании с последующими отделением биомассы дрожжей и экстракцией иэ нее липидов, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения содержания фосфолипидной фракции s липидах, вьдерживание сгущенной суспенэии,осуществляют нри температуре 55-95 С в течение 45-180 мин.

С:

3 11022

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения липидов путем культивирования микроорганизмов.

Известен способ получения липидов, обогащенных фосфолипидами, выращиванием дрожжей на углеводородах в присутствии водной питательной среды, содержащей источники

avoca, калия, магния, фосфора в виде сульфата аммония,, хлористого калия, сернокислого магния, фосфор ной кислоты. Выращивание проводят при рН среды 3-8 и температуре 2738 С. Удельный расход воздуха составо 15 ляет 20-200 мз /мз- ч. Регулирование содержания фосфолипидов в биожире проводят путем поддержания в питательной среде соотношения углерода и фосфора в интервале от 60:1 до

10:f. Из культуральной среды выделяют биомассу центрифугироваиием. Полученные дрожжи высушивают и экстра,гируют из них липиды органическим растворителем. Содержание липидов

25 в биомассе 20-407. и содержание в них

Фосфолипидов до 207

Известен также способ получения липидов, предусматривающий выращива- ние дрожжей в условиях аэрации на пи- о тательной среде, содержащий углеводороды в качестве источника углерода, а также источники азота,. фосфора, калия и магния, сгущение полученной суспензии дрожжей, вьщержива- 35 ние сгущенной суспензии при нагреванин с последующими отделением биомассы дрожжей и экстракцией иэ нее липидов (2J . Выдерживание сгущенной суспензии осуществляют при темпера- 40 туре 18-38 С в течение 6-24 ч. Соо .держание липидов в биомассе 207..

Содержание фосфолипидов, определенное в контрольном эксперименте, воспроизводившем условия известного <5 способа, составляет 19-21X,îò количества липидов.

Недостаткам способа является низкое содержание фосфолипидной фрак— ции. 50

Цель изобретения — увеличение содержания фосфолипндной фракции в ли-. пидах.

Укаэанная цель достигается тем, что в способе получения липидов, пре-55 дусматривающем выращивание дрожжей в условиях аэрации на питательной среде, содержащей углеводороды в ка76 2 честве источника углерода, а также источники азота, фосфора, калия,и магния, сгущение полученной суспенэии дрожжей, выдерживание сгущенной суспензии при нагревании с последующим отделением биомассы дрожжей и экстракцией из нее липидов, предложено выдерживание сгущенной суспен- . зии осуществлять при температуре

55-95 С в течение 45-180 мин.

Способ осуществляют следующим образом.

Дрожжи выращивают непрерывным или периодическим способом на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода фракции парафиновых углеводородов, выделенные из нефтей различных месторождений, а также нефтяные дистилляты парафинистых и высокопарафинистых нефтей (например дизельные фракции нефти), содержащие 10-15Х парафиновых углеводородов нормального строения. Водная .среда содержит источники азота, фосфора, калия, магния в виде сульфата аммония, фосфорной кислоты, хлористого калия, сернокислого магния, сернокислого марганца, сернокислого цинка, сернокислого железа.

Культивирование дрожжей осуществляют.,в условиях интенсивного перемешивания и аэрирования среды воздухом при рН среды 3-8 и температуре

27-38 С. Удельный расход: воздуха

20 200. мз!мз, ч.

Биомассу, полученную при выращиванин, сгущают флотацией, центрифугированием, сепарацией, декантацией или каким-либо другим способом от

5 до 257 АСВ. Сгущенную биомассу нагревают до 55-95 С;:и при этой температуре выдерживают в течение 45 tS0 мин единовременно илй в несколько приемов.

После тепловой обработки биомассу высушивают и экстрагируют из нее липиды органическим растворителем.

Из полученного экстракта отгоняют растворитель и получают до 13Х.ли-. пидов с содержанием фосфолипидов до

497 (см. таблицу).

Пример 1 (контрольный).

Дрожжи Candida guilliermondii .выращивали непрерывным способом на очищенных жидких парафинах в присутствии водной минеральной среды, содержащей источники азота, фосфора, калия, магния.

70%-ная фосфорная кислота

175

4,43

8, 86

8,86

0,86

Медь сернокислая

920

Я6

Содержание липидов -в обработанной биомассе составило 13, 1%, а-количест Håõ .фосфопипидной фракции 38,4Х, 3 1102276 4

Состав питательной среды, мг/л массе 11,5Х, количество в них фосПар афин 15000 Фолипидной фракции 45,6X

В контроле .(без обработки) в биомассе было 9,6%. липидов, содержа5 щий 26,6% фосфолипидной фракции.

0,6 . Il. р и м е р 3. Дрожжи Candida

guillierrnondii выращивали в условиях, аналогичных приведенным в примере 1, Хл ори стый калий

Сульфат магния в Ферментере. объемом 800 м . Дрожжевую суснензию отбирали из ферментера и сгущали сепарированием. ПолуЖелезо сернокислое

Марганец сернокислый .ченную сгущенную дрожжевую суспензию нагревали при температуре,95оC в течение 45 мин и высушивали. Из

Цинк сернокислый сухой биомассы бензином экстрагировали липиды. Сухая биомасса содержа ла 11,7% липидов, количество в них

Дрожжи выращивали в ферментере объемом 30 л в условиях аэрации и перемешивания среды. ТемпеРатура B н

Ферментации 31 -32 С, РН, среды 4-4,5, омассе было 9,6 липидов, содержащих коэффициент разбавления среды 0,2 ч 20 . Фосфолипидной фракции.

П "УченнУ СУспензию Дро "ей СГУЩа П м е С "а

Р и м е р 4. Дрожжи Сапата лн сепарацией. Содержание липидов в

sa monico à выра1цивали непрерывным биомассе 13Х, в сгущенной суспензии п способом на питательной среде, со21% фосфолипидов. держащей а каЧестве источника уг ероСгущенную суспензию выдерживали в 25 о течение 24 ч при 31 С и затем эк- (Фр.240 -360ОС), вк„ ча„ и Н -алканы стРагировали из нее лип дь1 Содер- С С к „ т .жание липидов в биомассе 15Х, в них 19%. Фосфолипидов. . Состав минеральной питательной

П р и м е Р 2. Дрожжи Candida Зр среды, мг/л !

guillierrnondii выращивали непрерыв2600 ным способом на питательной среде, : " 2 4 содержащей 2% и -парафинов Сю-С . 70% Н>Р04 f000

Состав мннеральноч питательной KCl среды, мг/л 35

М8804 7Н20 244

Аммофос (46% Р> 0>) 1720

Ре804 ° 7Н20 (NH ) $О4 650

Еп804 ° 7Н О

MgS00 7Н20, 430

NnS04 7Н О

KCl . 750

CuS04 5Н О

FeS04 7Н О . 86,5

Дрожжи выращивали в ферментере

ZnSO4 7Н20 37,5 . объемом 30 л в условиях аэрации и

МЫО 7Н О перемешивания среды при температуре

2 .35-37 С, РН среды 4,0-4,2. ИнтенЛрожжи выращивали в аппарате объ- сивность аэрации 20 нм /кг ч, скоемом 30 л в условиях аэрации и пере рость разбавления среды 0,2 ч. мешивания среды IlpH .температуре 3234 С и РН 4,0-4,2. Интенсивность 50 Суспензию выращенных дрожжей аэрации 130 нм /л.ч, скорость раз- . сгущали сепарированием. Сгущенную .. бавления среды 0,2 ч .. Суспензию вы- дрожжевую суспеизию в течение ращенных дрожжей сгущали на сепара- 180 мин нагревали при 55 С и экстра0 торе. Сгущенную дрожжевую суспензию гировали из нее бензином липиды. нагревали при 70 С в течение 120 мин, 55 высушивали и из сухой биомассы бензином экстрагировали липиды. Содержание липидов в обработанной биоФ 1102276

В контроле (без обработки) в биомассе было 13,0Х липидов, содержащих 21,8% фосфолипидной фракции.

Влияние условий тепловой обработки биомассы на ,содержание в липидах фракции фосфолипидов б

Содержание линидов, X АСВ

Содержание в липидах фосфолипидов, 7 после обработки

ОС до обра- после ботки обработки до.обработки время, мин

26,6

180

24,3

13,1

38,4

12,9

180

45,6

9,6

120

49,0

26,6

11,7

9,6

26,6

34,1

9,3

9,6

100

Корректор В. Гирняк

Редактор П.Горькова

Техред Т. Фанта

Заказ 1667/1 Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб ., д. 4/5

И Ф1

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Условия обработки сгущенной дрожжевой суспензия

Таким образом, описанный способ получения липидов обеспечивает уве личение в 1,5-2 раза содержания в липидах фосфолипидной фракции.