Способ получения иммуностимулятора из тимуса
Способ получения иммуностимулятора из тимуса, включающий очистку сырья, измельчение с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности и выхода целевого продукта, после очистки сырья его замораживают и измельченное сырье экстрагируют 5 - 6 объемами 3%-ного раствора уксусной кислоты, содержащего хлористый цинк при соотношении хлористого цинка и уксусной кислоты 1 : 1000 в течение 48 - 72 ч, затем отделяют недостаточную жидкость и выделяют целевой продукт осаждением пятью объемами ацетона при t = (-3) - (-5)oC, полученный осадок экстрагируют водой при pH = 6-7 и комнатной температуре в течение 1 - 3 ч.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в медицинской промышленности. Известен способ получения иммуностимулятора тимозина из тимуса крупного рогатого скота, заключающийся в гомогенизации тимуса в физиологическом растворе, отделении осадка, выделении сырца препарата из раствора и его очистке с применением ионообменной хроматографии, гельфильтрации на сефадексе G 50 и препаративного электрофореза в полиакриламидном геле [1] Недостатками этого способа являются низкие выход и биологическая активность получаемого препарата, кроме того, способ длительный и трудоемкий. Целью изобретения является увеличение активности и выхода целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что в способе получения иммуностимулятора из тимуса, включающем очистку сырья, его измельчение с последующим выделением целевого продукта, после очистки сырья его замораживают и измельченное сырье экстрагируют 5-6 объемами 3%-ного раствора уксусной кислоты, содержащего хлористый цинк при соотношении хлористого цинка и уксусной кислоты 1: 1000, в течение 48-72 ч, затем отделяют надосадочную жидкость и выделяют целевой продукт осаждением 5 объемами ацетона при (-3)-(-5)oС, полученный осадок экстрагируют водой при рН 6,0-7,0 и комнатной температуре в течение 1-3 ч. Пример 1. Проводят подготовку сырья. Тимус телят или молодняка рогатого скота очищают от жировой ткани, удаляют кровь и загрязнения, укладывают на противни и замораживают при температуре -50oC, затем перед переработкой берут 1 кг тимуса, измельчают на волчке с диаметром отверстий решетки 2 мм. Переработку сырья производят следующим образом. Измельченное сырье загружают в реактор с охлаждением и мешалкой в раствор 3%-ной уксусной кислоты (1 ч. сырья и 6 ч. раствора кислоты). К раствору добавляют хлористый цинк из расчета 1 г ZnCl на 1 л уксусной кислоты. Экстракцию проводят в течение 60 ч с перемешиванием по часу 3 раза в день. После окончания экстракции субстрат центрифугируют в течение 20 мин со скоростью 3000 об/мин. Прозрачную надосадочную жидкость декантируют и к ней добавляют ацетон, охлажденный до -4oC, в соотношении 1:5 (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона) и перемешивают. Формирование осадка 20 ч при -4oC. Высушенный осадок ( 0,05 кг) измельчают и растворяют в дистиллированной воде при 20oC из расчета 20 г порошка в 1 л воды (2%) при рН 6,0. Водную экстракцию проводят 2 ч при непрерывном перемешивании и при комнатной температуре. Удаляют балластные вещества путем фильтрации. В отфильтрованный прозрачный слегка желтоватый раствор добавляют уксусной кислоты до рН 4,0. В раствор добавляют гликокол (на 1 г порошка 3 г гликокола), стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы и лиофилизируют, получают в каждом флаконе 10 мг лиофилизированного порошка белого цвета. Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,01 кг. Пример 2. Проводят подготовку сырья: очищают тимус молодняка крупного рогатого скота, укладывают на противни и замораживают при -5oC. Берут 10 кг замороженного сырья и измельчают на волчке. Измельченное сырье экстрагируют в 60 л 3%-ного раствора уксусной кислоты (в соотношении 1: 6). К раствору добавляют хлористый цинк ( 1 г на 1 л уксусной кислоты). Экстракцию проводят 48 ч с перемешиванием 3 раза по часу в день. После окончания экстракции субстрат центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин. Надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон с температурой -5oC в соотношении 1:5 (1 ч. элюата и 5 ч. ацетона) и перемешивают. Формование осадка 24 ч при -4oC. Высушенный осадок( 0,5 кг) измельчают и растворяют в воде при рН 7,0. Водную экстракцию проводят в течение 3 с при непрерывном перемешивании. Удаляют балластные вещества путем фильтрования. В отфильтрованный раствор добавляют уксусной кислоты до рН 5,0 и стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы и лиофилизируют. Получают в каждом флаконе 10 мг лиофилизированного порошка белого цвета. Выход активного вещества составляет 0,1 кг. В табл. 1 и 2 представлены качественные характеристики получаемого препарата в сравнении с известным. Выход конечного продукта в сравнении с прототипом (тимозином): из 1000 г тимуса получают 3 г иммуностимулятора или 0,3% из 1000 г тимуса по технологии прототипа получают 0,6 г тимозина или 0,06% Таким образом, по предложенному способу выход иммуностимулятора в 5 раз больше, чем выход тимозина (прототип), активность полученного иммуностимулятора также выше приблизительно в 1,5 раза.
Формула изобретения
Способ получения иммуностимулятора из тимуса, включающий очистку сырья, измельчение с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности и выхода целевого продукта, после очистки сырья его замораживают и измельченное сырье экстрагируют 5 6 объемами 3%-ного раствора уксусной кислоты, содержащего хлористый цинк при соотношении хлористого цинка и уксусной кислоты 1 1000 в течение 48 72 ч, затем отделяют недостаточную жидкость и выделяют целевой продукт осаждением пятью объемами ацетона при t (-3) (-5)oC, полученный осадок экстрагируют водой при pH 6-7 и комнатной температуре в течение 1 3 ч.РИСУНКИ
Рисунок 1MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Номер и год публикации бюллетеня: 30-2002
Извещение опубликовано: 27.10.2002
