Способ определения повреждений криоконсервированных клеток крови

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВРЕВДЕНИЙ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ КЛЕТОК КРОВИ путем взятия пробы и расчета сохранности клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, забор пробы осуществляют последовательно по мере размораживания в различных зонах по направлению от периферии к центру.

А СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (l9) () 1) OllHCAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ

М АВТОРСКОМ .Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ ннону

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

llO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3589929/28-13 (22) 16.05.83 (46) 15.06.8Я.Бюл. У 22 (72) В.М.Куракса (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (53) 615.475(088.8) (56) Рождественская М.Л. Определение гемоглобина в плазме консервированной крови. — Актуальные вопросы переливания крови, 1955, Ф 4, с.5557.

4(gg) G 01 N 33/49; А 01 N 1/02 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОВРЕл(ДЕНИЙ КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ КЛЕТОК КРОВИ путем взятия пробы и расчета сохранности клеток, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повькения точности определения, забор пробы осуществляют последовательно по мере размораживания в различных зонах по направлению от периферии к центру.

1161880

Изобретение относится к криобиологии и может быть использовано при низкотемпературном консервировании клеточных суспензий.

Целью изобретения является повы- 5 шение точности определения.

На чертеже изображена схема выполнения предложенного способа.

В стандартный металлический герметичный контейнер 1 после его запол нения суспензией клеток через специальные герметичные вводы 2, располо-. женные вдоль продольной оси контейнера, симметрично его центру, в выбранные зоны контейнера вводят иглы 15

3 заборного устройства. После этого суспензию замораживают. При отогреве замороженной суспензии в полости мерной бюретки 4 заборного устройства создается пониженное давление. B 20 тот момент, когда суспензия на уровне конца заборной иглы 3 переходит из твердого состояния в жидкое за счет разности давлений в контейнере и бюретке, происходит ее всасывание 25 в полость бюретки. Объем взятой пробы контролируют визуально.

После набора необходимого количества размороженной суспензии из соответствующей зоны контейнера дав- Зп ление в мерной бюретке устанавливается равным атмосферному. После взятия проб из выбранных зон объема клеточной суспензии берут общую пробу после полного размораживания всего объе-З ма. Пробы анализируют и определяют повреждения клеток в каждой из зон и во всем объеме.

Всю процедуру повторяют несколько раз до установления с уровнем досто- gg верности не ниже 0,9 факта наличия или отсутствия различий в повреждении клеток в пробах, полученных из различных зон контейнера и всего размороженного объема в целом., а

Пример 1. Металлический контейнер 1 объемом 150 мл и расстоянием между стенками 6 мм заполнили эритромассой и через герметичные вводы 2 на расстоянии 50 мм друг от дру-ур га вдоль продольной оси "-симметрично центру на глубину 1 и 2 мм ввели иглы 3 заборного устройства диаметром 0,3 мм и длиной 25 мм, после чего суспензию заморозили погружением контейнера в жидкий азот. На этапе отогрева контейнер погрузили в водяную баню с температурой +42 С, контейнер при этом непрерывно покачивали для обеспечения перемешивания размороженной эритромассы.

После открытия кранов 5 и 6 заборного устройства полость мерной бюретки 4 сообщалась с разреженным объемом, давление в котором было на уровне 0,8 атм. В тот момент, когда на уровне конца заборной иглы 3 замороженная суспензия эритроцитов перешла из твердого состояния в жидкое, через иглу 3 эа счет разности давлений произошло всасывание размороженной суспензии эритроцитов. После набора

1 мл размороженной суспензии из соответствующих зон (с глубины 1 мм и

2 мм) краном 5 перекрыли доступ суспензии в бюретку 4, а краном 6 выравнили давление в бюретке 4 с атмосферным. Разрежение в 0,2 атм не приводило к дополнительному повреждению клеток.

После размораживания всего объема суспензии осуществили набор третьей пробы из всего объема контейнера.

Всего было 6 повторностей.

Повреждение клеток суспензии эритроцитов определяли по количеству свободного гемоглобина в надосадке проб. Средние данные четырех опытов приведены в таблице.

Пример 2. Повреждения эритроцитов определяли в разных зонах контейнера объемом 300 мм (9 опытов).

Способ осуществляли аналогично примеру 1.Полученные данные приведены в таблице.

Содержание свободного гемоглобина в пробах из различных зон контейнера и из объема вцелом приведено в таблице.

Для контейнера объемом 150 мл полученные средние величины уровня свободного гемоглобина в надосадке проб, 1 полученных иэ первой зоны, второй зоны и из контейнера вцелом, достоверно отличаются между собой с уровнем значимости не ниже 0,9. Из таблицы видно, что в контейнере объемом

150 мл гемолиз эритроцитов вначале растет от 85 мгХ вблизи стенки в первой зоне до 1147 во второй зоне, а затем резко падает, так как если бы повреждения эритроцитов на глубине более 2 мм оставались на уровне

114 мгЖ или возрастали, общий гемолиз в контейнере не мог умЬньшиться.1161880 до 49 мгХ. Так как после глубины

2 мм произошло значительное падение гемолиза, то в центральной зоне контейнера должна располагаться область, в которой гемолиэ эритроцитов мини- 5 мален или близок к нулю.

Для контейнера объемом 300 мл полученные средние значения гемолиэа эритроцитов в первой зоне на глубине

1 мм достоверно отличаются от гемоли- 10 за во второй зоне, и средние значения гемолиэа во второй зоне — от значений гемолиза в контейнере вцелом.

Во всех случаях уровень значимости

0,9. При имеющемся разбросе отличия 15 в показателях гемолиза в первой зоне и контейнере вцелом незначнмы. Это говорит о том, что в контейнере объемом 300 мл показатель гемолиза во всем объеме находится на уровне 20 гемолиза в первой зоне, несмотря на то что во второй зоне гемолиз эриУ троцитов заметно вьппе. Эти данные свидетельствуют о том, что в контейнере объемом 300 мл гемолиз также 2$ растет по направлению от стенки контейнера к центру от 100 до 188 мгй, Ъ а затем за счет минимального гемолиэа в третьей зоне возвращается в контейнер вцелом к показателям гемо- За лиза, имеющим место вблизи стенки.

V=150 мл

ЧЗОО мл

53

109 65

114

72 !88 94

В полностью размороженном объеме 49

22 123 59

Заказ 3965/47 Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная, 4

Составитель Н.Земляк

Редактор М.Бандура Техред О.Ващишина Корректор С.Шекмар