Способ получения биомассы с днк-лигазной активностью

Авторы патента:

C12N9 - Ферменты, например лигазы (6.); проферменты; композиции их (препараты для чистки зубов, содержащие ферменты A61K 7/28; лекарственные препараты, содержащие ферменты или проферменты A61K 38/43; составы моющих средств, содержащих ферменты C11D); способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов (приготовление солода C12C 1/00)

(19)SU(11)1179659(13)A1(51) МПК ⁵ _C12N9/00(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯк авторскому свидетельствуСтатус: по данным на 17.01.2013 - прекратил действиеПошлина:

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ С ДНК-ЛИГАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к способам получения биомассы с активностью ДНК-лигазы (полинуклеотидлигазы, КФ.6.5.1.1). Целью изобретения является увеличение биосинтеза ДНК-лигазы за счет предотвращения эмминации гибридной плазмиды у дочерних клеток. Приготовление посевного материала. Исходную культуру E. coli ВКМ В-1449Д пересеивают в чашку Петри с селективным фактором (ампициллин 30 мкг/мл) и выращивают при 30^оС в течение 18 ч. Культуру из чашки Петри пересеивают в пробирку с 10 мл мясо-пептонного бульона и выращивают на качалке при 30^оС в течение 4 ч. Полученной культурой засеивают колбы, содержащие 350 мл среды следующего состава, г/л: Дрожжевой автолизат, мл/л 10 Глюкоза 5,0 MgCl₂ 5,0 KH₂PO₄ 4,5 Na₂HPO₄ 23,0 (NH₄)₂ SO₄ 8,0 Пептон 20,0 р-р микроэлементов, мл/л 10
рН среды 6,7-6,9. Выращивание инокулята проводят в колбах на качалке 180-200 об/мин при 30^оС в течение 12 ч. Ферментация культуры производится после добавления инокулята из расчета 20 мл инокулята на 1 л питательной среды следующего состава, г/л: Дрожжевой автолизат, мл/л 3,0 Глюкоза 1,0 MgCl₂ 1,0 KH₂PO₄ 3,0 Na₂HPO₄ 16,0 (NH₄)₂SO₄ 3,0 Пептон 10,0 р-р микроэлементов, мл/л 5,0
Ферментацию проводят при 40^оС при перемешивании и аэрации, обеспечивающей концентрацию растворенного кислорода в среде рО₂ 30-40% в течение начальных 2 ч и рО₂ 50-60% до окончания ферментации, рН поддерживают в пределах 6,9-7,1 10% -ным раствором NaOH. Процесс заканчивают в конце экспоненциальной фазы роста. Выход биомассы 4 г/л, активность ДНК-лигазы 50000 ед/г биомассы 2 10⁵ ед/л культуральной жидкости.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ С ДНК-ЛИГАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ путем культивирования клеток штамма E.coli с гибридной плазмидой, содержащей ген ДНК-лигазы в условиях аэрации, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода ДНК-лигазы, питательная среда содержит однозамещенный фосфорнокислый калий в концентрации 3 - 4,5 г/л и двузамещенный фосфорнокислый натрий в концентрации 16 - 23 г/л при рН 6,9 - 7,1, а концентрацию растворенного кислорода при аэрации создают 20 - 40% от насыщения воздухом в начальный период культивирования и 40 - 60% в конечной стадии культивирования.

Способ выделения моноаминоксидазы // 1165714

Способ получения рибозо-5-фосфат изомеразы из листьев шпината // 1165713

Штамм @ @ 2-82-продуцент пектат-лиазы // 1161551

Способ получения нуклеазы @ // 1161550

Штамм микроскопического гриба @ @ 35219-продуцент фенолаз // 1161549

Штамм микроскопического гриба @ @ - @ - @ -продуцент ксиланазы для поверхностного культивирования // 1159953

Питательная среда для выращивания @ @ @ -38-продуцента эзко- @ - @ -ацетилглюкозаминидазы // 1159951

Штамм микроскопического гриба @ @ нрв-169- продуцент @ - амилазы // 1158579

Способ получения протеолитического фермента // 1157057

Способ выделения и очистки ферментного комплекса из культивируемых растительных клеток // 2102478

Последовательность днк, белок и способ получения белка // 2103364

Изобретение относится к цефалоспоринацетилгидролазному гену, белку, содержащему аминокислотную последовательность, кодируемую указанным геном и представляющему собой мультимер, предпочтительно тетрамер или октамер, а также к методу получения указанного белка

Полипептид, обладающий уратоксидазной активностью, фрагмент днк, обеспечивающий экспрессию полипептида с уратоксидазной активностью (варианты), вектор экспрессии, содержащий фрагмент днк, обеспечивающий экспрессию полипептида с уратоксидазной активностью (варианты), штамм, экспрессирующий полипептид, обладающий уратоксидазной активностью (варианты), способ получения полипептида, обладающего уратоксидазной активностью // 2105812

Фрагмент днк, кодирующий полипептид к2р со свойствами активатора плазминогена, полипептид к2р со свойствами активатора плазминогена, рекомбинантная плазмидная днк ра27.3, кодирующая полипептид к2р со свойствами активатора плазминогена и фармацевтическая композиция, обладающая фибринолитической активностью // 2107094

Рекомбинантный тканевой активатор плазминогена и способ его получения // 2107727

Изобретение относится к получению тканевого активатора плазминогена (усовершенствованный АПТ), имеющего пролонгированный биологический полупериод существования, повышенную устойчивость к воздействию тепла и кислот и эффективный в качестве ингибитора воспаления вокруг сайта, где образован тромб

Негликозилированный полипептид со свойствами проурокиназы, способ его получения, рекомбинантная плазмидная днк для экспрессии полипептида и способ ее получения // 2108387

Изобретение относится к биотехнологии и позволяет получить полипептиды, используемые в качестве плазминогенных активаторов, имеющие высокую удельную амидолитическую и фибринолитическую активность

Способ получения биомассы // 2111253

Способ получения коллагеназы // 2112036

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к препаративной биохимии, и может быть использовано в клеточной биологии, медицинской практике для лечения ожогов, остеомиелитов, пролежней и удаления рубцов коллагена в косметических целях, косметической и парфюмерной промышленности при изготовлении кремов и мазей для омолаживания кожи, в пищевой промышленности для обработки мяса с целью улучшения его качества и питательных свойств, кожевенно-меховом производстве для получения эластичных, тонких и прочных материалов, а также в научно-исследовательской работе для изучения микроструктуры коллагена, при работе с клеточными структурами, а также с различными тканями и органами для индивидуальных интактных клеток

Способ получения белкового гидролизата из мясного и мясокостного сырья убойных животных // 2112397

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения белковых гидролизатов из мясного, мясокостного, костного сырья убойных животных, и может быть использовано в пищевой и медицинской промышленности

Способ активации комплекса протеолитических ферментов поджелудочной железы убойных животных // 2112801

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для получения белковых гидролизатов