Цис-дихлор-транс-дигидроксибис(изопропиламин)платина(1v), проявляющая противоопухолевую активность

Авторы патента:

A61K31/28 - соединения, содержащие тяжелые металлы

Цис-дахлор-транс-дигидрокси-бйс (изопропиламин) платина (tY) форму С )Н хКНгСН(сНз)2 NH2.CR(CH3)2 он. проявляющая противоопухолевую активность . §

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (! 9) (I I) (86) РСТ/GB 81/00177 (03.09.81) (21) 3495252/23-04 (62) 3434800/23-04 (22) 20.09.82 (23) 03.05.82 (31) 8028484 (32) 03.09.80 (33) GB (46) 30.10.85. Бюп. У 40 (71) Дконсон Иаттей Паблик

Лимитед Компани (GB) (72) Поль Цедрид Хайда и Дерек

Рональд Хепберн (СВ) (53) 547.259.2 (088.8) (56) Патент Великобритании

У 1578323, кл. С 2 С, 1977. (SI)4 С 07 F 15/О А 61 К 31/28 (54) ЦИС-ДИХЛОР-ТРАНС-ДИГИДРОКСИБИС (ИЗОПРОПИЛАМИН) ПЛАТИНА (Р ), ПРОЯВЛЯЮЩАЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ. (57) Цис-дихлор-транс-дигидрокси«бкс (изопропиламин) платина (IV) форму0Н

С1 1,ЛН СН(СН )х

Pt С1 I 1ЧН СН.(СН3) 2

OH проявляющая противоопухолевую активность.

1188179

Изобретение относится к новому соединению, а именно цис-дихлортранс-дигидрокси-бис(изопропиламин) платине (Я ), проявляющей противоопухолевую активность, и которая может найти применение в качестве противоракового препарата.

Цель изобретения вЂ” изыскание новых эффективных противоопухолевых препаратов, не оказывающих опасных побочных явлений на человеческий организм по сравнению с известными.

А. Получение сырого продукта.

Перекристаллизованный цис-Pt(i=

= С Н И Н ) С1 (26,8 ч) суспендировЂ” вали в 50 мл горячей воды и к полученной суспензии прибавили при перемешивании 100 мл (100 объемов) перекиси.водорода. Реакционный шламм кипятили в течение 0,5 w до тех пор, пока ои не стал желтым по цвету, после чего смесь охладили и профильтровали. Остаток на фильтре промыли сначала водой, затем диэтиловым эфиром и после этого сушили на воздухе. Выход воздушного продукта составил 10,5 г (35 от теоретического).

Данные элементного анализа полученного продукта:

Вычислено, : С 16,55; Н 4,87;

N 6,43, 0 11,03, С1 16,28.

Найдено,X: С 16,59; Н 4,90;

N 6,48 ; 0 10,80; С1 16,20.

В ИК-спектре продукта присутствует полоса поглощения гидроксильной группы (валентных колебаний связи 0-Н) в области 3515 см

Б. Получение продукта с диметилацетамид м и выделение практически чистого продукта.

Сырой продукт (11 r), полученный как описано вьппе, растворили в NNдиметилацетамиде (приблизительно в

1 л) и полученный раствор профильт ровали через стеклянный пористый фильтр, имеющий пористость и 4, для удаления любых нерастворившихся примесей. Затем раствор охладили до 5 С в течение 2 ч, внесли затраво ку для предотвращения перенасьпцения т. е. для предотвращения образования пересыщенного раствора, и оставили на несколько дней нри температуl ь ре -10 С.

Образовавшийся за это время кристаллический осадок отфильтровали, 5

55 промыли диэтиловым эфиром и сушили до постоянного веса.

Удаление N N-диметилацетамида с целью получения практически чистого целевого продукта проводили путем нагревания полученных кристаллов до о

50 С или ниже при остаточном давлении 0 1 мм рт.ст. в течение нескольких дней или до тех пор, пока термогравиметрический анализ продукта и/или анализ методом газожидкостной хроматографии не показывал отсутствие в нем .следов N N-диметилацетамида.

Стадию растворения сырого продукта, полученного на предыдущей стадии

А, в диметилацетамиде можно проводить при обычной комнатной температуре, но предпочитают использовать для этого слегка повышенную температуру, т.е. о температуру не выше примерно 40 С, Другие стадии очистки, применяемые факультативно, т.е. необязательно и не всегда, включают перекристаллизацию сырого продукта (полученногo на описанной стадии А) из разбавленного раствора перекиси водорода с последующим высушиванием полученного перекристаллизованного продукта в вакууме при температуре приблизио тельно 50 С и дополнительное фильтрование раствора продукта в N N-диметилацетамиде (см. стадию Б) через слой силикагеля (с размером частиц

70-230 меш) с целью удаления любых примесей полигидроксильных производных платины. Противоопухолевая активность CHIP (целевой продукт) впервые была исследована по отношению к опухоли клеток плазмы АДТ/РС6А на мышах разновидности BaLb д-ром Коннорсом, который установил терапевтический индекс (1Д /1Д 12), что явно лучше терапевтического индекса родственного цис-платина (цис-диамин-дихлор-платина (П ). Далее было обнаружено, что CHIP обладает активностью против 11210, Р388, В16 меланом, легочной карциномы Льюиса, опухолей толстой кишки мышей (26 и 28), причем во всех случаях ILS > 100 (табл. 1). Этот препарат является кроссрезисстным с цисплатином относительно L 1210, но обладает активностью против L 1210, устойчивой к действию ВСИУ и циклофосфамида.

Исследование на животных.

1188179

Было проведено предклиническое исследование. После применения дозы 10 мг/кг значение Т 1/2 для крыс составляет 14 ч для СН?Р по сравнению со значением 69 ч для циспла- 5 тина. Для собак Т 1/2 имело значение 39 ч. У крыс 44Х такой дозы было экскретировано с мочей, причем это количество увеличивалось до

587 на 26 ч. Аналогичное экскретиро- 10 ванне наблюдалось у собак вЂ” 457. (3 ч) и S7% (24 ч). Через 3 ч после примекения лекарство в моче находилось полностью в форме метаболитов, которые не были идентифицированы. 15

Уровни содержания платины в почках для CHIP и цисплатина указаны в табл. 2.

Уровни содержания в системе тканьплазма для CHIP представлены в 20 табл. 3 ..

Фармакинетика CHIP у крыс была изучена с использованием платиновой метки, испускающей гамма-частицы.

В сравнении с цисплатином и цистранс-дихлор-дигидроксибис(циклопропиламин)платиной П (СР), после Й применений CHIP, уровни содержаний платины в крови и большей части тканей резко уменьшались, однако оста- 50 точная метка сохранялась в течение длительного времени. Повышенное поглощение почками и селезенкой в течение 14 дней предполагает, что имеет место вторая волна от других тка35 ней (табл. 4) . Такое повышенное удерживание радиационно-меченной

CHIP в сравнении с цисплатином и СР может подразумевать, что СНЕР обладает большим потенциалом в отношении кумулятивной токсичности.

Исследование на людях.

Данные, полученные в результате исследования в фазе 1 по изучению периода полувыведения всей платины, 45 фильтруемой платины и неизмененного лекарства совместно с исследованием образцов мочи, суммированы в табл.5.

Было проведено на небольшой группе пациентов исследование фармаки50 нетики цисплатина и CHIP, меченного !

Pt . Сравнительные данные, полученные при изучении образцов крови и мочи, представлены в табл. 6 и 7.

Токсичность при испытании на 55 животных.

Предклиническое токсикологическое исследование CHIP проводили на четырех разновидностях животныхвЂ” мышах, крысах, собаках и обезьянах.

Обычно наблюдалась сравнимая токсичность, которая зависела от применяемой дозы и была обратимой при нелетательных дозах, ЗначеННН LDg(, для нескольких маршру тов и режимов применения на четырех указанных разновидностях животных приведены в таблице 8

Наиболее чувствительной разновидностью животных оказались собаки.

Указаниями на токсичность служили понос, часто с кровью, рвота, потеря аппетита, потеря веса, выпадение волос и шерсти. На всех разновидностях животных наблюдалось подавление деятельности спинного мозга и атрофия ткани, причем общим симптомом служила лейкопения, воздействующая на лимфоциты, так и на нейтрофилы.

При высоких дозировках у крыс и собак наблюдались патологические изменения в почках (нефроз), причем аналогичные симптомы наблюдались у одной обезьяны (на которой применяли единичную летальную дозу, равную

480 мг/м ). Биохимические изменения, . о которых можно было судить по гепатитной и ренальной токсичности, наблюдались у больных собак и одной обезьяны, однако соответствующие патологические изменения наблкдались не всегда. Хотя на мышах и крысах лекарство проявляло меньшую кумулятивную токсичность при повторных применениях, на собаках кумулятивный летальный эффект наблюдался в течение 5-10 дней, однако он отсутствовал, если препарат применяли в течение 20 дней. При испытании на пяти обезьянах единичных дозировок

IItстепени, имеющих значения 240, 360, 480 и 480 мг/м, летальными дозировками оказались лишь наивысшие значения на одном из двух животных, и в отличие от переходных гематологических изменений, лишь на одной обезьяне наблюдались клинические или патоло -ические изменения, касающиеся токсичности. У этого животного наблкдалась потеря аппетита, полидипсия, гипотермия и кровавый понос. Наблюдалось выпадение волос и потеря веса. Смерть наступала на 7-й день и имели место

1188179

Продолжение табл.2 патологические изменения, вызванные резкой токсичностью по отношению к костному мозгу, почкам, селезенке, тимусу и желудочно-кишечному тракту.

Цисплатин

Время

CHIP

Таблица 1

Противоопухолевая активность CHIP

10 мг/кг 2 5 мг/кг

/мг/г Pt/ /мг/г Pt/

10 мг/кг

/мг/г Pt/

10 24 (2-й день) 41, 2

Опухоль

6,8

24,9

17,9

Р388 ежедневно, 9 раз по 54 мг/ м /день ILS

5,5

202

4,0 12,5

149

П.S

127

П.S

Ткань зо

Уровни содержания в плазме почек Почки после применения CHIP, цисплатина (крысы) 5,74

3,70

Печень

0,67

CHIP

Цисплатин

Время

0,39

Легкие

О мг/кг 2,5 мг/кг 10 мг/кг мг/г Pt/ /мг/г Pt/ /мг/г Pt/

0,26

0,15

42,8

41,7

О, 15

Семенник

35,9

7,8

0,04

45 Мозг

36,5

11210, ежедневно, по 5 раз

ЬО мг/м /день

Легочная карцинома

Льюиса, ежедневно по 5 раз

18,75 мг/м /день

Противоопухолевая активность (оптимальная),7

72 (3-й день)

96 (4-й день) 36, 7

168 (7-й день)

336 (14-й день) 2„2 5,6

Таблица 3

Относительное содержание платины в плазме тканей после применения CHIP (10 мг/кг tV ) на крысах

Сердце

Мускулы

11881 79

Таблица4

Распределение радиционно-меченного цисплатина и CHIP в тканях самцов крыс (Wistar) после применения дозы

10 mcus. (выражено, как применяемая доза в расчете на 1 r ткани «10 ) Время

Кровь

Почки

Циспла- CHIP Циспла- CHIP тин тин

208

179

8 184

48 (2-й день) 29

5 186

72 (3-й день) 20

5 147

50.

336 (14-й день) 3!

7 21

456 (19-й день) 48

Таблица 5

Исследование в лаборатории Розвелл Парк (фаза 1) исследование периода полувыделения из плазмы общей платины, фильтруемой платины и неизменногО лекарства, и Ж содержания в моче

Доза мг/м2

Фильтруемая Неизмен- Содержание в моче, платина ное ле- Х

Общая платина

Т 1/2, ч Т 1/2, ч

24 ч 47 ч карство

77. 0

45,5

0,7

45,5

1,7

0,5

42,0