Способ определения липопротеидов

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„1203434 А (51) 4 С) !i I Х 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АBTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ гоГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3769!88/28-14 (22) 25.07.84 (46) 07.01.86. Бк).(. ¹ 1 (71) 2-й Московский ордена . Iенина сударственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова (72) О. М. Панасенко и О. A. Азизова (53) 616.! 53.915 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 877437, кгп С(01 . ; 33/92, 1981. (54 ) (57) С!10(.01) О1!Р1.:.I E, 1 1: Н11Я, 11(I1()11ÐÎTÅ1I,jOH путем вы.!еления (1)р((кц и липопротеидов из оиог)огическо!1 жи (кос-, и с после !уfoflf(ооработко(! ик . (и(!и (вски)i

Р(H I (. 11 I О () И КО,. И Н(. (. TH(H11011 OIL(. и КОИ, Оi— .1НЧ(11()П(!(!!(!f T(. )1, И Т(), (. ЦЕГ1 К) БОБЫ III(l!111! и f((:TI)ff f (, IhHo(Tff H X ff))olll(. ifffH сilo(o() fi, к(1 i(. (. т Б(. р(. а ГеHT;l и спог1ьз) к)т 2,2,4,-(- T(ГI);Iмети.1-1.2),3,4-тетра гидро-5,6-бе нзок а р(и)г! и, !—

-3-оксида в концентрации 10 — 5.10 4 М, а

l;o,)!HERñ ство, f l(1 !off))oT(If foB оц li HB(l l()T !i() (. и(кт()(з,l(к) !)ОнноГo пар(lмf)ГH11Tliof (I)(.

Зн il;111(. !1.

1203434

Классы 111

Б, х:l, мл, I I IOH Гl

ЛПНП

ЛПВП подфрыкции: ЛПВП .1ПВП,) 20,70+- 0,10

12,50 — 0,10

8,62 — 0,05

10,50 +-0,05

Составитель Н. 1 уляева

Техред И. Верее Корректор М. 11ожс

Тираж 896 !1одннснос

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 415

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор В. Иванова

Заказ 84! О!47

Изобретение относится к биологии и медицине. а именно к способам количественногоо опреде.)ения липопротеидов (Л П ) в биологических жидкостях.

Цель изобретения -- повышение чувствительности и упрощение способа.

Пример: 1. Из плазмы свежей донорской крови после осаждения клеточных элементов получактг ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП),, IП низкОЙ пзотности (ЛИНГ!) и ill высокой плотности („ill IBII) и ЛПВПз) методом носледоватеlbl(oi"о ультрацентрифугирОВаниГ1. К 30 мл подученной сусГ!ензии ЛП каждого класса добавляют 0,3 мкл спиртового растворы нитроксильного зонда

2,2,4,4-тетра метил-1,2,3,4-тетра гидро-5,6-бензокарболин-3-оксила (ТЬКО) концентрации

10 - М (до конечной концентрации в образце 10 Ч). Полученные образцы помешают в резонатор 31!Р-спектрометра и регистрирук)т спектры )Г!Р, по которым рассчитывают отношение амплитуд kkkkBKokkocküныx компоk1еHT сигналов Л и Б (171/h ) в качестве параметра, характеризук)1цего распределенис ТБКО между ЛП и водной фазой, т. е. степень связывания .Гонда < ЛП.

Г(оскольку степень связывания ТБКО с "Ill зависит от cÎдс ржания последних в образце и увеличивается с увеличением их концентрации (hk/ll)) растет линейно с увеличением концентрации ЛП, то парамстр

h,7h, ) может быть использован для определения концентрации ЛП в препарате. Для

ЛПОНГ1 )71/11 =0,072 мг/мл; для ЛПНП-0,220; .Гля „IIIBII) — 0,110 и для ЛГIВГI,â€”вЂ”

0,231. Определяют концснтрацию III по форт()Л1Е

С= Б.(hl/h)), г1е С вЂ” количество III, мг, мл;

h1 и )7 -- интеllcHBHocTH низкополевь1. компонс HT cH! на 18 311Ð ТБКО, связанного и несвязанного с ЛП соответственно (фиг. 1);

Б — коэффициент про1:орцио11альнос k kk, значения к010I)ok 0 для рыз.lичных к.ldccOB . 1П приведены в таблице.

Ори,иер р. K свежевыделенным, как i êà20 зыно в примере 1, . II!HI I добавляк)т 0,05 мкл сч1иртовогo раствора ТЬКО до ксп)ечной концснтрации 10 М. Регистрирую- спектр

ЗГ!Р полученного образца, рассчитывак)т параметр hl())з. Он равен 0,255. По форму Ic определяkoT концентрацию ЛПНП. В данном случае она равна 3,19 мг)мл. !

7рил)ер 3. К свежевыделенным, как указано в примере l, ЛПВП1 добавляют

0,5 мкл спиртового раствора ТБКО до конечной концентрации 10 М. Регистрируют спектр ЭПР полученногo образца, рыссчитывают значение параметра hl/hq. Оно равно

0,210 По формуле, указанной выше, определяют концентрацию ЛПБПЗ, которая равна 2,205 мг, мл.