Способ определения полифенольных соединений

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3313755/28-14 (22) 08.07.81 (46) 07.03.86. Бюл. № 9 (71) Иркутский государственный медицинский институт (72) Г. М. Федосеева (53) 615.32 (088.8) (56) Соболевская К. А. Полезные растения флоры Сибири, — Новосибирск: Наука, 1967, с. 276 — 277. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ путем извлечения их из растительного сырья с пос„„Я0„„1215708 A (5в 4 А 61 К 35/78 ледующим фотометрическим определением суммы флавоноидов, отличающийся тем, что с целью упрощения способа, извлечение проводят 48 — 52%-ным этанолом, сумму полифенольных соединений определяют перманганатометрическим титрованием, затем осаждают дубильные вещества, определяют в фильтрате сумму флавоноидов и фенолкарбоновых кислот, а содержание дубильных веществ определяют по разности между суммой полифенольных соединений и суммой флавоноидов и фенолкарбоновых кисл от.

1215708

Изобретение относится к фармакологии, а именно к способам определения полифенольных соединений.

Цель изобретения — — упрощение способа.

Пример 1. К 2 г воздушно-сухого сырья лапчатки кустарниковой добавляют 50 мл

50 /р-ного этанола при нагревании на водяной бане в течение 30 мин, извлечение ведут до истощения сырья, контролируя полноту извлечения. Полученные вытяжки после объединения и отгонки спирта сгущают, фильтруют, очищают хлороформом от пигментов и смол. В экстракте, разбавленном

50 /р-ным этанолом до 250 мл, определяют сумму полифенолов перманганатометрическим методом. Для этого к 10 мл извлечения приливают 25 мл индигокармина, 750 мл дистиллированной воды и титрук)т

0,1 н. раствором перманганата калия до соломенно-желтого цвета. В контролируемую пробу вместо извлечения добавляют 10 мл

50Р/р-ного этанола, расчет ведут по формуле: га->) - К р с-юо х 7 кч где х — количество полифенольных соединений, p/p, а — количество 0,1 н. раствора KNn04, пошедшего на титрование, мл;

Ь вЂ” количество 0,1 н. раствора КМпО, пошедшего иа контрольный опыт. мл;

К вЂ” поправка на титр по шавелевой кислоте;

D — коэффициент пересчета на танин, равный 0,0058;

С вЂ” общий вес экстракта;

Н вЂ” навеска, г;

V — количество экстракта, взятое для титрования, мл.

Затем дубильные вещества в извлечении осаждают добавлением 5Р/р-ного желатина, отстаивают извлечение с осадком при 3-4 С в течение трех дней, фильтруют и определяют в фильтрате сумму флавоноидов и фенолкарбоновых кислот титрованием.

Количество дубильных веществ рассчитывают по разности между суммой полифенолов и суммой флавоноидов и фенолкарбоновых кислот. В лапчатке кустарниковой сумма полифенолов составляет 11,6Р/p, сумма дубильных веществ 6,89Р/р.

Содержание флавоноидов определяют фотоэлектроколориметрически, к 2 мл извлечения прибавляют 2 мл 2 /p-ного раствора хлористого алюминия в 50Р/р-ном этаноле, через 2 мин добавляют 2 мл 10Р/р-ного раствора ацетата натрия и через 1 мин проводят фотоэлектроколори метри рова ние с си ни м светофильтром. Калибровочный график строят по кверцетину. В данном случае сумма флавоноидов составляет 3,80 /р, фенолкарбоновых кислот 0,81 /р.

Пример 2. Из 2 г воздушно-сухого сырья лапчатки пижмолистной получают извлечение с помошью 50 /p-ного этанола при нагревании на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин. Зтанол берут в количестве 50 мл. Процесс извлечения ведут до истощения сырья. Полноту извлечения проверяют качественной реакцией на дубильные вешества (с железо-аммониевыми квасцами) и бумажно-хроматографическим методом (на флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты).

Полученные вытяжки после объединения и отгонки спирта сгущают, фильтруют и подвергают очистке с помощью хлороформа от пигментов и смол.

Очищенный экстракт разбавляют 50 /рным этанолом до метки в колбе на 250 мл и определяют количественное содержание . суммы полифенолов перманганатометрическим методом. 0 Для этого берут из колбы 10 мл извлечения, помещают его в колбу емкостью 1 л, приливают 25 мл индигокармина, 750 мл дистиллированной воды и титруют 0,1 н. раствором перманганата калия до соломенно-желтого цвета.

Параллельно ставят контрольный опыт, определяя таким образом индиго-число. Для проведения контрольного опыта вместо извлечения берут 10 мл 50Р/р-ного этанола, разбавляют его 750 мл дистиллированной воды зо и титруют 0,1 н. раствором перманганата калия в присутствии индикатора индигокармин (25 мл).

Расчет ведут по формуле (а-Ы К D C. 1оо х

35 н.V где х -- количество полифенольных соединений, р/р, а — количество 0,1 н. раствора КМпО, пошедшего на титрование, мл;

Ь вЂ” количество 0,1 н. раствора КМпО, пошедшего на контрольный опыт, мл:

К вЂ” поправка на титр по шавелевой кислоте;

D — — коэффициент пересчета на танин, 45 равный 0,00582;

С вЂ” общий объем экстракта;

Н вЂ” — навеска, г;

\l — количество экстракта, взятое для титрования, мл.

После определения суммы полифенолов

50 извлечение очищают от дубильных веществ путем осаждения их 5Р/р-ным раствором желатина. Дубильные вещества при этом выпадают в осадок. Затем извлечение с осадком отстаивают при 3 — 4 С в течение трех

55 дней, фильтруют. В полученном фильтрате определяют сумму флавоноидов и фенолкарбоновых кислот титрованием и расчеты ведут по указанной формуле.

1215708

Составитель Н. Гуляева

Техред И. Верее Корректор A. Зимокосов

Тираж 659 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам нзобретений и открытий

i!3035, Москва, Ж вЂ” 35. Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент>, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Н. Данкулич

Заказ 924/4

Количество чистых дубильных веществ определяют по разнице между всей суммой полифенолов и суммой полифенолов, освобожденных от дубильных веществ (т.е. суммой флавоноидов и фенолкарбоновых кислот). Так, если общая сумма полифенолов в лапчатке пижмолистной составляет

12,47%, сумма полифенолов после осаждения дубильных веществ 4,42%, то сумма чистых дубильных веществ составит 8,05%.

Количественное содержание флавоноидов определяют фотоэлектроколориметрическим методом в извлечении, оставшемся после исследования суммы полифенольных соединений, очищенном от дубильных веществ.

Для этого в сухую пробирку наливают

2 мл извлечения, прибавляют 2 мл 2%-ного раствора хлористого алюминия (на 50%-ном этаноле), через 2 мин добавляют 2 мл

10%-ного раствора ацетата натрия (тоже на 50%-ном этаноле). Через 1 мин определяют светопоглощение раствора с помощью фотоэлектроколори метра (ФЭК-56 м) . Измерения проводят по черной шкале при синем светофильтре в кюветах на 5 мл. В качестве контроля используют раствор, полученный смешиванием 2 мл извлечения с

4 мл 50%-ного этанола. Расчеты проводят по калибровочным графикам, построенным для флавоноидных соединений, преобладающих в сумме.

В лапчатке пижмолистной преобладает глинозид кверцитрин, поэтому расчеты проводят по графику этого соединения.

Содержание фенолкарбоновых кислот устанавливают по разнице между суммой полифенолов, очищенных от дубильных веществ, и суммой флавоноидов.

Сумма чистых дубильных веществ лапчатки пижмолистной составляет 8,05%, сумма флавоноидов 3,05%, следовательно сумма фенолкарбоновых кислот равна 1,37%.

Пример 3. Из 2 г. воздушно-сухого сырья лапчатки многонадрезанной получают извлечение с помощью 50%-ного этанола при нагревании на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин (дальнейший ход определения по примеру 1).

Общая сумма полифенолов в лапчатке многонадрезанной составляет 6,82 /о, сум5

40 ма полифенолов после осаждения дубильных веществ 3,49о/о. следовательно сумма чистых дубильных веществ составляет 3,33%.

Количественное содержание флавоноидов определяют фотоэлектроколори метрическим методом (пример 1). Расчеты проводят по калибровочным графикам, построенным для флавоноидных соединений, преобладающих в сумме. В лапчатке многонадрезанной преобладает агликон кверцетин, поэтому расчеты проводят по графику этого соединения. Содержание фенолкарбоновых кислот определяют по разнице между суммой полифенолов, очищенных от дубильных веществ, и суммой флавоноидов.

Сумма чистых дубильных веществ лапчатки многонадрезанной равна 3,33%,ñóìма флавоноидов 2,45%, следовательно сумма фенолкарбоновых кислот составляет

1,040,/в

Пример 4. Из 2 г воздушно-сухого сырья (сырьем является трава) горца перечного получают извлечение с помощью 50%-ного этанола при нагревании на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин (дальнейший ход определения по примеру 1).

Общая сумма полифенолов в траве горца перечного составляет по данным 6,97%, сумма полифенолов после осаждения дубильных веществ 2.77 /о, следовательно сумма чистых дубильных веществ равна 4,20%.

Количественное содержание флавоноидов определяют фотоэлектроколориметрическим методом (пример 1). Расчеты проводят по кзлибровочным графикам, построенным для флавоноидных соединений. преобладающих в сумме. В горце перечном преобладает флавоноидный гликозид рутин, поэтому расчеты проводят по графику этого соединения.

Содержание фенолкарбоновых кислот определяют по разнице между суммой полифенолов, очищенных от дубильных веществ и суммой флавоноидов.

Сумма чистых дубильных веществ горца перечного равна 4,20%, сумма флавоноидов 1,82о/р, следовательнс сумма фенолкарбоновых кислот составляет 0,95%.