Способ определения иммунологического статуса у больных лимфогранулематозом

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1

„„SU„„1228864 (51) 4 А 61 К 39 00 45 05, G 01 N 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К д BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3759068/28-14 (22) 04.07.84 (46) 07.05.86. Бюл. № 17 (71) Научно-исследовательский институт иммунологии (72) Е. С. Пантелеева, Г. С. Неприна, П. П. Филатов, Н. Г. Горбушин и А. А. Ярилин (53) 615.375 (088.8) (56) Иммунология, 1982, № 5, с. 48 — 51. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА У БОЛЬНЬ1Х ЛИМФОГРАНУЛЕМАТОЗОМ путем инкубирования лимфоцитов с левамизолом, проведения реакции розеткообразования с эритроцитами барана и подсчета розеткообразующих клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, осуществляют инкубирование лимфоцитов с левамизолом в концентрациях 1 пг/мл и

10 мкг/мл, подсчитывают количество розеткообразующих клеток в каждой пробе, вычисляют разность показателей второй и первой проб и при положительном значении разности определяется нарушение иммунологического статуса, а при отрицательном значении — отсутствие нарушения иммунологического статуса.

1228864

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии.

Цель изобретения — повышение точности определения иммунологического статуса больных в активной фазе заболевания.

Указанная цель достигается тем, что лимфоциты, выделенные из периферической крови пациента, разделяют на 2 пробы и инкубирует их с левамизолом в концентрации

1 пг/мл и 10 мкг/мл. Затем проводят реакцию

E-розеткообразования, подсчитывают по- p казатели в каждой пробе, вычисляют разность показателей между второй и первой пробами и при положительном значении разности определяют нарушение иммунологического статуса, а при отрицательном значении — отсутствие нарушения статуса. 15

Способ осуществляют следуюшим образом.

Из исследуемой периферической крови человека выделяют лимфоциты путем центрифугирования в градиенте плотности раствора фиколла-верографина, отмывают лимфоциты растворов Хенкса.

Выделенные лимфоциты разливают в 6 пробирок по 0,1 мл (2)(10 клеток в 1 мл).

B первую пару пробирок добавляют стандартный раствор среды 199 по 0,1 мл (контрольная проба), во вторую пару — по 0,1 мл раствора левамизола на среде 199 в концентрации С) = 1 пг/мл, а в третью — по 0,1 мл раствора левамизола на среде 199 в концентрации Сг = 10 мкг/мл. Пробы инкубируют при 36 — 37 С в течение 30 — 35 мин. После з, этого лимфоциты используют в реакции спонтанного Е-розеткообразования с эритроцитами барана при 4 С для определения числа ЕРОК. Во всех пробах с помощью светового микроскопа считают количество Е-РОК на

100 лимфоцитов, т. е. Е< ) — контроль, з

Eg ) и Егсг) — для проб с левамизолом в меньшей и большей концентрациях соответственно. Затем вычисляют разность между количеством Е-РОК, соответствующим каждой дозе левамизола, и количеством

Е-РОК контрольной пробы: 40

ЛЕ )) = E(ci) — E<„) — разность для первой дозы;

ЛЕ(г) = Е(г) — E(„) — разность для второй дозы.

После этого определяют характер приращения для разностей E-РОК при меньшей 45 и большей концентрациях левамизола по соотношению

При этом ((0, если значение разности

Е-РОК уменьшается, и (I))0, если значение разности Е-POK увеличивается при повышении концентрации левамизола.

Пример 1. Больная P-на Г. Н., 1966 года 55 рождения, история болезни № 7049, находилась в гематологическом отделении клиники

НИИМР АМН СССР с 28.11.80 г. по 20.02.81 с диагнозом лимфогранулематоза 1А стадии с поражением подключичных лимфоузлов справа. Поступила с жалобами на увеличение лимфатических узлов справа под ключицей. Больна с 1978 г. В августе 1980 года после биопсии установлен диагноз лимфогранулематоза (узелковый склероз).

До начала терапии у больной брали из локтевой вены 5 — 7 мл крови в 0,7 — 1 мл

2,700-ного раствора динатриевой соли этилен диаминотетраацетата. Лимфоциты из крови выделяли путем центрифугирования в градиенте плотности фикол-верографина.

Для постановки реакции в 3 группы пробирок (по 2 пробирки в каждой группе) наливали по 0,1 мл суспензии лимфоцитов (2)(10 клеток в 1. мл) Далее в первую группу пробирок наливали по 0,1 мл среды

199 (контрольные пробы), во вторую — по

0,1 мл левамизола в концентрации 1 пг/мл, в третью — — по 0,1 мл левамизола в концентрации 10 мкг/мл. Затем пробы инкубировали при 36 — 37 в течение 30 — 35 мин, после чего клетки отмывали дважды средой 199 путем центрифугирования при 200 g 5 мин.

Надосадочную жидкость сливали, а осадками лимфоцитов ставили реакцию спонтанного

E-розеткообразования с эритроцитами барана: к осадкам приливали по 0,1 мл среды !99 и 0,5Я-ной суспензии эритроцитов барана.

Далее смеси инкубировали при 36- — 37 в течение 10 мин, затем центрифугировали при 200 g 5 мин и инкубировали при 4 С в течение 1 ч. Затем проводили подсчет под микроскопом числа образовавшихся E-РОК, т. е. лимфоцитов, окруженных тремя и более эритроцитами, на 100 клеток в каждой пробе.

Получены следующие результаты анализа: число Е-РОК в пробе без левамизола (Е„) = 55; число Е-POK при концентрации левамизола 1 пг/мл = 36 (Ес ); число

Е-РОК при концентрации левамизола

10 мкг/мл = 61 (Е г) .

Разности между количеством E-РОК при каждой дозе левамизола и количеством

Е-РОК контрольной пробы составили

ЛЕ):= E(c ) — Е, — — — 19;

ЛЕг = E() — Е<, — — +6; (р = ЛЕг — ЛЕ) = 25.

Характер разностей Е-РОК от малой к большой концентрациям левамизола имеет положительное приращение ((г)0) . Следовательно, делаем заключение о нарушении иммунологического статуса у данной больной.

Пример 2. Больной П-в А. Г., 1923 года рождения, история болезни М 3463. Находился в гематологическом отделении клиники НИИМР АМН СССР с 10.12.79 по

21.12.79 r. Был вызван для контрольного обследования. Жалоб не предъявляет. В

1966 году был диагностирован лимфогранулематоз II А стадии с поражением шейнонадключичных и медиастинальных лимфоузлов. Прошел курс комбинированного ле1228864

Составитель Л. Падюков

Техред И. Верес Корректор А. Тяско

Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам нзобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор О. Бугир

Заказ 2209/4 чения. С 1969 года наступила клиническая ремиссия. В настоящее время при обследовании признаков рецидива не обнаружено.

Диагноз при выписке: лимфогранулематоз

11 А стадии в ремиссии продолжительностью

10 лет.

14.12.1979 года у больного взята периферическая кровь. Все процедуры по выделению лимфоцитов и постановке реакций проведены как описано выше.

Получены следующие результаты анализа: число Е-РОК в пробле без левамизола (Е„) = 35; число Е-РОК при концентрации левамизола 1 пг/мл (Ec ) = 45; число

Е-РОК при концентрации левамизола

10 мкг/мл (Ec ) = 23. Разности между количеством Е-РОК при каждой дозе левамизола и количеством Е-РОК контрольной пробы составили

AEi = Е(с, — E(Ä> — +10;

Характер разностей Е-РОК от малои к большой концентрациям левамизола имеет отрицательное приращение (гг(0).

Заключение: иммунологический статус в норме.

Таким образом иммунологический статус организм à on ределяют не по абсол ютной величине Е-РОК в суспензии лимфоцитов периферической крови, а по харакгеру приращения гр, исключив тем самым из рас1О смотрения фоновую составляющую E„-РОК.

В случае если гр)0, делают заключение о нарушении иммунного статуса организма, если гр(0, судят о норме или восстановлении иммунного статуса.

Применение предлагаемого способа поз15 воляет повысить эффективность контроля иммунологического статуса больных активной формой лимфогранулематоза, в сравнении с использованием одной концентрации левамизола, с 72Я до 85@, а в случае ремиссии — до 80о