Способ определения мутагенного действия химических соединений

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН () 4 С 12 N 15/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

3о

10 лг/мд

10 дР1ми

Щ/юо/

ТР

Фиа 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

fl0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3628121/28-14 (22) 21.07. 83 (46) 15.08. 86. Бюл. Ф 30 (71) Красноярский государственный университет и Институт биофизики

СО АН СССР (72) И.IO.Виделец, Т.Ф.Силинская и А.Н.Шендеров (53) 575.113(088.8) (56) Wliser T. et. а1., DNA — damaging agents and DNA — synthesis inhibitors induce luminesсence п

dork variants of luminous bacteria.

Mutation. Res, 1981, 443-450.

„„SU„„1250574 A 1 (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МУТАГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ, включающий инкубацию испытуемого вещества со штаммом фотобактерий с последующим определением мутагенного действия по свечению штамма фотобактерий, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, инкубацию проводят со штаммом бактерий Photobacterium leignathi У 1746 или Photobacterium

leignathi У 1745 в условиях аэрации.

1250574

15

25

Число Частота

Общее чис ло колоний

Дозы мутагенов, мкг/мл

30 светя щихся колоний реверсий х) 0,01

Штамм

Ф 1

x) 0,1

3 2,1 .!О

1420

40 Штамм

N 1

170 2,2 10

7500 хх) 10

Штамм и 2 8200

208 2,5 10 х) 10

Штамм

3 7300

Контроль

Штаммы М 1, 23310

18 2,5 10

-1

3 1О среде кульвсего опыИзобретение относится к способам испытания химических соединений на биологическую активность и может быть использовано для определения мутагенного действия химических соединений.

Целью изобретения янлчется повышение точности способа за счет использования мутантных штаммов Photo

bacterium.

На фпг. 1 и фиг. 2 показаны гра— фики, поясняющие предлагаемый способ.

Пример. Индикаторые темновые штаммы и дикий тип Ph. 1eiognathi культивируют на полусинтетическай среде, состав которой известен. Иэ этих штаммов готовят бактериальные суспензии одинаковой оптической плотности путем смыва с твердой среды.

В биологические пробирки, содержащие по 9 мл полусинтетической среды, засевают по 1 мл бактериальной суспензии. В эти же пробирки добавляют ло 0,1 мл испытуемых не— ществ в различных концентрациях. Культивирование ведут на качалке при о

29 С, Свечение измеряют с интенвалам. 4-б ч. Через 10-20 ч в занисимости от типа мутагена, его токсичности и концентрации наблюдается увеличение интенсивности свечения по сравнению с темноным контролем, связанное с накоплением н суспенэии светящихся ревертантон, возникших под действием мутагенов. Таким образом, тестируют мутагенное действие нитрозогуанидина (фиг. 1) и нитрозометилмоченины.

Под действием всех проверенных концентрациях мутагенон наблюдается увеличение удельной интенсивности свечения. Даже при таких низких концентрациях нитрозогуанидина как

0,001 мкг/мл и концентрации нитрозо- 4 метилмоченины 0,025 мкг/мл интенсивность свечения превышает значения контроля.

Испытания мутагенной активности химических соединений проводят также при кратковременной экспозиции мутагенов в течение 30-35 мин. После чего бактериальную суспензию дважды центрифугируют при 7000 об/мин по

15 мин и ресуспендируют в полусинтетической среде до исходного объема.

Зафиксировано мутагенное действие этилметансульфоната, нитрозометилмочевины, нитроэогуанидина и гидроксиламина. В снязи с непродолжительным действием мутагена нарастание интенсивности свечения происходит позже и чувствительность метода несколько снижается фиг. 2 . Однако даже в такой модификации метод по чувстнительности не уступает тесту Эймса.

Для всех используемых мутантных штаммов была оценена частота возникновения спонтанных ревертантов в условиях реализации способа, оказавша1 яся в 8 10, н то время как у К-нарианта в аналогичных условиях составляет 2-5;10

В отдельных случаях проведено сопоставление результатов скрининга мутагенного действия в жидкой среде с подсчетом числа возникших ревертантов на чашках Петри, подтвердившее, что нарастание свечения связано с накоплением ренертантов.

В таблице показан учет частоты возникновения светящихся ревертантов путем подсчета числа колоний на чашках Петри.

x) Мутаген присутствует в тивированил на протяжении та, хх) Экспозиция мутагена 30 мин.

1250574

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой степенью томатизирован. чувствительности тест не уступает

ИМИ

10 реть

20 50 фиг. 2

Составитель А.Макаров

Техред Н.Бонкало Корректор В.Бутяга

Редактор Л.Аврамерко

Заказ 4376/20 Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открьггий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 достоверности определять мутагенное действие химических соединений, вызывающих замены оснований в flHK. По трзлипионному методу Эймса, а в ряде случаев превосходит его несколько порядков. Метод прост в исполнении, II09HQIIHpT проводить мас5 совые анализы и может был ь ав