Штамм бактерий @ @ =22=продуцент целлюлолитических ферментов @ и @ ,используемый для силосования соломы

 

Штамм бактерий Cellulomonas flavigena-22 (коллекция Центрального музея промьшшенных микроорганизмов института ВНИИгенетика, коллекционньй номер ЦМПН В-2559) - продуцент целлюлолитических ферментов С и С, используемый для силосования соломы.

COOS СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ РЕСПУБЛИН (19) (11) А

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPGHO5hY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ СЕ?ЛЛП.ОМ(ЖИ ---1

FLAVIGENA-22-ПРОДУЦЕНТ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ С 1 и C„, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ СИЛОСОВАНИЯ СОЛОМЫ ° (57) Штамм бактерий Cellulomonas

flavigena-22 (коллекция Центрального музея промьппленных микроорганизмов института "ВНИИгенетика", коллекционный номер ЦМПМ В-2559) — продуцент целлюлолитических ферментов С и С„, используемый для силосования соломы.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

il0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3561131/28-13 (22) 03.03.83 . (46) 30.03.86. Бюл. У 12 (71) Институт микробиологии и вирусологии АН КазССР (72) А.Н.Илялетдинов, М.Г.Саубенова и Т.А.Харитонова (53) 577. 15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 1099614, кл. С 12 N 15/00, 1982.

Авторское свидетельство СССР и 1006485, кл. С 12 N 15/00, 1981 °

Баяхунов Я,К., Попенко А.И. Труды института микробиологии и вирусологии

АН КазССР, т. ХУХ, 1970, с. 87. (51) 4 С .12 N 9/42, 15/00 / /

:(С 12 N 9/42, С 12 R 1:01) 1221240

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм бактерий, используемый в кормоприготовлении для биодеградации целлюлозы с целью повышения питательности грубых кормов, в частности для силосования соломы.

Цель изобретения — получение штамма бактерий Cellulomonas flavigena,,продуцирующего целлюлолитические ферменты С (и С „ при культивировании на целлюлозосодержащем сырье, в том числе на соломе как в аэробных, так и в анаэробных условиях при высокой концентрации ионов водорода.

Сущность изобретения заключается в том, что отобранный штамм целлюлолитических бактерий — факультативный анаэроб, способен активно развиваться при использовании целлюлозы в качестве единственного источника углерода, устойчивого к кислым значениям рН среды.

Указанным требованиям отвечает штамм бактерий Cellulomonas flavigena-22.

Полученный штамм бактерий,Сellulomonas flavigena-22 имеет следующие морфологическую и физиологичес- кую характеристики.

Штамм обладает выраженным полиморфизмом. Представляет собой неправильные палочки с закругленными ,концами. Длина единичных клеток

0,7-2,0 мкм и более, ширина—

0 5 мкм, с возрастом они приобретают кокковидную форму. Подвижные неспороносные грамположительные клетки легко обесцвечиваются и часто наблюдается смесь грамположительных и грамотрицательных клеток. Морфология клеток зависит от состава питательной среды, возраста культуры, температуры выращивания. На мясопептонном агаре колонии бежевого цвета, выпуклые, s-формы. Факультативный анаэроб. Растет при 30-35 С. Желатину разжижает, крахмал гидролизует. Разлагает клетчатку. Сбраживает глюкозу. и

Не сбраживает ксилозу, арабинозу, мальтозу, глицерин, раффинозу, сахарозу. Восстанавливает нитраты. Дает положительную реакцию на каталазу.

Штамм синтезирует целлюлолитические .ферменты С вЂ” 2 ед/мл, С „ - 6 ед/мп.

Способ определения активности С„

2 ед/мл — расщепление фильтровальной т

55 тельно уплотняют и герметически закрывают. Силосные ямы вскрывают через 30 дней после закладки.

Органолептические и биохомические показатели силоса из пшеничной соломы, полученного с помощью целлюлолитических бактерий Cellulomonas

flavigena, даны в таблице.

Силос обладал высокими органолептическими показателями поедаемости (70%).

Силос из пшеничной соломы, приготовленный без дополнительных питательных добавок с помощью целлюлолибумаги размером 1 х 6 см супернатанто ной жидкостью за 24 ч при 50 С в

0,1 M ацетатном буфере, С активности — расщепление Na -КМЦ (растворимой целлюлозы) в 0,1 М ацетатном о буфере при 50 С за 30 мин, 1.,0 мл супернатантной жидкости.

Культуру выращивают и хранят на столбиках 0,7Х-ного соломенного о

10 агара в холодильнике при 5 С Пересевается через 20 дней. Для размно- жения штамма используют следующие среды: крахмальный агар (КН РО

1,0; СаС1 0,1; MgSO 0,3; NaC1 0,1;

15 FeCl> 0,01; NANO> 2,5 г/л дист. воды), 0,27-ный растворимый крахмал, 0,7Хный агар-агар и соломенный агар (КН РО+ 0,1; СаС1 0,1; MgSO 0,3;

NaC1 О, 1; FeC1 > 0,01; NaN05 2,5, 20 солома 25 г/л дис.воды, 0,77-ный агар-агар) . Температура выращивания

32 С в течение 4 сут.

Для получения такого штамма изучены бактерии рода Cellulomonas c

25 конструктивным синтезом целлюлаз, выделенные из различных источников природы.

Штамм выделен на специальных питательных средах, содержащих в

5п качестве единственного источника углерода целлюлозу, методом разводок.

Способен развиваться в анаэробных условиях при значениях рН среды, характерных для силоса хорошего качества (рН 4,0-4,5).

Пример 1. Закладывают силос из пшеничной соломы.

Нарезанную пшеничную солому (347 целлюлозы, 0,57 крахмала) пропитыва4О ют водой (на 1 кг соломы 1,5 кг воды) и смешивают с суспензией целлюлоли тических бактерий (10 микробных

9 клеток в 1 мл) из расчета 10 мл сус пензии на 0;7 кг соломы. Массу тща240 4 ственного вида корма. При кормлении

2000 голов скота в течение 30 дней были получены привесы в среднем

350 г на одну голову.

1221 тических бактерий был введен в рацион крупного рогатого скота головейской породы как в сочетании с другими видами кормов, так и в качестве единОбразцы силоса в ямах

Показатели

1 2 3 4 5 6

70,0

70,0

70,0

70,0

70,0

70,0

Влажность

4,1

4,0

4,2

4,0

4,2

4,0, рН

Размяг- Размяг- РазмягРазмяг- Размяг- РазмягСтруктура ченная ченная ченная ченная ченная ченная

КоричЦвет

Желтый невожелтый

Квашен- Квашен- КвашенКвашен- Квашен- КвашенЗапах ных овощей ных овощей ных овощей ных ных ных овощей овощей овощей

11,5

10,0

12,5

11,5

11,5 12,5

Свободные кислоты, %

0,61

0,61

0,62

0,6 10,37 0,37 уксусная

0 масляная

0,9

0,9

0,67

0,7

0,97 0,97 молочная

Связанные кислоты Х

0,67 0,6

0,7

0,6

0,7

0,7 уксусная

0 0

0 0

25,2 25,2 масляная

Аммиак

0 0

25,0

Целлюлоза, Х

25,3

25,1

25,1

Редуцирующие сахара

0,99

1,0 0,99 0,99 1,0

1,0

II р и м е ч а н и е. Исходное содержание целлюлозы 34,0Х.

ВНИИПИ Заказ 1553/34 Тираж 490 Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Общая кислотность (в 50 мл силосной вытяжки) Коричневожелтый

Коричневожелтый

Коричневожелтый

Коричневожелтый