Способ определения активности цитохромоксидазы
Изобретение относится к биохимии , а именно к энзимологии. Цель изобретения - сокращение времени определения активности цитохромоксидазы..Определяют активиость сукцинатдегидрогеназы спектрофотометричеСкнм методом по степени восстановления цитохрома С за счет окисления сукцината. Затем рассчитьшают Y активиость цитохромоксидазы по формуле Y « Ч (h)x + f/h)x + 4,(h)x-t-4 (h), где Ч .(Ь)а - -ад-со8 , 1, 2, 3; X - экспериментально полученное значение активности сукцинатдегидрогеназы, ТГ - 3,1 А; h - величина атмосферного давления в мм рт. ст., а, а, а эмпирические коэффициенты функции Ч(Ь). 2 табл. П а, -h
СООЭ СОВЕТСКИХ
К . РЕСПУБЛИК
А1
091 (11) A@4 G 01 N 33/48 С 12 1 00
ВСРП % 1 . g
13,,, Ц.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМ,Ф С8ИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР г10 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPHTHA (21) 3668824/28-14 (22) 01.12.83 (46) 15.08.86. Бюл. У 30 (I1) Горьковский государственный медицинский институт им. С. М, Кирова (72) Е. М. Хватова, В. М. Галкин, А. Н. Мошкова и Т. С, Семенова (53) 577.158(088.8) (56) Hess Н., Pope А.I. Biol. Chem.
1953, ч. 204, В I, р. 295-306. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ
ЦИТОХРОМОКСИДАЗЫ (57) Изобретение относится к биохимии, а именно к энзимологии. Цель изобретения - сокращение времени определения активности цитохромоксидазы..Определяют активность сукцинатдегидрогенаэы спектрофотометрическнм методом по степени восстановления цитохрома С за счет окисления сукцината. Затем рассчитывают Y активность 3 цитохромоксидаэы по формуле Y = f (h) x +
V (h) х + К,(h)х+ е,(h), П где М,(h) =а +а - сов
1
i=0 1, 2, 3; х — экспериментально полученное значение активности сукцинатдегидрогеназы, % — 3,14;
h — величина атмосферного давления в мм рт. ст., а,, а<, а — эмпирические коэффициенты функции Ч(Ь). 2 табл.
1250950 активность ЦХО; активность СДГ; величина атмосферного давления, мм рт. ст.; где Y х—
h— о а1 а — коэффициенты линии
2 сии q (h)=a,+a cos регресIT
h a„ Изобретение относится к биохимии, а именно к энзимологии, и может использоваться для определения активности цитохромоксидазы (ЦХО).
Цель изобретения — сокращение вре- 5 .мени определения.
Пример. Исследования проводят иа митохондриальной фракции головного мозга. Определяют активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ), спектрофото 10 метрическим методом по степени восстановления цитохрома С за счет окисления сукцината. Для определения активности СДГ составляют инкубаци онную среду, которая содержит: 0,05 мг 15 белка митохондриальной суспензии;
0,1 мл 1,5 11 раствора сукцината натрия, 0,1 мл 0,15 М раствора KCN, 0,05 мл 8 10 M раствора СаСI,, 0,05 мл 8 10 М раствора АIСI ; 20
2,5 мл 1 10 M раствора цитохрома С.
Изменение оптической плотности при восстановлении цитохрома С регистрируют на СФ-4а в течение 3 мин.
Активность фермента выражают в мкмолях цитохрома С на 1 мг белка в мин, Следующим этапом в работе является определение коэфффициентов а„ о,, с по специально составленным табл. 1и 2. Соответствующие значения коэффициентов а.,о „, и величину атмосферного давления (мм рт. ст.), при котором проходил эксперимент, подставляют в формулу (1) для отыскания,(h), М „(h), Р,(h) 35
Ч,(h)
V (h(=a +а cos -- — --. (1.) о а h
Затем определенное в эксперименте значение активности СДГ и найденные значения j(h) (i=0,1,2,3) подставля ют в формулу (2) по которой производят расчет активности ЦХО с(h)x + v (h)x + Y (h)x + 3(h), (2) Рассчитанная аналитически активность ЦХО выражается в микромолях цитохрома С на 1 мг белка за I мин соотнесенно к h.
Формула изобретения
Способ определения активности цитохромоксидазы путем инкубации ткани в реакционной смеси, содержащей цитохром С, и последующего спектрофотометрирования, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью сокращения времени определения, измеряют активность сукцинатдегидрогеназы в ткани, а активность цитохромоксидазы рассчитывают по формуле у= е (h)x+ v (h)x + v (h)x+q (h), П где 1 (h)=a à cos; — -- (i=O I
1 У О h а У э
2,3); ак тив но с ть цитохромоксидазы цитохрома С на l мг белка в
1 мин, мкмоль; экспериментально полученное значение активности сукцинатдегидрогеназы цитохрома С на 1 мг белка в 1 мин, мкмоль; величина атмосферного давления, мм. рт. ст., 45 а Äa,, о а, — эмпирические коэффициенты функции V (h).
Например, в условиях гипотермии (t=20 С) в сочетания с гипоксией (разрежение атмосферы до 310 мм рт. ст.) находим значения функций (h), y (h), г (h), q (h) по формуле П
Ч (Ь)=а +а -cos
2 о h a
1 где а,, а,, д, берут соответственно из табл. 1 . Значение активности (х)
СДГ при этом составляет 25,8 мкмоль цитохрома С на 1 мг белка в 1 мии, расчетное значение активности(у)ПХО, цитохрома С на 1 мг белка в 1 мин—
72,463668 мкмоль. Зкспериментально установленная активность ЦХО составляет 71 9+5,5. Ошибка формулы 0,787, 1250950
Таблица 1
g (h) Значение коэффициентов функций
y (h) (i=O,1,2,3) при t=20 С (а, <, (h) -0,00004 0,019375 -0,00313
,(h) -0,001399 0,019375 0,28062
Ч (h) 0,081155 0,019375
-5,38519
-0,55573 0,019375 78,431198
Таблица 2
Значение коэффициентов функций
y. (h) (i=O,1,2,3) при t=37 С а„
Q2 а. Ч,(h) Составитель Н. Гуляева
ТехРед И.Гайдош
Корректор Е. Рошко
Редактор М. Келемещ
Тираж 778
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 4403/39
Подписное
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
-0,.0091
-0,22640
-3,54401
-17,18663
0,00060 0,00752
0,00060 -0,68357
0,00060 4,03097
0,00060 -26,11705
