Способ получения эндоглюканаз из aspergillus terreus вкм f- 2220

 

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕС ВВЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21} 3770981/13 (22) 30.0734 (46) 30.1133 Ьой Ne 43-44 (71) Инстеу1 биохимии и фюиолоаи микроорганизмов АН СССР

09) Я (n) 1259674 А1 (51)5 С12 У 42 (72) Иваиова Г.С„Белецкая ОП; Головлев ЕЛ; Зубрицкая Л.Г„Кулаев И.С„Окунев ОН.

{54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОГЛКЖАНАЗ

ИЗ АВРЕЙОИЛЛВ ТЕЯЯИВ SKIN F-2220 (57) Изобретение относится к биатехнолоrw, а именно к получени)о ферментных препаратов для биоконверсии растительного сырья.

Целью изобретения является повышение выхода и упрощение процесса получения эндоглюканаз, Сущность способа в там, что хроматографию проводят на карбоксильнам катионите при рН 4,0-4,5 с последующей элюцией ферментов ацетатным буфером, рН 5,0-5,1 и 5,4-5.6, Зндоглюканаэы из подкисленного до рН 4,0-4,5 фильтрата культуральнай жидкости или раствора целлюлолитическога комплекса в воде сорбируют на карбоксильном катионите; удаляют с сорбента целлобиазы промывкой исходным буфером, водой, 0.1 М ацетатным буфером рН 4,8; злюцию зндоглюканаз 1 и 2 проводят 0,2 М ацетатным буфером рН 5,0-5,1, эндаглюканазы 3-0.3 М ацетатным буфером, рН 5,4-5,6.

Все используемые сорбенты являются полимеризационными карбоксильными катионитами, содержащими в качестве кроссагента разные структуры, а именно дивинилбензол или N,N -диметакроилалкилендиамин, или в, а -диметакраилэтилен и полиэтиленгликоли, ),е, в предлагаемом способе могут быть использованы только карбоксильные катиониты -- ис;)аобменные. смолы. На карбоксильных катионитах на палисахаридной декстранавой осково типа

СМ-сефадекс андо) люканазы Азр. еггеов

ВКМ F-2220 при описанных условиях не сорбиру)отся. Гакпм образом, эндоглюканаэы получаю» в одну стадию при хроматографии на карбаксильном катионите и суммарный выход эндагл)оканаэ при использовании способа составляет 100%. в То время как в прототипе 4%, Пример 1, Оильтрат культуральнай жидкости или раствор комплекса риба А:- р, 1еггеоз HKM F-2220 в воде подкисляют до рН 4,0 и зндоглюканазы из него сарбиру)от на колонке с карбоксильным катионитом

Биакарб Г-5 са скорость)о 150 мл/см ч.

Промывают исходным буфером (5 л/л сорбента), водой и затем 0,1 М ацетатным буфером, рН 4,8, при этом удаляется 90 / целлобиаэы. Элюцию эндоглюканаз 1 и 2 проводят 0,2 М ацетатным буфером, рН 5,0.

Получают две эндоглюканазы с выходом

50,о и 25,4%»и степенью очистки 2000 и

2500. Эндоглюканазы 3 элюируют 0,3 М ацетатным буфером рН 5,4, Получают эндоглюканазы 3 с выходом 23,8% и степенью очистки 2000, В pesyf)6TGT8 очистки иэ 30 fl фильтрата культуральной жидкости полученой < эндогл)оканаза 1 — 765 спектрофотометрических единиц белка с удельной активно10 стью 41,3 ед/спектрофотометр. ед. белка; эндопноканаза 2 — 356 спектрофотометрических единиц белка с удельной активностью 44 ед/спектрофотометр, ед. белка; эндаглюканаза 3 — 400 спектрофотомет15 рических единиц бег«а с удельной активностью 35.6 ед/cf)er Tð)2ôîòàìeòð, ед. белка.

Аналогичные результаты па выходам эн-догл)оканаз 1, 2 и 3 получены при использовании марок Ьиокарбов Г-10 и Г-20, Биокарбов 3.

П ри мер 2, Эндоглюканазы гриба Asp. юггецз ВКМ Е-2220 получа:от хроматографией на кэрбоксильном «втисните К»МТ, как описано в f)p))ìepe 1, но фильтрат или рас25 твор комплекса подкисляк)т до рН 4,5, эню4)и)о эндоглк)каноэ 1 и 2 f) p()Bo!Äß1 буфером с рН 5,1,. а эндогл»оканвз)ы 3 буфер»2м с рН

5Я, Б ыхо >), ферментов 100%, П р и м 8 р 3. 3ндогл»>) каназы гриба Азр.

30 (8).re!)., HKM;-2220 г>олучвю «а)(описано в примере 1, на колонке с карбоксильным Yатионитам KPK- -2п, Выход ферме»ггов 90%.

»1дент))чные рез)))).таты полу сны при праведе»)ии )(рол)втографии на катионитах KPK35 1-5)), Kl>K-1-8п, КРК-1-20п.

П рн ме р 4, 3!>догл)аканазь) грибаAsp.

«»8)»еиз ВКМ Г-2220 получают, как описано в примере 1, на колонке с карбоксильным катионитом КМ 2п, Выход ферментов 80%.

4»-) Использован))е способа гозволит увеличить суммарный выход ферментов в 25 раз, снизить стаи. )ость сорбентав в два раза и сократить время о>>ис->к)) за счет увеличения скорости f)poT0«8 )врез колонку с сор45 бентом. (56) Hakaf)aeon О„Га(18гзюп) Z., Blochlm

Вlopt)y Ас(а, 19 76, 524, 385-392.

О9а)",>а,-".„) ауагла Н., Toyar))a М.

J.):ег»)) еи Tech)»() I, 1982, 60, 349-356.

Иванова Г,С., Белецкая О.П., Окунев

Q,Н„Головлев Е.Л и Кулаев И,С. Фракционирование целлюлазного комплекса гриба

Азр.:еггеив. Прикладная биохимия и микробиология. 1983, т.19, 362-368.

259674

Составитель

Техред M.Моргентал Корректор Л.Филь

Редактор O.Юркова

Заказ 3332

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНДОГЛЮКАНАЗ ИЗ ASPERG)LLUS TERREUS 8ÊM

F-2220 путем хроматографии комплекса целлюлолитических ферментов, отличаюийся тем, что, с целью повышения выхода и упрощения процесса, хроматографи ю проводят на карбоксильном катионите на

1 неполисахаридной основе, сорбцию осуществляют при рН 4,0 - 4,5 с последующей элюцией ферментов ацетатным буфером при рН 50-5,1 и 54-56.

2. Способ по п,1, отличающийся тем, что в качестве карбоксильного катионита используют катионит типа КМТ, или типа

КРК, или типа Биокарб, или КМ,