Способ диагностики нефротического синдрома

 

Изобретение относится к медицине , а именно к урологии и нефрологии . Цель изобретения - повышение точности способа. Для этого у пациента исследуют мочу фотометрическим методом при красном светофильтре с длиной волны 597 нм, предварительно обработав пробу мочи 0,025 М раствором КС1. Измеряют оптическую плотность раствора (Ej). Пробу обрабатывают раствором НС 1 , доводя рН мочи до 4,1-4,6. Затем добавляют 1 %-ный раствор гепарина (1000 МЕ/мл), повторно измеряют оптическую плотность (Ej). По разности Е ( - Ej определяют липопротеиды низкой плотности-(ЛНП). При появлении ЛНП диагностируют нефротический синдром. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (М4 G 01 N33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3788376/28-14 (22) 07.09.84 (46) 23.02.87. Бюл. N - 7 (71) Киевский научно-исследовательский институт урологии и нефрологии (72) Г.Г.Никулина, Ю.И.Сопотов, И.M.Çåëüäè÷ и Н.М.Петрунь (53) 616.61-002(088.8) (56) Колб В.Г., Камышников В.С.

Клиническая биохимия. — Минск, 1976. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НЕФРОТИЧЕСКОГО СИНДРОМА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и нефрологии. Цель изобретения — повьппение точности способа. Для этого у пациента исследуют мочу фотометрическим методом при красном светофильтре с длиной волны 597 нм, предварительно обработав пробу мочи 0,025 М раствором KCl. Измеряют оптическую плотность раствора (Е 1). Пробу обрабатывают растворомНС1, доводя рН мочидо

4, 1-4,6. Затем добавляют 1Х-ный раствор гепарина (1000 ME/мл), повторно измеряют оптическую плотность (E ).

По разности Е) — Е определяют липопротеиды низкой плотности (ЛНП). При появлении ЛНП диагностируют нефротический синдром. 4 табл.

1291875

С целью построения стандартного калибровочного графика для количественного определения ЛНП выполняется препаративное выделение ЛНП из сыворотки крови в соответствии с методом.

Способ выделения ЛНП основан на способности ЛНП образовывать нерастворимые комплексы с гепарином в приИзобретение относится к медицине, в частности к урологии и нефрологии, Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим 5 образом.

Собирают мочу эа сутки, хранят в холодильнике. Отбирают 20-25 мл мочи иэ суточного объема, замораживают, затем дают оттаять и сразу же фильтруют через бумажный фильтр с диаметром пор 1-25 мкм. 5-10 мл профильтрованной мочи наливают в химический стакан объемом 50 мл и измеряют в нем исходный рН мочи на потенциометре любой марки. Далее под контролем показаний потенциометра осторожно добавляют по каплям 1 н. раствор соляной кислоты, доводя рН до показания, равного 4, 1-4,6.

Затем в химическую пробирку помещают 0,2 мл мочи с рН 4, 1-4,6, добавляют 2 мл 0,025 М раствора хлористого кальция. Измеряют оптическую плотность полученного раствора (Е,) на фотоэлектроколориметре любой марки в кювете толщиной слоя 0,5 см против дистиллированной воды при красном светофильтре (длина волны 597 нм). Далее в кювету добавляют 0,04 мл 17.-ного

30 раствора гепарина (1000 ИЕ/мл), пе ремешивают и точно через 4 мин производят второе определение оптической плотности раствора (Е ).

Разница (Š— Е<) приходится на 35 оптическую плотность раствора, обусловленную нерастворимым комплексом липопротеидов низкой плотности (ЛНЛ) с гепарином в присутствии ионов кальция в данном образце мочи.. Расчет концентрации ЛНП в моче (С, г/л) производится по калибровочной кривой.

Расчет суточной экскреции ЛНП с мочой производится по формуле

C x V = г/сут, где С вЂ” найденная по калибровочному графику концентрация ЛНП, г/л;

V — объем выделенной мочи за сутки, л ° 50 сутствии ионов кальция, Используют сыворотки крови человека: неразведенная — I проба; разведенная в 2 раза—

II проба; разведенная в 3 раза — III проба; разведенная в 4 раза — IV проба.

Определение разности оптической плотности (Š— F., ), обусловленной

ЛНП, в пробах.

0,2 мл каждой пробы отбирают в отдельную пробирку, добавляют 2 мл

0,025 М раствора. хлористого кальция и определяют оптическую плотность (E<) на фотоэлектроколориметре в кювете с толщиной слоя 0 5 см против дистиллированной воды при длине волны

597 нм. Затем содержимое кюветы сливают в ту же пробирку и добавляют

0,04 мл гепарина (1000 ME/ìë). Через

4 мин от момента добавления гепарина снова определяют оптическую плотность раствора (Е ). Для каждой иэ четырех проб находят разницу (Е - E„), обусловленную нерастворимыми комплексами

ЛНП с гепарином в присутствии ионов кальция.

Препаративное осаждение ЛНП из сыворотки крови.

Используют по 10 мл каждой из проб, которые помещают соответственно в четыре отдельные конические колбы.

Затем .в каждую иэ колб добавляют

100 мл дистиллированной воды, 2,5 мл

2 N раствора хлористого кальция и

0,8 мл раствора гепарина (5000 МЕ/мл).

Смесь тщательно перемешивают и помео щают в холодильник при 2-5 С на ночь °

Содержимое каждой колбы центрифугируют в центрифужных пробирках 45 мин при 3000 оборотах в минуту при о

2-5 С. В результате на дне пробирок образуется плотный осадок ЛНП. Надосадочную жидкость сливают, а осадок растворяют в 2 мл 5Х-ного NaC1 и переносят количественно в стаканчик для диализа с фиксированной на дне целлофановой мембраной. Диализ проводится против дистиллированной воды в течение 48 ч при ?-5 C меняя воду

2-3 раза.

Затем содержимое стаканчиков количественно переносят во взвешенные бюксы, высушивают при 70-80 С до о .постоянного веса и определяют вес осажденных ЛНП в исследуемых пробах.

На основании полученных данных вычерчивают калибровочный график для количественного определения ЛНП. По оси ординат откладывают показатели

1291875

ФЭКа (Š— F. ) для каждой из проб, а по оси абсцисс — соответствующий вес осажденных ЛНП в граммах в расчете на 1 л °

П р и .м е р 1. Больной В., клини- 5 ческий диагноз: гломерулонефрит, нефротический синдром. Суточный диурез

1,4 л, суточная потеря белка с мочой

6,72 r. Исходное рН мочи 7,5.

Согласно предлагаемому способу в порциях мочи создали градиенты рН, равные 7,5; 5,2; 4,1 и 3, 1. Каждый раз при достижении указанных градиентов рН отбирали по 0,2 мл мочи в отдельные пробирки: I II III u IV

15 пробы. В каждой из этих проб производили определение содержания ЛНП (табл.1). В III пробе мочи с рН 4, 1 степень выявления ЛНП была максимальной и суточная экскреция ЛНП составила 15,4 г. Таким образом, количественное определение ЛНП в моче с помощью предлагаемого способа более информативно характеризует качественный состав экскретируемых крупнодисперсных белков, что является существенным дополнением в диагностике нарушения экскреторной функции почек.

Пример 2 ° Больной К., клинический диагноз: хронический гломерулонефрит. Суточное выделение мочи

0 5 л. Экскреция белка с мочой

5,25 г/сут, Исходное рН мочи 6,9.

Согласно предлагаемому способу в порциях мочи создавали градиенты рН, равные. 6,9; 6,0; 5 1; 4,6; 4, 1;

3,2 и 2,2. При указанных показателях рН отбирали по 0,2 мл мочи в отдельные пробирки: I — VII пробы. В каждой

40 из них определяли содержание ЛНП.

Результаты определения ЛНП в моче больного К. в зависимости от показателя рН представлены в табл.2. Наиболее высокая степень выявления ЛНП. была в IU u V пробах мочи с рН 4,1

45 и 4,6, а именно 5 36 г/сут, что дополнительно характеризует состояние экскреторной функции почек. .7I р и м е р 3, Больной Ч., клинический диагноз: гломерулонефрит, мочевой синдром. Суточное выделение мочи 0 5 л. Суточная потеря белка с мочой 1,1 г ° Исходное рН мочи 5,6.

В порциях мочи создавали градиен.ты рН 5,6; 4,6; 4,1; 3,2 и 2,2, после 55 чего отбирали по 0,2 мл мочи: I — - V пробы, и определяли липопротеиды.

Результаты определения экскреции ЛНП с мочой у больного Ч. в зависимости от показателя рН представлены в табл,3. Во II u III пробах мочи с рН 4,1и 4,6 обнаружена максимальная концентрация ЛНП и суточная их экскреция, равная 0,95 г. Таким образом, наиболее полное выявление ЛНП в моче имело место при рН мочи, равном

4, 1-4, 6.

Пример 4. Обследуемый М. Нарушения экскреторной функции почек не выявлено. Исследование мочи производилось 30.05.84 r, Суточный диурез 1 л мочи. Белок в моче отсутствует. Исходное рН мочи 6,93.

В табл.4 представлены данные определения ЛНП в моче обследуемого М. в зависимости от градиента рН мочи, создаваемых согласно предлагаемому способу, Установлено, что при отсутствии нарушения экскреторной функции почек и белка в моче ЛНП в ней не обнаруживается при показаниях рН 4, 1-4,6.

Пример 5. У больного гломерулонефритом В. относительный процент глобулинов 51Х из них бета-глобулинов 10Х, суточная экскреция ЛНП 15,4 r.

Пример 6. У больного гломерулонефритом Е. относительный процент глобулинов 52Х,.из них бета-глобулинов 123, суточная экскреция ЛНП 0,95 г.

Согласно известному способу точность определения крупнодисперсных белков плазмы и, в частности, относящихся к -фракции глобулинов составляет 507, а согласно предлагаемому способу точность повышается до 95-98Х.

Формула изобретения

Способ диагностики нефротического синдрома путем фотометрического ис.следования мочи при 597 нм, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, в моче определяют липопротеиды низкой плотности, при этом пробу обрабатывают раствором соляной кислоты, доводят рН мочи до 4,1-4,6, далее обрабатывают хлористым кальцием и гепарином и по появлению липопротеидов низкой плотности. диагностируют нефротический синдром.

1291875

Показатели измерН мочи рения оптической плотности (Е -E,) Суточная экскреция

ЛНП, г/сут

Концентрация ЛНП в моче, г/л

Проба

1,68,1,2

5,0

3,56

5,2

III 4,1

IV 3,1.

15,4

11,0

11,6

8,3

Концентрация ЛНП, г/л

Суточная экскреция

ЛНП с мочой, г/сут

0,03-0,03

0,02-0,02

0,14

0,07

4,6

10,72

10,72

5,36

5,36

3,2

3,8

1,9

2,2

1,08

2,16

VII

Показатели изме- Концентрарения оптической ция ЛНП в плотности (Е -E,) моче, г/л

Суточная экскреция

ЛНП с мочой, г/сут

0,035

0i07

5,6

0,95

1,9

4,6

0,95 1<9

III 4,1

0,75

1,5

0,75

1.,5

2,2

Проба рН мочи

I 6,9

II 6,0

III 5, 1

Проба рН мочи

Оэ 12 0< 02

О, 35-0, 05

О, 96-0, 03

О, 72-0, 02

Показатели измерения оптической плотности (Е -Е<) 0,04-0,02

0,93-0,02

0,93-0,02

0,34-0,02

О, 20-0, 02

0,02-0,01

О, 17-0, 01

О, 17-0, 01

0,14-0,01

О, 14-0, 01

Таблица 1

Таблица2

Таблица 3

1291875

Таблица4

Суточная зкскреция с мочой г/сут

Показатепи изме- Концентрарения оптической ция ЛНП в плотности (Е -Е ) моче, г/л рН мочи

Проба

0,02-0,02

0,01-0,01

О, 01-0, 01

О, 01-0, 01

0,01-0, 01

О, 01-0, 01

6,9

5,2

4,6

-, О

4,1

3,2

2,4

Составитель Л.Шилина

Редактор И.Дербак Техред Л.Сердюкова Корректор М.Самборская

Заказ 226/43 Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ултород, ул.Проектная, 4