Способ прижизненного окрашивания митохондрий

 

Изобретение относится к цитологии . Цель изобретения - более полное выявление митохондрий. Стекло с культурой фибробластов переносят в чашку Петри со средой, содержащей п-нитротетрозолий фиолетовый, и инкубируют. Затем стекло помещают в чашку с ростовой средой и изучают в темном поле микроскопа. После инкубации образец вновь подвергают микроскопированию. После окрашивания клетки продолжают размножаться и при необходимости их можно повторно окрасить. 00 со со 4 СО 42

СО1ОЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Л0.„1339434 (5И 4 С 01 N 1/28 А 61 В )О/00 г

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ С8ИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3891395/28-14 (22) 23.04.85 (46) 23.09.87. Бюл. В 35 (71) Институт биологической физики

АН СССР (72) А.Г. Белякович (53) 616-0.88.8(088.8) (54) СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОКРАШИВАНИЯ

МИТОХОНДРИЙ (57) Изобретение относится к цитологии. Цель изобретения — более полное выявление митохондрий. Стекло с культурой фибробластов переносят в чашку

Петри со средой, содержащей и-нитротетрозолий фиолетовый, и инкубируют.

Затем стекло помещают в чашку с ростовой средой и изучают в темном поле микроскопа. После инкубации образец вновь подвергают микроскопированию.

После окрашивания клетки продолжают размножаться и при необходимости их можно повторно окрасить.

1339434

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Составитель М. Позняк

Редак""op И. Шулла Техред М. Ходанич

Корректор М. Демчик

Заказ 4213/33 Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицине, а именно к цитологии, в частности для прижизненного митохонд рий„ и может быть использовано для () изу-ения количественных и структурных изменений митохондрий в отдельной клетке как в норме, так и после воздействия на нее, а также в экспериментальной медицине и ветеринарии 1р для характеристики функционального состояния изучаемых обьектов и в клеточной биологии для оценки энергетического состояния клеток.

Целью изобретения является более 15 полное выявление митохондрий путем повьш ения его специфичности и уменьшения токсичности.

Пример. Прижизненное выявление митохондрий в клетках культуры 2р фибробластов китайского хомячка. Для исследования используют суточную культуру фибробластов китайского хомячка линии В-11-1.-ii-FAT-28 (Клон

431), выращенную непосредственно на предметном стекле, помещенном в чашку

Петри, в присутствии ростовой среды, состоящей из среды Игла и 199 (1:1) с добавлением 107-ной сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков, 30

100 ед/мл пенициллина и 50 ед/мл стрептомицина при 37 С. Для окрашивания стекло с клетками переносят в другую чашку Петри,со средой Игла, содержащую 2 мМ п-нитротетрозолий фиолетовый (п-НТФ), и инкубируют при

37 С в течение 15 мин„ После этого стекло вновь помещают в чашку Петри с ростовой средой без п-НТФ. Для последующего анализа стекло с клетками 4р накрывают покровными стеклами и изучают в темном поле микроскопа при увеличении 420 . При визуальном наб.—

If людении в клетках четко видны свободно перемещающиеся оранжевые гранулы

"большие" митохондрии диаметром около

1 мкм. При этом сделаны фотографии, Затем исследуемый образец культуры фибробластов дополнительно инкубируют в среде Игла, содержащей 2 мМ п-НТФ при 37 С в течение 60 мин и вновь подвергают микроскопированию в темном поле. При визуальном наблюдении видно, что наряду с "большими" митохондриями, проявившимися после первого окрашивания, в клетках окрасились в желтый цвет малые" митохондрии диаметром около 0,5 мкм. При этом также сделаны фотографии. После

15 мин инкубации клеток с п-НТФ окрашенные митохондрии наблюдают в течение 8 ч, а после 75 мин инкубации в течение 30 ч, что свидетельствует о малой скорости окисления формазана — красящей формы и-НТФ в живой клетке.

Поскольку после окрашивания предлагаемым способом клетки полностью сохраняют свою жизнеспособность и продолжают размножаться, их можно в случае необходимости окрашивать вторично по сравнению с окрашиванием митохондрий, например, якусом зеленым, при котором нервные клетки можно изучать не более 2 ч.

Способ прижизненного окрашивания митохондрий путем инкубации клеток с красителем и выявлении митохондрий под микроскопом, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью более полного выявления митохондрий, окрашивание проводят в течение 5-60 мин,при этом в качестве красителя используют инитротетрозолий фиолетовый.