Способ определения гликозаминогликанов в сыворотке крови

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - сокращение времени определения при сохранении точности способа. Сыворотку крови с дистиллированной водой центрифугируют . В надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту с соляной кислотой и центрифугируют. Осадок растворяют, прибавляют этанол и центрифугируют. После растворения осадка добавляют серную кислоту с тетраборнокислым натрием, помещают на водяную баню и измеряют экстинкцию.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (111

А1 (50 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCXOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3910004/28-14 (22) 07.06.85 (46) 15.11.87. Бюл. Р 42 (71) Волгоградский государственный медицинский институт (72) A.Á.Çáîðîâñêèé и П.И.Исаев (53) 612.015 (088.8) (56) Карякина Е.В., Косягин Д.В. Лабораторное дело, 1982, Р 10, с. 591. е (54 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАИИНОJIHKAH0B В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к биохимии. Цель из о б ре тен ия вЂ” сокращение времени определения при сохранении точности способа. Сыворотку крови с дистиллированной водой центрифугируют. В надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту с соляной кислотой и центрифугируют.

Осадок растворяют, прибавляют этанол и центрифугируют. После растворения осадка добавляют серную кислоту с тетраборнокислым натрием, помещают на водяную баню и измеряют экстинкцию.

1352367

Изобретение относится к медицинской химии, а именно к определению гликозаминогликанов в сыворотке крови, и может быть использовано в диагностических целях в клинике, а также в других областях народного хозяйства, где исследуются гликозаминогликаны (ГАГ) биологических жидкостей.

Целью изобретения является сокращение времени бпределения при сохра- 10 некии точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

К 1 мл сыворотки крови прибавляют

3-4 мл дистиллированной воды, затем хлорную кислоту в конечной концентрации 0,53-0,62 М, через 10-15 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10-15 мин. Осадок удаляют, а в надосадочную жидкость приливают фосфорно-вольфрамовую кислоту в конечной концентрации 1-1,27Х, через 10-15 мин центрифугируют при 3 тыс, об/мин в течение 10-15 мин. Полученный осадок растворяют в NaOH в конечной концент25 рации 0,002-0,0026 н. и дистиллированной воде до общего объема 1 мл.

Далее к полученному раствору добавляют этанол до конечной концентрации

66-70 . и оставляют на 40-60 мин при

3-6 С. После выпадения осадка центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 5-10 мин. Осадок растворяют в

1 мл дистиллированной воды, прибавляют 5 мл коцентрированной серной кис- 35 лоты (уд. вес 1,8 ХЧ), содержащей

0,95 тетраборнокислого натрия крис таллического, перемешивают и помещают в водяную баню на 10 мин. После охлаждения в пробирку добавляют 40

0,2 мл 0,125Х-ного раствора карбазола в 96 -ном этаноле, далее нагревают в водяной бане в течение 10 мин и после охлаждения измеряют экстинкцию на КФК-2 при A = 540, чувствитель- 45 ности 1 °

Пример 1.. Определение содержания ГАГ сыворотки крови донора M.

К мл сыворотки кРови донора М 50 добавляют 3,5 мл дистиллированной воды, затем хлорной кислоты в конечной концентрации 0,62 М, через 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин. Осадок удаляют, в надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту в конечной концентрации 1,25 и в 2 í. HGl, че- . рез 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин. Полученный осадок растворяют в NaOH в конечной концентрации 0,0025 н. и дистиллированной воде до общего объема 1 мл.

Далее прибавляют этанол в конечной концентрации бб, перемешивают и осо тавляют на 50 мин при 5 С. Осадок отделяют центрифугированием в течение

5 мин при 3 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость сливают, а в пробирку приливают 1 мл дистиллированной воды, растворяют осадок ГАГ, прибавляют

5 мл серной кислоты, содержащей

0,95Х тетраборнокислого натрия кристаллического, растворяют перемешивают и помешают в водяную баню 100 С на 10 мин. Далее вынимают из бани, охлаждают до комнатной температуры и приливают 0,2 мл 0,125 -ный раствор карбазола в этаноле, повторно нагревают в водяной бане 10 мин,после охлаждения измеряют экстинкцию на

КФК 2 при 9 = 540, чувствительности

1; плотность равна 0,18, что соответствует по калибровочной кривой, построенной по глюкуроновой кислоте

7,5 гамм/мл ГАГ сыворотки крови.

Пример 2. Определение содержания ГАГ сыворотки крови донора M. при минимальных значениях параметров.

К 1 мл сыворотки крови прибавляют 3 5 мл дистиллированной воды, затем НС10 в конечной концентрации

0,53 М, через 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин 10 мин, осадок удаляют и в надосадочную жидкость прибавляют фосфорно-вольфрамовую кислоту в 2 н. HCi в конечной концентрации 1Х через 10 мин центрифугируют при 3 тыс. об/мин, полученный осадок растворяют в NaOH в конечной кон-. центрации 0,002 н. до общего объема

1 мл в дистиллированной воде. Далее к полученному раствору прибавляют этанол до конечной концентрации ббХ, О оставляют на 40 мин при 3 С, затем центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 5 мин. Полученный осадок растворяют в 1 мл дистиллированной воды, приливают 5 мл конц. серной кислоты, содержащей 0,95 тетраборнокис" лого натрия кристаллического, перемешивают, помещают на водяную баню на

10 мин, после охлаждения добавляют

0,2 мл 0,125Х-ного раствора карбаэо" ла в этаноле, помещают в водяную баню на 10 мин, охлаждают и измеряют экстинкцию на КФК-2 при % = 540, чув1352367

Формула изобретения

Составитель Е. Колмакова

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор МД1ароши

Редактор И. Рыбченко

Заказ 5559/42 Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР цо делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35 ° Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. ужгород, ул. Проектная, 4 ствительности 1; оптическая плотность раствора 0,18, что соответствует

7,5 гамм/NJI в сыворотке крови.

Способ определения гликозаминогликанов в сыворотке крови путем.обработки реактивами и этанолом с последующей фотометрией, о т л и ч а ю шийся тем, что, с. целью сокращения времени определения при сохранении точности способа, сыворотку крови депротеинизируют хлорной кислотой в конечной концентрации 0,53-0,62 М, а осаждение гликозаминогликанов проводят фосфорно-вольфрамовой кислотой

10 в конечной концентрации 1-1,273.

Изобретение относится к дерматологии

Способ определения супероксидных анион-радикалов // 1352327

Изобретение относится к области

Способ дифференциальной диагностики заболеваний нервной системы // 1352297

Изобретение относится к неврологии

Способ диагностики демодекоза // 1351580

Способ диагностики метастазов рака молочной железы в лимфоузлы // 1349498

Способ определения содержания белка в растительной ткани // 1347015

Изобретение относится к области биологии, в частности к биофизике растений и к селекции сельскохозяйственных культур, и может найти применение в пищевой, микробиологической и фармацевтической промышленности

Способ определения в крови гликозилированных соединений, содержащих кетоаминовую связь // 1347014

Изобретение относится к биохимии

Способ определения резистентности эритроцитов // 1347013

Изобретение относится к гематологии

Способ прогнозирования течения кишечного токсикоза у детей // 1347012

Изобретение относится к педиатрии

Способ дифференциальной диагностики механической желтухи и вирусного гепатита // 1345117

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750