Способ количественного определения @ -аминокислот

 

Изобретение касается аналитической химии, в частности количественного определения «i-аминокислот (ЛК). Для повышения точности и чувствительности определения АК при обработке пробы о-фталевым ангидридом и тиосоединением в качестве последнего используют дитиотреитол или меркаптоянтарную кислоту при их молярном со отношении, равном 1:1...1:10. Реакцию ведут при рН 8-11 и полученный раствор подвергают фотометрированию. Эти условия позволяют определять разные АК с точностью до 0,001 мг/мл. оэ 05 4

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК .

yg 4 G 01 N 21/78

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К д BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4100936/31-04 (22) 26 ° 05.86 (46) 23.12.87. Бюл. У 47 (71) ИГУ им. М.В.Ломоносова (72) А.А.Пятраускас, В.K.Øâÿäàñ, Е.В..Козлова и И.Л.Борисов .(53) 543.42.062(088.8) (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ot -AMHHOKHCJIOT (57) Изобретение касается аналитической химии, в частности количествен„„BU„„1361477 А1 ного определения м -аминокислот (АК).

Для повышения точности и чувствительности определения АК при обработке пробы о-фталевым ангидридом и тиосоединением в качестве последнего используют дитиотреитол или меркаптоянтарную кислоту при их молярном соотношении, равном 1:1...1:10. Реакцию ведут при рН 8-11 и полученный раствор подвергают Аотометрированию. Эти условия позволяют определять разные

АК с точностью до 0,001 мг/мл.

1361477

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения ос --аминокислот, Цель изобретения — повышение точности и чувствительности определения.

Пример 1. Определение валина при соотношении о-фталевого альдегида и дитиотреитола 1:2 при рН 9,7.

0,25 мл раствора валина концентрацией 2 10 M и 0,25 мл реагента, который готовят смешиванием 0,1 мл раствора о-фталевого альдегида концентрацией 14,4 мг/мл в этиловом спирте, 0,1 мл этанольного раствора дитиотреитола концентрацией 30, 8 мг/мл и 5 мл 0,1 М боратного буфера рН 9,7 (этанольные растворы о-фталевого альдегида и дитиотреитола стабильны неограниченно долго, реагент стабилен в течение дня),помещают " в ячейку спектрофотометра и опрсделяют оптическую плотность при 340 нм стносительно разбавленного в два раза реагента, Оптическая плотность составляет 0,059, что при коэффициенте экстинкции 5700+200 М см отвечает концентрации валина (2,00+.0,07)>

"10 М.

Пример 2. Определение валина при соотношении о-фталевого альдегида и меркаптоянтарной кислоты 1:2 и при рН среды 9,7..

0,25 мл раствора валина концентрао цией 2 10 М и 0,25 мл реагента,, который готовят смешиванием 0,1 мг/мл раствора о-фталевого альдегида конпентрацией 14,4 мг/мл в этиловом спирте, 0,1 мл раствора меркаптоянтарной кислоты в 0,05 М боратном буфере концентрацией 30Ä.0 »-г/мл и 5 мл 0,1 М боратного буфера рН 9,7, помещают в ячейку спектрофотометра и измеряют оптическую плотность по примеру 1.

Оптическая плотность составляет 0 079 что при коэффициенте экстинкции 7700+

Ф

„!00 М см отвечает концентрации

1 валина (2,00"0,03) ° 10 М.

Пример 3. Определение лизина при рН 9,7 и соотношении реагентов

1: 1 (о=фталевый альдегид и дитиотреитол).

Оптическую плотность определяют по примеру 1. Реагент готовят смешиванием 0,1 мл раствора о-Аталевого альдегида в этиловом спирте, 0,05 дитиотреитола в этаноле (концентрации по примеру 1) и 5,5 мл 0.,1 M боратно"

45 го буфера рН 9,7. Концентрация лиэина 1 10 H. Оптическая плотность сос— 5 тавляет 0,054„ что при коэфАициенте экстинкции 10400+100 M см соответствует концентрации лизина (1,00+

+0,07). !О M.

Пример 4. Определение лизина при pFI 9,7 и соотношение реагентов

1:1 (о-фталевый альдегид и меркаптоянтарная кислота).

Оптическую плотность определяют по примеру i. Реагент готовят смешиванием 0,1 мл раствора о-фталевого альдегида в этиловом спирте, 0,05 мл раствора меркаптоянтарной кислоты в

0,05 N боратном буфере (концентрации по примеру 2) и 5,5 мл 0,1 М боратного буфера при рН 9,7. Концентрация лизина 1 10 N. Оптическая плотность составляет 0,057, что при коэффициенте экстинкции 11100" 300 М см отвечает концентрации лизина (1,00+ 0 03)"

«1О М.

Пример 5. Определение глицина при рН 9,7 и соотношении реаген(о-фталевый альдегид и дитиотреитол).

Готовят реагент и определяют оптическую плотность по примеру 1. Концентрация глицина 2.10 M. Оптическая плотность составляет 0,054, что при

-I коэффициенте экстинкции 5200 100 М вЂ” 1

«см соответствует концентрации глицина (2,00+0,04) 10 М.

Пример 6. Определение глицина при рН 9,7 и соотношении реагентов

1:2 (о-фталевый альдегид и меркаптоянтарная кислота).

Реагент готовят по примеру 2 ° Оптическую плотность определяют по примеру 1. Концентрация глицина 2 10 М.

Оптическая плотность 0,071 при козА1 1 фициенте экстинкции 6900+100 М см отвечает концентрации (2,00 0,03)

° !О М.

Пример 7. Определение гистидина при рН 9,7 и соотношении реагентов 1:2 (о-фталевый альдегид и дитиотреитол).

Реагент готовят и оптическую плотность измеряют по примеру 1. Концентрация гистидина 2 10 М, Оптическая плотность 0,052 при коэффициенте экстинкции 5000+100 М см соответствует кони нтрации гистидина (2,00+

+ 0,04)х10 М.

Пример 8. Определение гисти дина при рН 9,7 и соотношении реа1361477 гентов 1:2 (о-фталевый альдегид и мер- буфере (концентрации по примеру 2) каптоянтарная кислота). Реагент гото- и 3,5 мл 0,1 М боратного буфера при вят по примеру 2, рН 9,7. Концентрация лизина 2.10 N.

Оптическую плотность определяют по ) Оптическая ппотность составляет примеру 1. Концентрация гистидина 0,057, что при коэффиц .==..тc- "копи!к2 1 0 М. Оптическая плотность 0 066 ции 11100+300 М см тзе:а т конг; при коэффициенте экстипкции 6500 + центрации лизина (1,00 0,04) -10 . !.

-!

+100 M см соответствует концентра- П р и м е. р 13. Определен,« а.:м .и— ции (2,00+0,03) 10 M.

10 на при рН 11 и соотношении реагентов

Пример 9. Определение аргили- 1:2 (о-фталевый альдегид и дитиона при рН 9,7 и соотношении реагентов треитол).

1:2 (о-фталевый альдегид и дитиотреи- Оптическую плотность определяют тол). и реагент готовят по примеру 1. Конг

Реагент готовят и оптическую плот- 15 центрация аланина 5 10 М. Оптичесность измеряют по примеру 1. Концент- кая плотность при измерении через рация аргинина 2 10 И. Оптическая

-5

5,15 и 30 мин составляет 0,058, плотность составляет 0Ä067, что при 0,048 и 0,030, что при коэффициенте -! х коэффициенте экстинкции 6500."200 М " экстинкции 2300 100 И см отвечает

«см отвечает концентрации аргинина 20 концентрации (5,0+0,1) 10 It; (4,0+ (2,00+0,06)-10 М, +0,1) 10 М; (1,3 :0,2)- 10 М.

Пример 10. Определение аргини- Пример 14. Определение валина при рН 9,7 и соотношении реаген- на при рН 8 и соотношении реагентов тов 1:2 (о-фталевый альдегид и меркап- 1:2 (о-фталевый альдегид и меркаптотоянтарная кислота). 25 янтарная кислота).

Реагент готовят по примеру 2. Оп- Оптическую плотность определяют тическую плотность измеряют по при- по примеру 1. Реагент готовят по прпмеРУ 1. КонцентРациЯ аРгинина 2 10 М. меру 2. Концентрация валина 3 10 M, Оптическая плотность 0,084 при коэф- Оптическая плотность при пзмерении фициенте экстинкции 8200!200 M см 3Q через 5, 15 и 30 мин составляет соответствует концентрации (2,00+ 0,060, 0,048 и 0,028, что при коэффи+0,04) 10 М, циенте экстинкции 4000+100 И см

Пример 11. Определение лизи- отвечает концентрации (3,0 О, 1)» на при рН 9,7 и соотношении реагентов « 10 М; (2,4+0,1).10 И; (1,4 0,2)

1:10 (a-фталевый альдегид и меркапто- ° 10 М;. янтарная кислота). Пример 15. Определение валина

Оптическую плотность определяют при рН 9,6 и соотношении о-фталевого по примеру 1. Реагент готовят смеши- альдегида и дитиотреитола 1:0,5. ванием 0,1 мл.раствора о-фталевого Оптическую плотность определяют по альдегида в этиловом спирте и 0,5 мл !и примеру 1. Реагент готовят смешивараствора меркаптоянтарной кислоты нием 0,1 мл раствора о-фталевого альв О, 1 н боратном буфере (концентрации дегида концентрацией 14,4 мг/мл в по примеру 2) и 5 мл 0,1 М боратного этаноле и 0,025 мл раствора дитиобуфера с рН 9,7. Концентрация лизина треитола концентрацией 30,8 мг/мл в

1 ° 10 М. Оптическая плотность 0,055 4 этиноле и 5 мл 0,1 И боратного буфера при коэффициенте экстинкции 11100+ +с рН 9,6. Концентрация валина 4 10 И.

+300 M ° см отвечает концентрации Оптическая плотность составляет 0,060, лизина (0,96+0,03).10 M. что при коэффициенте экстинкции 2800

Пример 12. Определение лизина +200 M см отвечает концентрации при рН 9,7 и соотношении реагентов << валина (4,0=!.0,2) 10 М.

1."40 (о-фталевый альдегид и меркапто- Пример 16. Определение глициянтарная кислота). на нри рН .9,5 и соотношении реагентов

Оптическую плотность определяют 1:2 (о-фталевый альдегид и меркаптб при 340 нм через 20 мин после смеши- янтарная кислота). вания реагента и анализируемой пробы, >> Реагент готовят по примеру . ОпРеагент готовят смешиванием 0,1 мл тическую плотность определяют по при-5 раствора о-фталевого альдегида в эти- меру 1. Концентрация глицина 2 ° 10 И. ловом спирте и 2 мл раствора меркап- Оптическая плотность 0,071 при коэф— тоянтарной кислоты в 0,05 M боратном фициенте экстинкции 6900+100 M cM

136

Составитель С.Хованская

Редактор A.Êîçoðèç Техред А.Кравчук Корректор И.Зрдейи

Заказ 6219/44 Тираж 776 Подписное.ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изббретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 отвечает концентрации (2,004 0,03)> у10 M.

Таким образом, предложенный способ по сравнению с известным позволяет повысить точность и чувствительность (до 0 001 мг/мл) определения.

Формула изобретения

Способ количественного определения у -аминокислот путем обработки анали1477 B зируемой пробы смесью о-фталевого альдегида и тиосоединения при рН 8-11 с последующим фотометрированием полученного раствора, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности и чувствительности определения, в качестве тиосоединения используют дитиотреитол или меркаптоянтарную кислоту при молярном соотношении о-фталевого альдегида и тиосоединения 1:1...1:10.