Способ определения инсулина в эритроцитах
Изобретение относится к медицине , точнее к эндокринологии, предназначено для сравнения количества инсулина, связьшаемого эритроцитами крови человека и животных в условиях физиологической нормы и при различных нагрузках. Цель изобрете- . ния - повышение точности способа. Дпя этого пробу крови здорового донора центрифугируют при 2000 д 10 мин.Отбирают плазму и слой лейкоцитов .Добавляют к оставшейся эритроцитарной массе физраствор. Центрифугированием отделяют супернатант, повторно отмывают клетки физраствором. Часть эритромассы переносят в физ- . раствор с этанолом в соотношении физраствор - клетки - этанол :0,025. Перемешивая, клетки инкубируют 50 мин. Отделяют эритроциты и отбирают 0,15 мл супернатаита, подвергают его электрофорезу в 7%-ном полиакриламидном геле (рН геля 8,3; трис-глициновая буферная система рН сила тока 4 мА на трубку) 62 мин до выхода бромфенолового синего из геля, помещенного на 1 ч в 1%-ный р-р красителя амидо-черного 10Б на 7%-ной уксусной кислоте. После отмывания гель денситометрируют на микрофотометре ИФО-450. Подсчет пика инсулина составляет 32- .336 усл.ед. (Л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСГЬ БЛИК
„„80„„1377 36 А 1 (5g 4 G О) N 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCMOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3954449/28-14 (22} 24.07.85 (46) 29.02.88.Бюл. В 8 (71) Черновицкий государственный, университет н Черновицкий медицинс-. кий институт (72) Е.А.Халаим, Л.И.Сандуляк, В.А.Маслянко и О.М.Голубка (53) 616-07 (088.8) (56) ДАМ СССР, 1974, т.219, N 4, с.1020-1021. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИНСУЛИНА В
ЭРИТРОЦИТАХ (57) Изобретение относится к медицине, точнее к эндокринологии, предназначено для сравнения количества инсулина, связываемого эритроцитами крови человека и животных в условиях физиологической нормы и при различных нагрузках, Цель изобретения — повышение точности способа.
Для этого пробу крови здорового донора центрифугируют при 2000 д
l0 мин.отбирают плазму и слой лейкоцитов.Добавляют к оставшейся эритроцитарной массе физраствор. Центрифугированием отделяют супернатант, повторно отмывают клетки физраствором.
Часть эритромассы переносят в физраствор с этанолом в соотношении физраствор — клетки — этанол 1:1:
:0,025. Перемешивая, клетки инкубируют 50 мин. Отделяют эритроциты и отбирают 0,15 мл супернатанта, подвергают его электрофорезу в 7Х-ном полиакриламидном геле (рН геля 8,3;. трис-глициновая буферная система рН 8,9; сила тока " мА на трубку)
62 мин до выхода бромфенолового синего из геля, помещенного на 1 ч в
1Х-ный р-р красителя амидо-черного
10Б на 7Х-ной уксусной кислоте, Qocле отмывания гель денситометрируют на микрофотометре И@О-450. Подсчет площади пика инсулина составляет 32336 усл.ед.
1377736
40
ВНИИПИ Заказ 865/40
Тираж 847 Подписное
Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к эндокринологии, и может быть использовано для сравнительного определения количеств инсулина. связываемого эритроцитами крови человека и животных как в условиях физиологической нормы, при проведении различных нагрузок, так и при различной патологии эндокринной и других систем.
Цель изобретения — повышение точности способа.
Пример 1. 1,5 мл крови эдороаого донора подвергли центрифу-. гироваиию при 2000 об/мин в течение
10 мин. Отобрали плазму и слой лейкоцитов. Добавили к 0,6 мл оставшейся эоитоомассы 6 мл физиологического раствора, Центрифугированием отделили супернатант, повторно произвели отмывание клеток физиологическим раствором. 0,5 мл эритроцитарной массы перенесли в физиологический раствор, содержащий этанол в соотношении физиологический раствор клетки — этанол 1:1:0,025 (0,5 мл эритроцитов, 0,5 мл физиологического раствора, содержащего 0,025 мл этанола) . При перемешивании инкубируют клетки в течение 50 мин.
Отделили эритроциты и отобрали
0,15 мл супернатанта. Супернатант подвергли электфофорезу в 7 -ном полиакриламидном геле (рН геля 8,3; трис-глициновая буферная система рН 8,9; сила тока 4 мА на трубку .
Электрофорез продолжался в течение
62 мин, до выхода бромфенолового синего из геля. Гель помещают на
60 мин в l -ный раствор красителя амидо-черного 10Б на 7 -ной уксус" . ной кислоте, излишки красителя отмывают 7 -ной уксусной кислотой.
После отмывания гель денситометрируют на микрофотометре ИФО-450. Пло" щадь пика инсулина составила
120 усл.ед.
H p и м е р 2. 2,2 мл цельной крови здорового донора центрифугировали и отделили эритроцитарную массу.
К 0,9 мл эритромассы добавили 9 мл физиологического раствора. Отделили клетки центрифугированием. Повторили отмывание, добавив к 0,9 мл эритроцитов 9 мл физиологического раствора. 0,7,мл эритроцитарной массы перенесли в физиологический раствор, содержащий этанол в соотношении
1;1:0 02 {0,7 мл эритроцитов, 0,7 мл физиологического раствора, содержащего 0,028 мл этанола). Инкубируют клетки в указанном растворе в течение 50 мин,Отделяют супернатант и подвергают его электрофорезу в полиакриламидном геле аналогично примеру 1. После окрашивания и отмывания геля проводят денситометрирование.
Площадь пика инсулина составила
336 чсл.ед.
Пример 3. У больного сахарным диабетом взяли 1,6 мл крови.
Провели отмывание эритроцитов физиологическим раствором аналогично указанному в примерах .1 и 2. Отобрали
0,5 мл отмытой эритроцитарной массы и подвергли выдерживанию в физиологическом растворе, содержащем этанол. Соотношение клетки " физиологический раствор .— этанол 0,5 мл
0,5 мл : 0,025 мл. Время экспозиции составляло 60 мин. Отделили супернатант и 0,15 мл его подвергли электрофорезу. После окраски и обесцвечивания провели денситометрирование геля. Площадь пика инсулина составила 32 усл.ед.
Формула изобретения
Способ определения инсулина в эритроцитах путем их отмывания и окрашивания, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, взвесь эритроцитов физиологического раствора и этанола в соотношении 1:1:0,020-0,025 инкубируют в течение 50-60 мин, центрифугируют, супернатант подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле, а содержание инсулина определяют денситометрически.
