Способ получения биомассы коклюшных бактерий

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству вакцинных препаратов. Цель изобретения повышение выхода биомассы и ее антигенной активности. Способ сводится к тому, что инокулят в концентрации 8 12 МОЕ/мл среды выращивают в среде Стейнера Шольта с добавлением аспарагиновой кислоты, лизина, триптофана, метионина и глицина. В процессе выращивания поддерживают величину pH культуральной жидкости (к. ж.) в пределах 7,2 7,4, а концентрацию кислорода от 20 до 30% от полного насыщения. По достижении концентрации бактерий 60 80 МОЕ/мл к. ж. осуществляют сбор биомассы, при этом половину объема к. ж. сливают для отделения биомассы, а оставшийся объем к. ж. доливают равным объемом свежей питательной среды и продолжают процесс культивирования. 1 з. п. ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к культивированию коклюшных бактерий для приготовления вакцины. Целью изобретения является повышение выхода биомассы и ее антигенной активности. П р и м е р 1. Питательную среду готовят на основе среды Стейнера-Шольта с добавлением ростстимулирующей добавки. Состав среды Стейнера-Шольта, г/л: L-Пролин 0,24 L-Глютаминовая кислота 9,0 L-Цистин 0,035 Трис 1,35 Никотинамид 0,025 Аскорбиновая кислота 0,02 Глютатион 0,08 NaCl 2,5 KCl 0,2 KH₂PO₄ 0,5 MgCl₂ x 6H₂O 0,1 CaCl₂ 0,01 FeSO₄ x 7H₂O 0,01 Состав ростстимулирующей добавки, г/л: Аспаргиновая кислота 0,4 Лизин 0,3 Триптофан 0,05 Метионин 0,035 Глицин 0,28 Выращивание коклюшных бактерий ведут с использованием инокулята в концентрации 8-10 МОЕ/мл среды при поддержании величины рН культуральной жидкости 7,2-7,4 и концентрации кислорода от 20 до 30% от полного насыщения среды, сбор биомассы осуществляют по достижении концентрации бактерий 60-80 МОЕ/мл культуральной среды. Для сбора биомассы сливают половину объема культуральной жидкости, оставшуюся культуральную жидкость доливают питательной средой до исходного объема и продолжают культивирование, а последующие сливы культуральной жидкости и доливы питательной среды осуществляют через период, равный времени одной генерации бактерий. Оценка антигенных свойств коклюшных бактерий предусматривает: постановку реакции агглютинации коклюшных бактерий с противококлюшной сывороткой, постановку реакции агглютинации с сыворотками к факторам 1, 2, 3 агглютиногенов коклюшных бактерий, постановку реакции гемагглютинации эритроцитов барана, количественное определение лимфоцитозстимулирующего фактора и видеоспецифического агглютиногена с помощью иммуноферментного анализа. Данные по выходу биомассы и ее антигенной активности, полученные при использовании известного и предлагаемого способов, представлены в табл. 1. П р и м е р 2. Выращивание коклюшных бактерий осуществляют аналогично примеру 1 на среде следующего состава, г/л: Аспаргиновая кислота 0,3 Лизин 0,25 Триптофан 0,04 Метионин 0,025 Глицин 0,25 Среда Стейнера-Шольта 1 л Результаты изучения антигенных свойств коклюшных бактерий представлены в табл. 2. П р и м е р 3. Выращивание коклюшных бактерий осуществляют аналогично примеру 1 на среде следующего состава, г/л: Аспаргиновая кислота 0,5 Лизин 0,35 Триптофан 0,06 Метионин 0,05 Глицин 0,3 Среда Стейнера-Шольта 1 л Результаты изучения антигенных свойств коклюшных бактерий представлены в табл. 3. Использование предлагаемого способа позволяет увеличить выход биомассы более чем в 2 раза, а выход лимфоцитозстимулирующего фактора (коклюшного токсина) в 6 раз.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ КОКЛЮШНЫХ БАКТЕРИЙ путем посева инокулята в питательную среду Стейнера-Шольта с последующим выращиванием в условиях перемешивания и аэрации, сливом культуральной жидкости и сбором целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода биомассы и ее антигенной активности, инокулят засевают в концентрации 8 12 МОЕ/мл среды, выращивание в питательной среде ведут в присутствии ростстимулирующей добавки, содержащей аспарагиновую кислоту, лизин, триптофан, метионин и глицин при следующем количественном соотношении компонентов, г/л: Аспарагиновая кислота 0,3 0,5 Лизин 0,25 0,35 Триптофан 0,04 0,06 Метионин 0,025 0,05
Глицин 0,25 0,3
Среда Стейнера-Шольта 1 л
при поддержании величины рН культуральной жидкости 7,2 7,4 и концентрации кислорода от 20 до 30% от полного насыщения среды, сбор биомассы осуществляют по достижении концентрации бактерий 60 80 МОЕ/мл культуральной жидкости. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что, с целью интенсификации способа, для сбора биомассы сливают половину объема культуральной жидкости, оставшуюся культуральную жидкость доливают питательной средой до исходного объема и продолжают культивирование, а последующие сливы культуральной жидкости и доливы питательной среды осуществляют через период, равный времени одной генерации бактерий.

РИСУНКИ

Рисунок 1