Способ получения @ , @ -бис-(4-хлорфенил)-4/5/- имидазолметанола

Авторы патента:

C07D233/64 - с замещенными углеводородными радикалами, связанными с атомами углерода кольца, например гистидин

Изобретение качается замещенных имидазола, в частности получения oi , об-бис- (4-хлорфенш1)-4 (5)-имидазолметансла , обладающего способностью ингибировать фермент ароматазу, что может быть использовано для лечения и профилактики эстроген-зависимых заболеваний , в особенности рака молочной лселезы у млекопитающих. Цель - создание нового вещества указанного класса с нехарактерной для него активностью. Синтез ведут из соединений формул I и II: N CH-NH-CH C-C(0)OZ (I) С1

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (!Ю (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3911198/23-04 (22) 12.06.85 (31) 621597 (32) 18.06 ° 84 (33) Us (46) 23.05.88, Бюл. 9 19 (71) Эли Лилли Энд Компани (US) (72) Кеннет Стивен Хирш и Гарольд

Меллон Тейлор (US) (53) 547. 785. 785. 07 (088,8) (56) Вацуро В.К., Мищенко Г.Л. Именные реакции в органической химии.

М.: Химия, 1976,-с.154. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ» .,Ы,-БИС- (4ХЛОРФЕНИЛ)-4(5)-ИМИДАЗОЛМЕТАНОЛА (57) Изобретение касается замещенных имидазола, в частности получения Ы оС-бис- (4-хлорфенил) -4 (5) -имидазолме4 11 4 С 07 D 233/64// А 61 K 31/415 танола, обладающего способностью ингибировать фермент ароматазу, что может быть использовано для лечения и профилактики эстроген-зависимых заболеваний, в особенности рака молочной железы у млекопитающих. Цель вЂ” создание нового вещества указанного класса . с нехарактерной для него активностью.

Синтез ведут из соединений формул I и II; и-сн-мн-сн-с-с(o)oz (x> Cl (-Мф( (ll) где Z = С,-С -алкил; Х=С1; Br с пос4 ледующим выделением целевого продукта с т. пл. 110 вЂ” 113 С, брутто ф-ла

С, Н, С1 ь1 0, концентрация ингибирова уеду ния ЕС = 0,05 мкМ при концентрации субстрата 0,1 мкМ и низкой токсичности. 2 табл.

1398774

Изобретение относится к способу получения новых производных имидазола, обладающих способностью ингибировать фермент ароматазу, которые могут быть 5 использованы для лечения и профилактики экстроген-зависимых заболеваний, В особенности рака мопочной железы у млекопитающих.

Цель изобретения вЂ” синтез новых

Производных имидазола, обладающих ак ивностью в качестве ингибиторов ароматаэы, свойство, которое не проявля1 и соединения аналогичного строения.

Пример 1. 4(5)-Фис-(4-фтор- 15 фенил)метил/-1Н-имидазол.

Прибавляют 9,2 r гидрида натрия в

Виде 57 -ной дисперсии в масле к раствору 22 г имидаэола в 200 мл диметилформамида при перемешивании. После 20 окончания реакции, что видно по прекращению вспенивания, при перемешивании прибавляют 22 r 4,4-дифтордифенилметилхлорида. Смесь два часа перемешивают при комнатной температуре. 25 и затем 1,5 ч нагревают на паровой бане. Смесь выливают в смесь льда с водой, прибавляют эфир и разделяют слои. Водный слой промывают эфиром, объединенные. эфирные экстракты про- 30 мывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют и выпаривают. Остаток хроматографируют на силикагеле, элюируя последовательно 10 этилацетата в толуоле, 20 этилацетата в толуоле 3 . ,и смесью 1:1 этилацетата и толуола

;(по 2 л каждой смеси), чтобы получить .1,2 г 2-/бис-(4-фторфенил)метил/имидазола (Rf=0,44, силикагелевые пластины для ТСХ, элюирование смесью 1:1,щ этилацетата и толуола), 14,5 r 1-/бис(4-фторфенил)метил/имидазола (Rf

= 0,30) и 1,99 г целевого 4(5)-/бис(4-фторфенил) метил/имидазола (Rf

=О, 15), Структуры были подтверждены

ЯМР- и ИК-спек тро скоп ией.

Пример 2. 4(5)-/(4-хлорфеннл) (4-фто рфенил) ме тил/имида зола .

Работают по методике примера 1, целевое соединение получают из имидаэола и 4-хлорфенил-4-фторфенилметилхлорида с выходом 3,1 .

Пример 3. о,ы;Бис-(4-хлорфенил) -4 (5) -имидазолметанол.

Готовят реактив Гриньяра иэ 4,7 r магниевых опилок, каталитического количества (четыре капли) 1,2-дибромэтана в 2 мл диэтилового эфира и

25,0 r 4-бромхлорбензола в 100 мл тетрагидрофурана. После примерно двух часов перемешивания прибавляют 5,0 r метил-4-имидазолкарбоксилата в виде раствора в 50 мл тетрагидрофурана.

Смесь кипятят с обратным холодильником в течение часа. Отгоняют тетрагидрофуран и оставшуюся смесь выливают в ледяной раствор хлористого аммония и экстрагируют этилацетатом.

После выпаривания экстракта получают желтое масло, которое очищают хроматографией на силикагеле, элюируя с градиентом этилацетата 15 -ный метанол в этилацетате. Соответствующие фракции собирают, объединяют, выпаривают и кристаллизуют из этилового эфирвЂ” гексана, получают 6,47 r целевого продукта. Перекристаллизовывают 1 г материала из бензола, получают 540 мг продукта с т.пл. 110-113 С.

Анализ для С, Н„С1 N 01

Вычислено: С 60,41; Н 3,79;

N 8,78; Cl 22,21

Найдено, .: С 59,99; Н 4,03;

N 8,54; С1 22,29.

Соединения изобретения являются полезными для профилактики и лечения эстроген-зависимых заболеваний, включая рак молочной железы у млекопитающих, благодаря их способности ингибировать ароматазу была показана при применении модификации метода

Броди, выделенных микросом яичников крыс. В этой тестовой системе микросомы яичников получали из крыс, обработанных гонадотропиновой сывороткой беременных кобыл. Испытуемые соединения прибавляли в реакционные колбы, содержащие 0,1 мкМ 4-андростен3,17-диона, 100000 дпм 1,2(Н)-андростендиода, микросомы и NADPH генерирующую систему. Концентрация испытуемых ингибиторов находилась в интервале между 0,005 и 10 мкМ., В этом опыте ароматизация андростендиона приводит в результате к получению (Н)-Н О, которую выделяют экстракцией образцов хлороформом и обработкой водной фазы активированным углем для удаления свободного стероида. Образцы обсчитывают на жидкостном сцинтилляционном спектрометре и определяют процент ингибирования по сравнению результатов с контролЬными образцами, инкубированными без ингибитора. Мощность определяют, основываясь на концентра1398774 ции ингибитора в мкМ, требующейся для получения 50Х ингибирования ферментов активности (ЕС. ), когда концентрация ч субстрата (андростендиона) составляет г, 0,1 мкМ. Величины ЕС для некоторых соединений приведенной выше формулы сведены в табл, 1. и

Благодаря свс ей способности ингибировать фермент ароматаэу соедине- 10 ния предлагаемого изобретения способны ингибировать синтез эстрогенов у млекопитающих, что делает эти соединения полезными при лечении эстрогензависимых заболеваний, таких как рак молочной железы. Эта активное ть была О показана in viva на следующей тестовой системе.

Ингибирование синтеза эстрогена у крыс, 20 д

Неполовозрелые самки крыс Вистар (45-55 r) были разделены на контрольную и тестовые группы по 4-5 животных в каждой. Испытуемые соединения вводили семь дней ежедневно путем ис- 25 кусственного кормления в кукурузном масле. Контрольные животные получали кукурузное масло без испытуемого соединения. Начиная с четвертого дня ис- Н пытаний всем животным, обработанным испытуемым соединением, и половине с контрольных животных делают подкожную инъекцию 1 О мг тестостерон пропионата в кукурузном масле. Оставшиеся о контрольные животные получают только

35 эквивалентный объем. кукурузного масла.

На седьмой день испытаний крысы, обработанные тестостерон пропионатом, л получают подкожно 100 мкКю (Н)-тесз тостерона в 50 мкл смеси 3:1 (объем/ 40 объем) солевого раствора и этанола. яв

Через два часа животных умерщвляют отрезанием головы, Изолируют матку, обрезают чуждую соединительную ткань 45 и взвешивают. Как суммировано в табл,2 у животных, обработанных кукурузным маслом, вес матки меньше, вни представляют собой нестимулированный или негативный контроль. У контрольных животных, обработанных тестостерон пропионатом, эстрогены, продуцированные ароматизацией, стимулируют матку, приводя в результате к увеличению ее веса. Соединения, которые иигибируют прохождение ароматизации, заметно снижают вес матки по сравнению с контролем, обработанным тесто- стероном.

Яичники крыс, обработанных (Н)3 естостероном, вырезают, очищают от ужеродной ткани и гомогениэируют v, 5 мл 1, 0 мМ калийфссфатного буфера, одержащего 3,0 мМ МяС1 6 Н О, 320мМ ахарозы и 0,25Х Тритона Х-100 (пэооктилфениловый эфир полиэтиленглиоля, Ром энд Хаас) при рН 6,5. Экстагируют стероиды яичников 1,5 мл смеи 9:1 (объем/объем) толуола и этаола, к которой было прибавлено 2500 мкг каждого з немеченных экстраиола, эстриола и эстерона, и приблиительно 1000 дпм (С)-эстрадиола. бразцы подвергают вихревому перемеиванию, центрифугируют при 500 g в ечение 10 мин и органическую фазу пееносят в коническую колбу. Проводят ве дополнительных экстракции по той е методике. Собранные органические кстракты выпаривают для последующей онкослойной хроматографии.

Осаждают белки яичников добавлеием 5,0 мл этанола к оставшейся водой фазе, После инкубирования в течео ие ночи при 4 С образцы центрифуируют при 1500 g в течение 10 мин. адосадочный слой отбрасывают и шаик осадка растворяют в 0,3 н гидрокsge калия. Определяют белок по метоихе Бретфорда.

Повторно растворяют органический статок иэ каждой иэ проведенных выше кстракций в смеси 9:i (объем/объем) ихлорметана и метанола. Раствор кажого образца наносят на отдельную сипсагелевую пластину для тонкослойной роматографии, которая содержит флюосцирующий индикатор. Пластины проляют сначала смесью 160:38:1,5:0,5 (объем/объем/объем/объем) дихлорметанэтилацетат(-метанол)уксусная кислота на расстоянии 3 см от верхней части пластины, После сушки на воздухе пластины проявляют вторично в смеси

180:19:1 (объем/объем/объем) дихлорметан(метанол)гидроксид аммония. Пластину сушат на воздухе и исследуют при 254 нм в УФ-свете.

Отмечают видимые пятна и пластины обрызгивают примулином (0,001Х в смеси

4:1 объем/объем ацетон-вода) по методике Райта, которая позволяет идентифицировать дополнительные стероиды при 365 нм УФ-света.

Пятна соскабливают с пластины, используя пипетку Пастера, заполнен1398774 нуо стекловатой, присоединенную к вакуумной линии. Стероицы элюируют непосредственно в сцинтипляционные колбочки добавлением 0,2 мл дихлорметана после двух промывок, каждая по

2рО мл метанола. Выпаривают органический растворитель и 13 колбочки добавляют 10,0 мл сцинтилляционной жицкости (Бексан-Риди Солв NA), Образцы анализируют с помощью жидкостн(>й сцинтилляционной спектрометрии.

Коррекцию делают на основе извлечен я (С)-стероида. Кснцентрации сте<4 рЬидов выражают как фемтомоли на мил- 15 лиграмм белка, Соединения предлагаемого изобретения могут быть введены любым из многочисленных путей, включая оральный, подкожный, внутрнмышечный, внут- 20 ривенный, через кожу и ректальный, Соединения обычно применяют в виде фармацевтических композиций. Такие омпозиции готовят по хорошо известым методикам и они состоят из пример 25 о 1-95 мас.%, по крайней мере, одного активного соединения указанной вып1е формулы (I).

Такие фармацевтические композиции содержат в качестве активного ингре- 30 диента соединение указанной выше формулы и фармацевтически приемлемый нос, итель. При изготовлении композиций активный ингредиент должен быть хорошо смешанным с носителем, или разбавляется носителем, или же заключен цнутри носителя, который может быть

Д виде капсул, мешочков, бумаги или другого контейнера, Когда носитель

Служит в качестве разбавителя, он 40 может быть твердьм, полутвердым или жидким материалом, который работает как носитель, экципиент или среда для активного ингредиента. Так, композиции могут быть в виде таблеток, пи- 45 люль, порошков, лосьонов, саше, облаток, эликсиров, эмульсий, растворов, сиропов, суспензий, аэрозолей (как в твердой, так и в жидкой среде), машей, содержащих по крайней мере

10 мас,Х активного соединения, мягких или твердых желатиновых капсул, суппозиториев, стерильных растворов для инъекций и стерильных расфасованных порошков. 55

Некоторыми примерами подходящих носителей, экципиентов и разбавителей являются лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, крахмалы. камедь, фосфат кальция, альгинаты, силикат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, целлюлоза, трагант, желатин, сироп, метилцеллюлоза, мети- и пропилоксибензоаты, тальк, стеарат магния, вода и минеральное масло. Композиции могут дополнительно содержать смазки, смачивающие агенты, эмульгаторы и суспензирующие агенты, консерванты, подслащиватели или ароматиэирующие агенты.

Композиции могут быть составлены таким образом, чтобы обеспечить быстрое поддерживающее или замедленное выделение активного ингредиента после введения пациенту при использовании проц дур, известных на данном уровне техники, Для орального введения соединения предлагаемого изобретения могут быть смешаны с носителями и разбавителями, сформованными в таблетки или заключенными в желатиновые капсулы. Альтернативно смеси могут быть растворены в жидкостях, таких как 10Х-ный водный раствор глюкозы, изотонический солевой раствор, стерильная вода или

r,п., и введены внутривенно или инъекцией. При желании такие растворы могут быть лиофилизированы и храниться в стерильной ампуле, чтобы их можно было легко перевести при добавлении стерильной воды в раствор для внутримышечной инъекции, Соединения предпочтительно формуют в виде единичных форм дозы, каждая доза содержит примерно от 1 до 500 мг обычно 5-300 мг активного ингредиента. Термин "единичная форма дозы" относится к физически дискретным единицам, пригодным для однородной дозировки людям и другим млеко питающим. Каждая единица содержит заранее определенное количество активного материала, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, вместе с требуемым фармацевтическим носителем.

Активные соединения являются эффективными в широком интервале доэ. Например, дневные дозировки обычно на- . ходятся примерно в интервале О, 05вЂ”

300 мг/кг веса тела. При лечении взрослых людей предпочтительным является примерно интервал 0,1 вЂ” 50кг/кг в виде единичной дозы или отдельных доэ. Однако должно быть понятно, что

1398774

Формула изобретения

Способ получения ес,оС-бис-(4-хлорфенил) -4 (51 -имидазолме танола формулы

0Н

«к caoz

20 где Z вЂ” С, вЂ” С -алкил;

25 подвергают взаимодействию с реактивом

Гриньяра формулы

С1 - вЂ” Щ<, 30 где Х вЂ” хлор или бром; с выделением целевого продукта.

Та блица1

ЕС

Соединение по примеру

0,05

Концентрация соединения в мкМ, требующаяся для достижения 507.-ного ингибирования активности ароматазы при концентрации субстрата

0,1 мкИ. количество действительно вводимого соединения должно определяться врачом в зависимости от релевантных условий, включая состояние пациента, выбор вводимого соединения, возраст, вес и реакцию индивидуального пациента, тяжесть симптомов у пациентов и выбор пути введения, поэтому приведенные вьппе интервалы ни в коей мере не огра ничивают область изобретения.

Для более полной иллюстрации работы предлагаемого изобретения приводятся примеры рецептур. Примеры являются иллюстративными и ни в коей мере не ограничивают область изобретения. В рецептурах применяются любые из фармацевтических соединений указанной вьппе формулы.

Полученные соединения относятся к категории малотоксичных.

Соединение примера 3 сравнивают с (a,a-бис-(2-метилфенил)-IH-имидаэол4-метанол)по методике испытаний in

vitro ЕС„, для соединения предлагаемого изобретения составляет 0,028 мкМ, а для сравнительного соединениявЂ”

I,075 мкМ. Это доказывает преимущест- . во в отношении биологической активности предлагаемых соединений перед известили.

Влияние соединения формулы (I) на уровень стероидов и вес матки приведено в табл.2.

Cl С i Cl отличающийся тем, что соединения формулы

1398774

Таблица 2.Ф

Средняя концентрация стероида

Доза

Сред" ний

Количество живо тСоединение