Способ выявления субпопуляции лимфоцитов, экспрессирующей опиатные рецепторы

 

Изобретение относится к биологии и медицине, точнее - к имуннологии, предназначено для определения рецепции ли iфoцитaми любых эьздогеннык. и синтет -п;еск11х пептидов, обладаю Ц1-гх; биологической активностью. Цель изобретения - уск-орение и повышение точ и.ости способа. Для этого из периферической крови выделяют лимфоциты, которые инкубируют с иccлeдyeмы пептидом (контролем лимфоциты, инкубируемые с забуференным физраствором ) . Измеряют злектрофоретическую подвижность (ЭП) контрольных и опытных лиьйоцитов. Проводят графическое разделение на фракции по ЭП (1) низкоподвижные В - лимфо1 {ты, 2) среднеподБижные Ту - лимфоциты, 3) высокоподвижные Tni - лимфоциты, соответственно НЭП, СЭП, ВЭП). Проводят анализ изменения соотношения объемов с разной ЭП по сравнению с контролем, 2 табл, 2 ил.. ю

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧКСНИХ СПУЬЛИН др л G 01 1, 33/48

ГОСУДАРСТЬЕНБЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ и ОТНРЬП ИЯМ

ПРИ ГИНТ Ссащймзй? ЯиещийФФыюю . южи!5иийех .жюйм — %2Ts —, .. - - .ы:. - ..:: о- — — - -* . лж — с 2хь1лю ежй\ 3-Зла::Р . - 1. ъ рецепции лимфоцитами любых эндогенн11х и синтетических пепт11дов, обладающих б. ологической активностью. Цель изоб(21) 3975704/28-14 (22) . 05. 11. 85 (46) 30. С;.89. Бюл. % 28 (71) ИркутскI-.é государственный медицинский ин т итут и Сибирский филиал

Всесоюз11ого кардиологического научного центра А11Н ГССР (72) P.., кворцова, E.Ã.ÊHðäåé, В,Д. Слепу|1кин, А, П,Федосеев и A.H.ÇI амировская (53) 612.015(088.8) (56) А.А,Зозуля, Э.К.Паукова, H.Â.ÊîñT. Бестник АМН СССР. 1982, 1, с. 28 — 32. (54) СПОСОБ БЬИБЛЕНИЯ СУБПОПУЛЯЦИИ

ЛИМФОЦИТОВ, ЭКСПРЕС СИРУИШЕЙ ОПИАТ НЬЬЕ

РЕЦЕПТОРЫ (57) И-,обретение относится к биологии и медицине, точнее — к имуннологии, предназначено для определения

Из=бретение относится к области биологии и медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения рецепции лимфоцитами любых эндогенных и синтетических пептидов, обладающих биологической ак— тивностью, Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа.

Из периферической крови выделяют лимфоциты, их инкубируют с исследуемым пептидом (контролем служат лимфоциты, инкубируемые с забуференным физиологическим раствором ЗФР). Из— меряют электрофоретическую подвижность (ЭП) контрольных и опытных лимфоцитов. Проводят графическое раздере-, е ния — у ск оре ние и повыше нис точности способа. Лля этого из перифе-рической крови вь1пеляют лимфоциты, которые инкубируют с Elec JIEäóåìûì пеп тидом (контролем с;1ужат лимфоциты, инкубирусмые с забуференным физраствором). Измеряют =-лeктpофорети1eскyю подвижность (ЭП) контрольных и опытных лимфоцитов. Проводят графическое разделение на фракции по ЭП (1) низкоподвиж11ые Б — л лмфодлты, 2) среднеподвижные T) — .1имфоциты 3) высо1 копогьвижные Tt;, — лимфоциты, соответствснно НЭП, СЭП, ВЭП). Проводят анализ изменения соотношения объемов с разной ЭП по сравнению с контролем.

2 табл, 2 фщр ление на фракции по ЭП (1) низкоподвижные 5 -лимфациты, 2) среднеподвижные Tg-лимфоииты,. 3) высокоподвижные

Т,,-лимфоцитн, соответственно НЭП, СЭП . 4аю

ВЭП, Анализируют изменения соотношения Ь д об ьемов с разной ЭП па сравнению с контролем.

Пример 1. Используют человеческие и мышиные лимфациты, выделенные из периферической крови здоровых доноров и мы111ей линии С57 ВЬ/6. Выam деленис лимфоцитов из периферической крови проводят на градиенте плотности фиколл-верографина (d 1,077

1,078). Фракцию лимфоцитов дважды отмывают в ЗФР (рН 7,2-7,4) и инкубио руют в течение 1 ч при 3 7 С с равным ветст>?У7>1и;ей вел.. -1«..o! 1 .",! . (. УД Я Г1 О li O. 1>»:: :- С С «Н 1,;>М П Е, О. 1: .; т

Г>ерсраспредел:ние з;.11>!> за!1ное с Редел«ней, I.-: Ã; : —,;

КOC НУ 1O(71 Г ТТ;l,1 «7>1 >! ОР а .; . лп наиболее Об;.;.".н 11«о:;, «!:с.;,: .«.1м.-: клетками. В роз,л-., ат.:., - н,:,7

ЛаР ГЕ il d. - 1: О >;1 (. : i (> Р !,, j i <1 низкои злектро>1>оре : ."c..;; ..-:.,: ..ствю (77ЗП) I c (1711(, СООТНОН1ЕIIП(К Об: .>(C. ТTC(r > (; :, ( ческой подв11>к;-:Ост 1:1;-н..(> - н> г. с-:.. «,-.177(:1 ,7!И«111,7 C ) > В > / 6 з ° с 1. . >1.. .7>

II0 СЛЕ I «K —.ба iir!;"

По оси ас>списс -- зле! . «С(! .>

ПОДВИ>КНОСтн Kri тО:. (: .J

С . >! 7"

ОСИ Орднпат -rliC! (О К O j; ции л!1м(17>О1>итон "7;;i«7«!: Г13! .,:. .,, ..>г на с>1 в с > орону Н >П1, 1> О.,".. предпс>ЛОже«иo > .—; .iiir!1.:ii р>:? : "с> :. (>н к даларги у - 11 7;маннс: на росс>орети>(е спи —;.О >в(1 7(н,с>; 7- «: >- ",.,:,.", -> . (,. пр ОБ Одвт «на:ic! > и 111«!й-: oi! 11: с >1::, . и -".

ПИИ (1 ДЕ !ай ГI!1- .Oi" I 1(>I Е т O! ., . 1 >: Н,7 . тек же живот<:ьг с, .", о o p";:" н:! "".I I(>(> ;>?ìoì ис ледуем7>!> .:.i! !:>: 1»; 3 -il

ЦРН i i>с .ПИИ ЗО "7К> !, . С .. . !Ь!> . >11.1 II Т ече нпс ri >!>(б .. 7 : .: 1; ;;, ..>11> >(?" >С, r В>rO 1 г>в;1 с.. >; "., : ..:.; ... .. 17!7>лр-времен«: ч,= :с:"т ь нолуче«171 ».,;;",,О 1«!то(7

IIHK 1i6ИР УЮ 1 -i(!»",»«1 1;,",.;; -, .; ОН i 1 л ем, ПО(-л,-. HHKyc. u .! i. 11к.,;;, .-:.; -. Г а !!- =

ЪГ

371 к.ioTDI !" 1!Ос(О>!И1 i зл.:.: .:.. ;(>J : >с"1?и> ее

КОГО из мер!> т ."Jiнног(> Iи (i; (. " . О ::-> П rr моквант-2> -.:, ав. ометичес к с .-с:,:.:и:

ПР1-! 2 1 (; „Нат;Р;1>КЕ7«1, - >-1:=. с К 1 (>Да,; сОстав I IP". 6 1 >1-, В>„ >!1 ., :; > .

7 „>-7, (7 r П )3!y !O1

ПРЕД СЛЕ «1Б! К 111) К >. . Р! . 1 > С . : > .: . 71 ное сс>дер>канис> кl е "oic в .,:"."..- «зи с различной )П. Ос;тнс "c T i, «1 >О! В- „Т,.

И T,(ЛИМБУС ЦИ", " 1, i>1 i Л(ЛС . За! . Ji C C .× 1

1 рецепции ис следу емьх пе>п "..;и>-.:, простой адсорбции > рс>-„(;-с >-,;, ";, и >!: "менты с зритро «7г! а; н> (:: 7;:.. .>о . а и. селезенки того >кс :>и;(1 т 1(В качестве иснмтуем!.iK с(>т(1.,!)71 ист(ользуют си«тетиче. кис даларгин (! 1 и Rn 11 ес «Ос з«кефалин.

В табл. ) пр71всде(ны . О1 н: - нз

МЕНЕ«Ив OTНОСhTPЛ=.НО .:..;:.-.;;: С> УЛН Ц7«й1 ЛИМ(107!И то>3 "11 1 > > -, С -,"1 C

СИГ>тети(еск ого э(н с 1>;> 1 > Г.:: р(: "

Стpс I>K " !и, . 3 (.11 увели>1е«11я с. с;,(! ?. !а > «1;1 ;, (О !! 7;, Ой-а. 1 C? Д;, > 1 ;> О >.ОГ>Š— - .; С-ОКО. !IOr

7 т

1 Г

;.Л:;,:,:;> .;= .IИМ-I

<.. 7 З 7.

r -! i, j н»,, 1>;,1,-,, р;

: ... :з т «. >o::з;. 1;:! .; -Ое

СН > >Н i. 1;, . 3 а1 К .:. Е: 1! i. >Он . -. 7! И.">фС

i> «

?К 1. ., >! ;1 -. ->:. C:,;, j О

Г>.зУ

Таблица

Действие даларгина 41 на лимфоциты периферической крови и селезенки мыщей линии С 57 В /6

Фракция лимфоцито с 3П 10 м2 ° с В

Кровь

14, 8+О, 60 38, 5+3, 30

25, 5+0,, 61 3 i, 1+О, 85

58, 6+О, 79 27, 5+1 90

Селезенка

1 (О, 45-0 90) В

6,97 с0, 001

«:0, 001 (0t 001

11 (0,. 95-1., i 0) Т . о

111 (., 15-1, 40) Т

5,50 — 15, 17

1 (О 45 О 90) В 61>6+О 95 72 О+О 81

11 (0,95-1,30) Т,-Т 37,0 i, 15 28,0+1,30

=0,ОО1

-5, 18

О, 001

П р и м е ч а н и е . Увеличение объема популяции с соответствующей ЗП по сравнению с контролем

Таблица 2

Действие естественного лей-энкефалина и cëí-.е".è÷åñêèõ энкефалинов (даларгин 41 и 89) на лимфощ ты периферической крови человека и мышей линии С 57 BL/6

Ис сл

Человеческие лимфоциты

2, 63 (0,05

2,42 (0,05

-4, 91 <0, 001

0,9 )0,05

Даларгин

12, 4+О, 93 3 О, 0+6, 70

11 31,8+1,33 48,0+6,57

111 55,7+2,09 12,4+8 53

1 16,3+3, 60 20, 5+2, 83

Даларгин

45, О+3, 51

58,4+4,32

2,41

<О, 05

39,6+2,33 21,6+4,32

-3,63 (О, 001 цитов человека варьирует от 3,63 до

6,20 на лимфоцитах линейных мьш ей от 6,63 до i5,,17.

Фор мула из обре тения

Способ выявления субпопуляции лимфоцитов, экспрессирующей опиатные рецепторы путем инкубации смеси популяций клеток с опиатами с последующей регистрапией физико-химических пока00277 6 зателей клеток в сравнении с контролем,отличающийся тем, что, с целью ускорения и повьппения

5 точности способа регистриру-ют электрофоретическую поцвкюность популяций, определяю г их относительный объем B смеси, и при наличии изменений в объеме после инкубации относительно контроля, определяют наличие субпопуляции с

". 0027/!!родо,вкение табл.

I 2 ; i- .. (.

30 -,+О 98 !,8+0,68

-1,,58 0,05

9., 5- 1,. О=..

26,. 9 1,, 1С

64,9+0,93

Лей-энкефа лн

-2, 2А «О, 05

6, 2 -.О, 001

I LfII1IH HI >ID л имсЪ

ОЦИTI:I

Даларгин

14, 8+О. 60

6,97 . О,ОС1 ,,50: Г, 0!

25, 5- О, 6 8 6- -0 /о )4. О, 60

25, 5+0Ä 61

58, 6+0,, ",«

17 .0 QQ1

8 83 «О 001

Даларгин

4,56 0,001 — 6 63 Π001

Лей-энкефалин

13, О+ О., 9: -,. /+0„87!

-10, 52 . С,, С01

34 Q+1, i

18,9 0,88

52, О+1, 20 71„0-.1 1

1Q.7 -О,С01

Примечание лимфоцитов с 3П ст ,.Q !0 ".Гс ди:1фодито1:, с .т

",10 -io а лимфодито: с . .-3! ..т ФС ° 10 >I " В

l h li0 > 7 "

С "< тавит- .ëü Л.Лкуреев

Техред 1, С.:-:ийнык

Редактор ",,Ãeðàñимова

Коррс -cc,"ор В. Гирí;к

Зак аз 4908 Т ир аж / Ь -. Подписное

ВНИИПИ Гос ударе гве иио, о комите Tiii со и обретениям H откр, тиям вр Г?НТ ССС -

1 1303 >, . !о1с квд, Ж-3 51 Ра>ус" 1 кая наб., д. ч, 5

Производственно — издательс:с :Й комбив lт ". Т втент, г,. ужгорс д, у:1, Гака зина I ) 1 — фраK JHOW

О,» до

11 — фракди;

Q 9

1 1: -. фввк ди1

11 5;:о 38, 5+3. " О

3 ., 1+0, 82

27, 5-I-1э -G

22, О+О, 56

30,3+0. .74

50. 2+1, 00