Способ получения стабилизированной формы папаина
Изобретение относится к медицине , точнее к биомедицинской химии, касается способа получения стабилизированной формы папаина. Цель изобретения - повышение специфической активности . Для этого порцию альдегиддекстрана (АД) растворяют в 0,02 М фосфатного буфера рН 6,0 и добавляют цистеин (Ц) в 1 мл того же буфера. Молярное соотношение АД:Ц 1:100. Через 10 мин перемешивания добавляют очищенньш папайи в 1 мл 0,02 М фосфатного буфера рН 6,0. Смесь инкубируют при перемешивании 20 ч при 4°С, затем восстанавливают продукт боргидратом натрия . Затем модифицированное производное фермента вьщеляют на системе ультрафипьтрации и мофйльно высушивают, С носителем связывается 90% белка от исходного количества, сохраняемая препаратом эстеразная активность 30%. Содержание белка 25%, кол-во SH- групп на моль фермента 2,16, (Л с
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (5D 4 С 12 И 11/08
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3946133/28-14 (22) 16.08.85 (46) 07.09.88. Бюл. У 33 (71) Всесоюзный кардиологический научный центр АМН СССР, Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им.Гельмгольца и
Институт фармакохимии им, И.Г.Кутателадзе (72) А.В.Максименко, Л,Н,Надирашвили, А.Д.Ромащенко, Г.С.Еркомаишвили, Г.B.Àáóëàäçå, А.В.Гоциридзе, Д.Г,Чантурия, В.П.Торчилин и В.Н.Смирнов (53) 612.0)5(088,8) (56) Давыдов А.Б,, Майгут Ю.Ф,, Хромов Г.Л. Разработка высокоэффективного способа лечения глазных бо-. лезней, создание и внедрение в меди. цинскую практику нбвых лекарственных средств — глазных, лекарственных пленок . МЗ СССР, M., 1978, с.3. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАБИЛИЗИРОВАННОИ ФОРМЫ ПАПАИНА
„„5U„„1421770 А1 (57) Изобретение относится к медицине, точнее к биомедицинской химии, касается способа получения стабилизированной формы папаина. Цель изобретеФ ния — повышение специфической активности. Для этого порцию альдегиддекстрана (АД) растворяют в 0,02 M фосфатного буфера рН 6,0 и добавляют цистеин (Ц) в 1 мл того же буфера. Молярное соотношение АД:Ц = 1:100. Через
10 мин перемешивания добавляют очищенный папаин в 1 мл 0,02 М фосфатного буфера рН 6,0. Смесь инкубируют при о перемешивании 20 ч при 4 С затем восстанавливают продукт боргидратом натрия. Затем модифицированное производна» фермента выделяют на системе ультрафильтрации и мофнльно высушивают, С носителем связывается 90% белка от исходного количества, сохраняемая препаратом эстеразная активность 30%, Содержание белка 25%, кол-во SHгрупп на моль фермента 2,16, 1421770
Предлагаемый способ получения мо» дифицированных альдегиддекстраном водорастворимый иммобилизованный препарат молекулярной массы 55-85 .тыс. с остаточной каталитической активностью 30-80 от первоначальной, когда с носителем связывается до 90 . белка, содержание SH"ãðóïï 2,0-30,0 и
Формула изобрете ния
Способ получения стабилизированной формы папаина путем его присоединения к носителю, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения специфической активности, в качестве носителя используют альдегиддекстран:цистеин в соотношении
1:(100-1000), диализуют, инкубируют с папаином и проводят обработку боргидратом натрия.
Составитель С.
Техред M.Морге
Мельникова итал Корректор М.Васильева
Редактор В,Данко
Заказ 4391/25 Тираж 520 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проекткая, 4
Изобретение относится к медицине, а именно к биомедицинской химии, и касается способа получения стабилизированной формы папаина, 5
Цель изобретения — повышение специфичной активности.
П.р и м е р 1. 100 мг альдегид декстрана (АД) растворяют в 3 мл ,0,02 М фосфатного буфера рН 6,0 и до- 10 б@вляют 24 мг цистеина (Ц) в 1 мл того же буфера. Молярное соотношение
АД:Ц 1:100. Через 10 мин перемешивания добавляют 20 мг очыценного папаина в 1 мл 0,02 М фосфатного буфера 15 (рН 6,0). Смесь инкубируется прн перемешивании в течение 20 ч при 4 С, е затем проводят восстановление продукта боргидридом натрия. После этого модифицйрованное производное фермен- 20 та выделяется на системе ультрафильтJ рации Amicen с фильтром УМ-20 и лиофильно высушивается, В результате эксперимента с носителем связывается
90 белка от исходного количества, 25 сохраняемая препаратом эстеразная активность 30 . Содержание белка 25, количество SH-групп на моль фермента 2,16, Пример 2. Процесс осуществля- 30 ется так же, как в примере 1, эа исключением того, что на 100 мг АД добавляется 72 мг цистеина, молярное соотношение АД:Ц = 1:300. С носителем связывается 90Х белка, сохраняемая, эстераэная активность 70, содержание белка 25, количество SH-групп на моль фермента 4,32, Полученный препарат является оптимальным по своим свойствам в ряду предлагаемых мо- 40 дифицированных производных папаина, Пример 3. Процесс осуществляется так же, как в примере 1, за исключением того, что на 100 мг АД добавляется 120 мг цистеина, молярное 45 соотношение АД:Ц = 1:500. С носителем связывается 90Х белка, сохраняемая эстераэная активность 45, содержание белка 25Х, количество SH-групп, на моль фермента 20.
Пример 4, Процесс осуществляется так же, как в примере 1, за исключением того, что на 100 мг АД добавляется 240 мг цистеина, малярное соотношение АД:Ц = 1:1000. С носителем связывается 90 белка, сохраняемая эстеразная активность 45%, содержание белка 25, количество SH"ãðóïï на моль фермента 33. производных папаина с защитным цистеиновым окружением позволяет получать при исходном соотношении альдегидцек-. стран:цистеин от 1:100 до 1:1000, При местном применении для лечения поражения глаз папаина, полученного по предлагаемому способу, уже к концу1
3-х суток констатируется практически полное исчезновение крови в передней камере глаза, в то время как препарат по известному способу обладает менее выраженным литическим эффектоми его воздействие на поражение глаз менее эффективно (тотальная гефема залечивается в срок не менее 10 сут), при этом наблюдаются побочные явления;гиперемия коньюнктивы, началь" ные явления. кератита и т,д,
