Штамм бактерий bordetella pertussis, используемый в качестве продуцента экзотоксина

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при получении экзотоксина коклюшных бактерий. Цель изобретения - получение штамма Bordetella pertussis с высокой продукцией экзотоксина. Штамм Bordetella pertussis "Уфа-85" получен путем селекции штамма N 3086, выделенного от больного ребенка, депонирован под номером ГИСк-173. Штамм характеризуется высоким выходом биомассы (85 МОЕ/мл) с содержанием экзотоксина, равным 10,40 мг/л, при выращивании его в жидкой синтетической среде, рН 7,1-7,6. 1 табл.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при получении экзотоксина коклюшных бактерий. Цель изобретения получение штамма Bordetella pertussis c высокой продукцией экзотоксина. Штамм Уфа-85 получен путем селекции штамма N 3086, выделенного от больного ребенка. Штамм депонирован под номером ГИСК-173 и характеризуется следующими признаками. Культурально-морфологические признаки. При окраске по Граму грамотрицательные неподвижные овоидной формы палочки (коккобациллы), располагающиеся отдельно или парами. При выращивании на среде Борде-Жангу с 30% крови человека при 35-36^оС коклюшные бактерии штамма Уфа-85 образуют сероватые, выпуклые, круглые с ровными краями, блестящие, диаметром около 1 мм, окруженные нерезко ограниченной зоной гемолиза колонии. При выращивании на среде КУА (казеиново-угольный агар) при 35-36^оС коклюшные бактерии штамма Уфа-85 образуют мелкие, диаметром около 1 мм, выпуклые, гладкие с ровными краями, блестящие серовато-кремового цвета колонии. При выращивании в жидкой синтетической среде следующего состава, г/л: глютаминовая кислота 9,0, аспарагиновая кислота 0,4, лизин 0,3, триптофан 0,05, метионин 0,035, цистин 0,035, глицин 0,28, трис 1,35, кальций хлористый 0,01, железо сернокислое закисное гидрат 0,01, магний хлористый гидрат 0,1, калий фосфорнокислый однозамещенный 0,5, глютатион редуцированный 0,08, никотинамид 0,025, аскорбиновая кислота 0,02, дистиллированная вода до 1 л, при 35-36^оС коклюшные бактерии штамма Уфа-85 образуют суспензию молочно-белого цвета. При реакторном культивировании коклюшных бактерий штамма Уфа-85 в синтетической питательной среде приведенного состава при рН 7,1-7,6, 35-36^оС и поддержании концентрации кислорода от 20 до 40% от полного насыщения среды коклюшные бактерии образуют суспензию молочно-белого цвета с содержанием бактерий до 120 МОЕ/мл. Серологические свойства. Коклюшные бактерии штамма Уфа-85 агглютинируются антибактериальной противококлюшной сывороткой до ее титра. По результатам реакции агглютинации с факторными противококлюшными сыворотками относятся к серотипу 1.2.3. Физико-биохимические свойства. Размножение коклюшных бактерий штамма Уфа-85 происходит при температуре от 35 до 37^оС и рН от 6 до 8 с оптимумом 7,2-7,4. Не утилизируют углеводы, не разжижают желатину, индола не образуют. В качестве источника аминного азота и углерода используют аминокислоты, наибольшее значение из которых в метаболизме играют глютамин, пролин, аланин, цистин. Продуцируемые вещества. Наряду с экзотоксином в культуральной среде после удаления клеток выявляются: гемагглютинин, термолабильный токсин, эндотоксин, агглютиногены 1, 2, 3. Методы их количественного учета не разработаны. Биологические свойства. Суспензия коклюшных бактерий штамма Уфа-85 при введении животным обладает гистаминсенсибилизирующим, лейкоцитозстимулирующим и дермонекротическим действием, а также индуцирует образование агглютинирующих антител. Вирулентность. Культура коклюшных бактерий штамма Уфа-85 вирулентна для мышей при внутримозговом заражении 0,01-0,015 МОЕ. Использование Bordetella pertussis штамма Уфа-85 для получения экзотоксина иллюстрируется следующим примером. П р и м е р. Сухую культуру коклюшных бактерий штамма Уфа-85 восстанавливают на среде Борде-Жангу с 30% крови человека путем посева на чашки. Период выращивания для первой генерации 2-3 суток. Затем с чашки делают пересев на пробирку со средой Борде-Жангу и инкубируют при 35-36^оС в течение 48 ч. Восстановленную культуру засевают в синтетическую плотную питательную среду приведенного состава с 1,5% агара Дифко. Смытую с поверхности агара суспензию используют для заражения реактора. В реактор, содержащий синтетическую жидкую питательную среду вышеприведенного состава без добавления агара, вносят инокулят в дозе 5-8 МОE/мл культуральной жидкости. Периодическое глубинное культивирование ведут при 35-36^оС при поддержании рН культуральной среды, равного 7,2-7,4, и концентрации кислорода от 20 до 40% от полного насыщения среды. При достижении концентрации бактерий 80-90 МОЕ/мл культивирование прекращают. Клетки от культуральной жидкости отделяют сепарированием или микрофильтрацией в тангенциальном потоке. Содержание коклюшного токсина в культуральной среде определяют с помощью иммуноферментного анализа. Сравнительные данные по уровню токсинопродукции коклюшными бактериями известных производственных штаммов и штамма Уфа-85 представлены в таблице. Штамм Уфа-85 коклюшных бактерий обладает высоким уровнем токсинопродукции, превышающим в 3,5-10 раз уровень токсинопродукции известных производственных штаммов в условиях реакторного культивирования. Штамм может быть использован для получения экзотоксина коклюшных бактерий в целях получения вакцины, а также в других целях, предусматривающих получение экзотоксина коклюшных бактерий в экспериментальных и производственных условиях.

Формула изобретения

Штамм бактерий Bordetella pertussis ГИСК - 173, используемый в качестве продуцента экзотоксина.

РИСУНКИ

Рисунок 1