Способ определения токсичности лизосомотропных химических веществ

 

Изобретение относится к биохи- НИИ. Цель изобретения -,упрощение и . ускорение способа. Фракцию лизосом инкубируют в 0,7 М растворе сахарозы при 45-50 С и регистрируют изменение оптической плотности до и после добавления в среду инкубации лизосом исследуемого вещества. Если значение отношения первого показателя к второму больше 1, то значит исследуемое вещество обладает протекторным лизосомотропным действием. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН дц 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

IlPH ГКНТ СССР (21) 4037229/28-14 (22) 14. 03. 86 (46) 28.02.89. Бюл. У 8 (71) Университет дружбы народов им. Патриса Лумумбы (72) С.П.Сяткин и В.А.Фролов (53) 612.015(088.8) (56) Покровский А.А., Тутяльян В.А.

Лизосомы. M.: Наука, 1976, с. 310. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ

ЛИЗОСОМОТРОПНЫХ ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения токсичности химических веществ.

Цель изобретения — упрощение способа и ускорение способа.

Цель достигается за счет подбора физико-химических факторов, совокупное действие которых вызывает необходимую . степень лабилизации лизо- > сом т.е. около 50%. Интервальные значения, указанные в формуле факторов, выбраны с учетом этого обстоятельства. Так, снижение концентрации раствора сахарозы вызывает увеличение степени лабилизации лизосом (табл. 1), а снижение температурыуменьшение (табл. 2).

Пример 1 ° В работе использо" вали интактных самцов беспородных белых крыс массой 120-180 r после

48 ч голодания. Печень брали у декапитированных животных, промывали на льду ледяным физиологическим раствором, промокали бумажными фильтÄÄSUÄÄ 1462193 A1 (57) Изобретение относится к биохймии. Цель изобретения -, упрощение и ускорение способа. Фракцию лизосом инкубируют в 0,7 М растворе сахарозы о при 45-50 С и регистрируют изменение оптической плотности до и после добавления .в среду инкубации лизосом исследуемого вещества. Если значение отношения первого показателя к второму больше 1, то значит исследуемое вещество обладает протекторным лизо- . сомотропным действием. 2 табл. е

2 рами, тщательно очищали от соединительной ткани и взвешивали. Обогащенную фракцию лизосом получали методом дифференциального центрифугирования.

Раствор сахароэы, содержащий 1 мМ,ЭДТА, готовили на фосфатно-цитратном буфере, рН которого доводили до 7 «>иеВ концентрированным раствором Na0H, «фф»

Производили исследования влияния ка- фф даверина на стабильность интактных ф,р изолированных лизосом. «>»»» «

Пробу инкубировали в течение

5 мин в 0,7 M растворе сахарозы о рН 7 при 50 С ° Скорость распада ли-, > эосом V относительно контрольного

- » значения равна 17,0 (Д /мин) 10

В пробу добавляли кадаверин до кон. центрации 1 мМ и инкубировали анало-. гичным образом. Скорость лиэиса лизосом V составила 4,5 (Д /мин)

10 . Отношение V„ /V около 4, т.е. более 1 ° Следовательно, исследованное вещество обладает протекторным

1462193

Таблица 1

Влияние молярности раствора сахароэы на стабильность лиз ос ом.

Ф Молярность Степень раэрушеп/п раствора ния лизосом, % сахарозы,М

56

63

0,075

0,7

0,65

0,6

15 4

П р и м е ч а н и е. пробы инкубируют при 50 С в растворе сахарозы указанной молярности РН 7 в течение

5 мин.

1 Таблица 2

Влияние температуры инкубационной среды на стабильность изолированных лизосом.

Формула изобретения

Температура инкубационной среды, С

Степень разрушения лизосом,

К и/и

1

35, 4

6

40.10,3

11,4

37

0

6 5

9,3

11

Составитель А.Агуреев

Техред N. Ходанич Корректор. С. Патрушева

Редактор Н. Горват

Заказ 667/41 Тираж 788 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская »a6., д. 4/5

Производственно †издательск комбинат "Патент", r.Óærîðoä, ул. Гагарина,101 лизосомотропным действием и не токсично в этом плане для организма.

Пример 2. Способ выполняют как в примере 1. В пробу добавляют вместо кадаверина дезоксихолат натрия до концентрации, равной 0,1 .. Степень лабилизации лизосом составила

76 . Отношение степени лабилизации этих частиц при инкубации в указанных в примере 1 условиях к степени лабилизации, вызванной дезоксихолатом натрия 55 /76 — менее 1 ° !

Следовательно данное вещество вызывает разрушение лизосом и оказывает при попадании в клетки ткани токI (сическое действие на организм.

Пример 3. Способ выполняют как в примере 1. Вместо кадаверина в пробу добавляли додецилсульфат натрия до конечной концентрации О, 1 .

Степень лаб илиз ации была близка к

100% (95%) . Отношение 55 /95 менее

1. Следовательно, данное вещество также как и предыдущее токсично для . организма животного.

Способ определения токсичности лизосомотропных химических веществ путем исследования физико-химических cBQHcTB лиэосом9 о T л и ч а ю шийся тем, что, с целью упройения и ускорения способа, исследуют стабильность,лизосом путем инкубации их в 0,7 М сахарозе при температуре инкубационной среды 45-50 С, при этом регистрируют изменение оптической плотности полученной суспензии в минуту до и после добавления в среду инкубации лозосом с исследуемого вещества и при значении отношения первого показателя к вто-, рому менее единицы определяют токсичность.

П р и м е ч а н и е. пробы инкубируют при указанной температуре в раст45 воре сахарозы 0,7 М РН 7 в течение

5,мин.